申请/专利权人：豪夫迈·罗氏有限公司

申请日：2017-06-19

公开（公告）日：2021-10-26

公开（公告）号：CN109414448B

主分类号：C12N15/113(20100101)

分类号：C12N15/113(20100101);C12Q1/70(20060101);C12Q1/6851(20180101);A61K31/7088(20060101);A61P31/20(20060101)

优先权：["20160617 EP 16175045.0"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2021.10.26#授权;2019.06.21#实质审查的生效;2019.03.01#公开

摘要：本发明涉及鉴定预防、改善和或抑制乙型肝炎病毒HBV感染的化合物的方法，其中将降低PAP相关结构域5PAPD5和或PAP相关结构域7PAPD7的表达和或活性的化合物鉴定为预防、改善和或抑制HBV感染的化合物。本发明还提供用于治疗和或预防HBV感染的PAPD5或PAPD7的抑制剂；以及包含PAPD5抑制剂和PAPD7抑制剂的组合制剂，用于同时或相继用于治疗或预防HBV感染。本发明还包括用于治疗和或预防HBV感染的药物组合物、以及监测治疗HBV感染期间的治疗成功的方法。

主权项：1.包含核酸分子的组合物用于制备治疗和或预防乙型肝炎病毒感染的药物的用途，其中所述核酸分子抑制PAP相关结构域5的表达和或活性，所述乙型肝炎病毒也缩写为HBV，所述PAP相关结构域5也缩写为PAPD5。

全文数据：用于减少PAPD5或PAPD7mRNA治疗乙型肝炎感染的核酸分子技术领域本发明涉及鉴定预防、改善和或抑制乙型肝炎病毒HBV感染的化合物的方法，其中降低PAP相关结构域5PAPassociateddomaincontaining5，PAPD5或PAP相关结构域7PAPassociateddomaincontaining7，PAPD7的表达和或活性的化合物被鉴定为预防、改善和或抑制HBV感染的化合物。本发明还提供了用于治疗和或预防HBV感染的PAPD5或PAPD7抑制剂。具体地，本发明鉴定了核酸分子，如反义寡核苷酸或RNAi剂作为PAPD5或PAPD7的抑制剂以及这些包含PAPD5抑制剂和PAPD7抑制剂的组合制剂，用于同时或相继用于治疗或预防HBV感染。本发明还包括用于治疗和或预防HBV感染的药物组合物，以及监测HBV感染治疗期间治疗成功的方法。背景技术乙型肝炎病毒HBV是包膜的、部分双链的DNA病毒。紧凑的3.2kbHBV基因组由四个重叠的开放阅读框ORF组成，其编码核心、聚合酶Pol、包膜和X蛋白。PolORF最长，包膜ORF位于其中，而X和核心ORF与PolORF重叠。HBV的生命周期具有两个主要事件：1从松弛环状RCDNA生成闭合环状DNAcccDNA，和2前基因组RNApgRNA逆转录产生RCDNA。在宿主细胞感染之前，HBV基因组作为RCDNA存在于病毒体内。已经确定HBV病毒体能够通过非特异性结合存在于人肝细胞表面上的带负电荷的蛋白聚糖Schulze,Hepatology,46,2007,1759-68以及通过HBV表面抗原HBsAg与肝细胞牛磺胆酸钠协同转运多肽NTCP受体的特异性结合Yan,JVirol,87,2013,7977-91而进入宿主细胞。病毒感染的控制需要对宿主先天免疫系统进行严密监视，该先天免疫系统可以在感染后数分钟到数小时内应答，以影响病毒的初始生长并限制发展成慢性和持续性感染。尽管目前可获得基于IFN和核苷酸类似物的治疗，但HBV感染仍然是世界范围内的主要健康问题，其涉及估计3.5亿具有较高肝硬化和肝细胞癌风险的慢性携带者。肝细胞和或肝内免疫细胞响应HBV感染分泌的抗病毒细胞因子在感染肝脏的病毒清除中起重要作用。然而，由于病毒采取多种逃逸策略来抵抗宿主细胞识别系统和随后的抗病毒应答，慢性感染的患者仅显示出弱的免疫应答。许多观察表明，几种HBV病毒蛋白可以通过干扰病毒识别信号系统和随后的干扰素IFN抗病毒活性来抵抗最初的宿主细胞应答。其中，HBV空亚病毒颗粒SVP，HBsAg的过度分泌被认为参与维持慢性感染患者CHB中观察到的免疫耐受状态。持续暴露于HBsAg和其他病毒抗原可导致HBV-特异性T-细胞缺失或进行性功能损伤Kondo,JournalofImmunology1993,150,4659–4671；Kondo,JournalofMedicalVirology2004,74,425–433；Fisicaro,Gastroenterology,2010,138,682-93。此外，据报道HBsAg通过直接相互作用抑制免疫细胞如单核细胞、树突细胞DC和自然杀伤NK细胞的功能OpdenBrouw,Immunology,2009b,126,280-9；Woltman,PLoSOne,2011,6,e15324；Shi,JViralHepat.2012,19,e26-33；Kondo,ISRNGasteroenterology,2013,ArticleID935295。HBsAg定量是慢性乙型肝炎预后和治疗反应的重要生物标志物。然而，在慢性感染患者中很少观察到HBsAg减少和血清转换的实现，但这仍然是治疗的最终目标之一。目前的疗法如核苷酸类似物是抑制HBVDNA合成但不针对降低HBsAg水平的分子。即使长期使用核苷酸类似物治疗，也只表现出与天然观察到的HBsAg清除相当的弱的HBsAg清除在-1％-2％之间Janssen,Lancet,2005,365,123-9；Marcellin,N.Engl.J.Med.,2004,351,1206-17；Buster,Hepatology,2007,46,388-94。乙型肝炎e抗原也称为HBV包膜抗原或HBeAg是由乙型肝炎感染的细胞分泌的病毒蛋白。HBeAg与慢性乙型肝炎感染有关，并被用作活动性病毒性疾病和患者传染程度的标志物。乙型肝炎病毒前核心或HBeAg的功能尚不完全清楚。然而，众所周知，HBeAg在病毒持续感染中起关键作用。HBeAg被认为通过作为免疫调节蛋白发挥功能来促进HBV慢性化。特别地，HBeAg是分泌的辅助蛋白，呈现减弱宿主对细胞内核衣壳蛋白的免疫应答Walsh,Virology,2011,4111:132-141。HBeAg作为促进HBV持续感染的免疫耐受原发挥作用，并且考虑到可溶性HBeAg穿过胎盘，其可能在子宫内发挥功能Walsh,Virology,2011,4111:132-141。此外，HBeAg下调：i控制细胞内信号传导的细胞基因；和iiToll-样受体2TLR-2，以抑制对病毒感染的先天免疫应答Walsh,Virology,2011,4111:132-141。在没有HBeAg的情况下，HBV复制与TLR2通路的上调相关Walsh,Virology,2011,4111:132-141。因此，HBeAg在调节病毒宿主相互作，以影响宿主免疫应答中具有显著作用Walsh,Virology,2011,4111:132-141。因此，降低HBeAg阳性患者群中的HBeAg可导致HBV特异性免疫功能障碍的逆转Milich,1997,J.Viral.Hep.4:48–59；Milich,1998,J.Immunol.160:2013–2021。此外，分泌的HBeAg在引发T-细胞耐受方面比细胞内肝炎核心抗原HBcAg显著更有效，HBeAg和HBcAg之间分别的splitT细胞耐受以及HBcHBeAg特异性T-细胞耐受的克隆异质性可能对天然HBV感染、特别是对于前核心阴性慢性肝炎具有重要意义Chen,2005,JournalofVirology,79:3016-3027。因此，与单独抑制HBsAg的分泌相比，降低HBeAg以及HBsAg的分泌将导致改善对慢性HBV感染发展的抑制。此外，已报道在HBeAg阳性母亲的母胎和新生儿HBV传播病例中，急性感染转变为慢性80％的比例最高Liaw,Lancet,2009,373:582-592；Liaw,Dig.Dis.Sci.,2010,55:2727-2734；和Hadziyannis,2011,Journalofhepatology,55:183-191。因此，降低孕妇的HBeAg不仅可以降低患者的感染程度，还可以抑制其孩子慢性HBV感染的出现或发展。因此，在HBV治疗中，存在抑制病毒表达、特别是抑制HBsAg和HBeAg分泌的未被满足的医疗需求Wieland,S.F.&F.V.Chisari.JVirol,2005,79,9369-80；Kumar等人JVirol,2011,85,987-95；Woltman等人PLoSOne,2011,6,e15324；OpdenBrouw等人Immunology,2009b,126,280-9。例如，WO03022987在表7A中公开了1298个基因，其在丙型肝炎阳性组织中上调。提到的基因之一是拓扑异构酶相关功能蛋白4TRF4，AF089897。AF089897也称为TRF4-2，其非常类似于本文SEQIDNO：4的880至2340位。PAPD5片段在丙型肝炎阳性细胞中轻微上调的观察结果并未提供任何抑制PAPD5代表有效疗法的迹象。WO03022987A2没有公开任何关于PAPD5片段在丙型肝炎感染期间起任何关键作用的暗示。此外，HCV和HBV是两种完全不同的病毒，导致具有不同病因、不同进展和不同药物治疗的两种完全不同的疾病。这符合本发明人的观察，即PAPD5和PAPD7抑制剂DHQ和THP对丙型肝炎病毒HCV或HBV外的其他病毒无活性数据未显示。在WO2010040571中，在代谢和肿瘤疾病的细胞增殖中具有潜在作用的一长串其他基因的列表中提及了PAPD5，然而没有提供任何实际证据。在WO2013166264中，在增加病毒复制中具有潜在作用的一长串其他基因的列表中提及了PAPD5，然而没有提供任何实际证据。在WO2017066712中，描述了与端粒疾病的治疗和诊断相关的PAPD5的下调。已经描述了用于该目的的五种shRNA结构。据我们所知，PAPD5或PAPD7的表达从未与HBV感染相关联，也没有针对这些靶标制备修饰的单链反义寡核苷酸。发明目的因此，本发明所基于的技术问题是鉴定和提供改善的用于治疗和或预防HBV感染的手段和方法。通过提供本文描述的并在权利要求中表征的实施方案，解决了该技术问题。附图说明附图显示：图1：使用HBX129653HBX129654化学探针和3个猎物片段的1×1实验的图片。图2：使用HBX129653HBX129654化学探针和PAPD57全长蛋白的1×1实验的图片。图3：使用HBX129653DHQ和MOL653654进行竞争的竞争测定法的图片。图4：使用HBX129654THP和MOL653654进行竞争的竞争测定法的图片。图5：使用HBX129653DHQ和INACT653INACT654进行竞争的竞争测定法的图片。包括MOL653作为阳性对照。图6：使用HBX129654THP和INACT653INACT654进行竞争的竞争测定法的图片。包括MOL653作为阳性对照。图7：AHBV感染的dHepaRG中SiRNA敲低KDPAPD5和PAPD7导致HBV表达降低。用HBV感染分化的HepaRG细胞，并在HBV感染前一天和感染后第4天用针对PAPD5、PAPD7或针对两者的siRNA各25nM处理。在第11天收获上清液，通过ELISA测量上清液中分泌的HBsAg和HBeAg的水平，并归一化至未处理的对照。随后测量细胞毒性和基因表达的抑制，并且也归一化至未处理的对照。B进行与A中该相同的实验，除了仅测量上清液中分泌的HBsAg水平。图8：表示在实施例4中测试的寡核苷酸降低HeLa细胞培养物中PAPD5表达的能力。每个寡核苷酸由点表示，通过染色体位置指示其在PAPD5mRNA上的位置。寡核苷酸浓度为5和25μM，如每个图右侧所示。图9：表示在实施例5中测试的寡核苷酸降低HeLa细胞培养物中PAPD7表达的能力。每个寡核苷酸由点表示，通过染色体位置指示其在PAPD7mRNA上的位置。寡核苷酸浓度为5和25μM，如每个图右侧所示。图10：表示与使用组合中存在的单个寡核苷酸20μM获得的抑制相比，用靶向PAPD5和PAPD7的组合寡核苷酸各20μM在HBV感染的HepaRG细胞中对HBsAg的抑制。用剥裸gymnosis进行该测定法。图11：表示与使用组合中的单个寡核苷酸500nM获得的抑制相比，用靶向PAPD5和PAPD7的组合寡核苷酸各500nM在HBV感染的HepaRG细胞中对HBsAg的抑制。用转染进行该测定法。发明内容本发明的一个方面涉及包含用于治疗和或预防乙型肝炎病毒感染的核酸分子的组合物，其中该核酸分子抑制PAPD5的表达和或活性。特别地，本发明涉及包含抑制PAPD5的表达和或活性的核酸分子和抑制PAPD7的表达和或活性的另一核酸分子的组合配制的组合物，用于治疗和或预防乙型肝炎病毒感染。本发明的另一方面涉及抑制PAPD7的表达和或活性的核酸分子。特别地涉及单链反义、siRNA和shRNA分子。本发明的另一方面涉及抑制PAPD5的表达和或活性的单链反义寡核苷酸。特别地涉及包含2’糖修饰的寡核苷酸和硫代磷酸酯核苷间键phosphorothioateinternucleosidelinkages的修饰的反义寡核苷酸。本发明的其他方面是本发明核酸分子的缀合物，能够抑制PAPD5和PAPD7二者表达和或活性的核酸分子的组合制剂和包含本发明分子的药物组合物。本发明的另一方面是鉴定预防、改善和或抑制乙型肝炎病毒HBV感染的化合物或组合物的方法，包括：a.使测试化合物或组合物与表达PAPD5和或PAPD7的细胞接触；b.在存在和不存在该测试化合物或组合物的情况下，测量PAPD5和或PAPD7的表达和或活性；和c.将降低PAPD5和或PAPD7的表达和或活性的化合物或组合物鉴定为预防、改善和或抑制HBV感染的化合物。具体实施方式PAPD5和PAPD7是属于聚合酶β-样核苷酸转移酶超家族的非经典聚腺苷酸-聚合酶。在本发明的上下文中，令人惊讶地显示，通过分析测试化合物是否抑制PAPD5或PAPD7，可以成功地鉴定可用于治疗性干预HBV感染的化合物。或者，换句话说，在所附实施例中将抑制PAPD5或PAPD7或抑制两者鉴定为抑制HBV感染的化合物的功效的指标。所附实施例证明，在材料和方法部分中所示的具有式III的二氢喹嗪酮dihydroquinolizinone化合物本文称为DHQ和如在材料和方法部分中所示的具有式IV的四氢吡啶并嘧啶tetrahydropyridopyrimidine化合物本文称为THP结合PAPD5和PAPD7多肽分别为SEQIDNO：1和2。这些化合物具有在HBV感染期间抑制HBV表面抗原HBsAg的产生和HBVRNA表达的能力WO2015113990A1和WO2016177655。另外，所附实施例显示通过使用siRNA池抑制PAPD5或PAPD7或两者导致抑制病毒表达，特别是抑制HBsAg和HBeAg的分泌以及细胞内HBVmRNA的产生。这些结果直接表明，通过降低PAPD5和或PAPD7的量和或活性例如量，可以预防或治疗即改善和或抑制HBV感染例如慢性HBV感染。本发明的筛选方法因此，本发明涉及筛选方法，其中降低PAPD5或PAPD7的表达和或活性例如表达的化合物或降低PAPD5和PAPD7的化合物的组合被鉴定为预防和或治疗即改善和或抑制HBV感染的化合物。在本发明的优选实施方案中，化合物是RNAi分子，特别是核酸分子，如siRNA、shRNA或反义寡核苷酸。使用本发明的筛选方法，已经使用化合物组合针对其降低PAPD5或PAPD7或两者的表达的能力筛选了240种靶向PAPD5或PAPD7mRNA的LNA修饰的反义寡核苷酸。已经进一步测试其中的一些以确认其单独或组合改善和或抑制HBV感染的能力。本发明的一个方面是鉴定预防、改善和或抑制乙型肝炎病毒HBV感染的化合物或组合物的方法，包括：a使测试化合物与表达PAP相关结构域5PAPD5和或PAP相关结构域7PAPD7的细胞接触；b在存在和不存在该测试化合物或组合物的情况下，测量PAPD5和或PAPD7的表达和或活性；和c将降低PAPD5或PAPD7的表达和或活性的化合物鉴定为预防、改善和或抑制HBV感染的化合物或组合物；任选地d测试化合物组合降低PAPD5和PAPD7的表达和或活性。在本发明的上下文中发现，降低PAPD5或PAPD7的化合物或组合物或降低PAPD5和PAPD7组合的化合物组合导致抑制HBV基因表达和复制；因此，预防、改善和或抑制HBV感染。这样的化合物可导致PAPD5或PAPD7表达和或活性降低10-100％，优选20-100％，更优选30-100％，甚至更优选40-100％，甚至更优选50-100％，甚至更优选60-100％，甚至更优选70-100％，甚至更优选80-100％，最优选90-100％。在本文提供的筛选方法中，设想通过在步骤a中使用表达PAPD5和或PAPD7的细胞如HeLa或HepaRG细胞系来测量即分析确定PAPD5和或PAPD7的表达。可以通过i测定PAPD5和或PAPD7多肽，或ii测定表达PAPD5和或PAPD7的细胞中的转录物水平来测量即分析测定PAPD5和或PAPD7的表达和或活性。在本发明的一个方面，降低PAPD5或PAPD7表达的化合物例如降低PAPD5表达，或优选降低PAPD5和PAPD7二者的化合物组合被鉴定为预防、改善和或抑制即治疗HBV感染的化合物。在本发明的另一个方面，降低PAPD5或PAPD7多肽活性的化合物例如降低PAPD5的活性，或优选降低PAPD5和PAPD7二者的化合物组合被鉴定为预防、改善和或抑制即治疗HBV感染的化合物。优先考虑降低PAPD5的表达和或活性的化合物或降低分子PAPD5和PAPD7二者的化合物组合被鉴定为预防、改善和或抑制HBV感染的化合物。最优选地，降低分子PAPD5和PAPD7二者的表达和或活性的化合物组合被鉴定为预防、改善和或抑制HBV感染的组合物。上述筛选方法导致鉴定预防、改善和或抑制HBV感染的化合物或化合物组合。优先考虑该化合物改善和或抑制即治疗HBV感染。因此，本文提供的筛选方法可用于鉴定治疗HBV感染的化合物。在本发明的上下文中，PAPD5可以是PAPD5多肽或PAPD5mRNA。在本文提供的筛选方法的上下文中优先考虑PAPD5是PAPD5mRNA。本发明的一个方面涉及本文提供的筛选方法，其中表达PAPD5的细胞含有PAPD5靶核酸，该靶核酸包含或由以下组成：i编码SEQIDNO：1或2的氨基酸序列的核苷酸序列；iiSEQIDNO：4、5或10的核苷酸序列或其天然变体；iii编码与SEQIDNO：1或2具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少98％、甚至更优选至少99％同一性的氨基酸序列的核苷酸序列，其中多核苷酸编码具有聚腺苷酸聚合酶功能的多肽；iv与ii的核苷酸序列具有至少80％同一性、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少98％、甚至更优选至少99％同一性的核苷酸序列，其中由核苷酸序列表达的多肽具有聚腺苷酸聚合酶功能；v编码SEQIDNO：1或2的酶活性片段的核苷酸序列，如编码SEQIDNO：7或8的核苷酸序列；vi编码与SEQIDNO：1或2的酶活性片段的氨基酸序列如SEQIDNO：7或8具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少98％、甚至更优选至少99％同一性的氨基酸序列的核苷酸序列，其中多核苷酸编码具有聚腺苷酸聚合酶功能的多肽；或者vii包含或由SEQIDNO：4、5或10组成的核苷酸序列。在优选的实施方案中，PAPD5靶核酸是mRNA，如前mRNA或成熟mRNA。在进一步的实施方案中，PAPD5靶核酸是包含或由SEQIDNO：4、5或10的核苷酸序列或其天然变体组成的多核苷酸。然而，PAPD5mRNA也可以是包含或由与SEQIDNO：4、5或10具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少98％、甚至更优选至少99％同一性的核苷酸序列组成的多核苷酸，其中多核苷酸编码具有聚腺苷酸聚合酶功能的多肽。在本发明的上下文中，PAPD7可以是PAPD7多肽或PAPD7mRNA。在本文提供的筛选方法的上下文中优先考虑PAPD7是PAPD7mRNA。本发明的一个方面涉及本文提供的筛选方法，其中表达PAPD7的细胞含有PAPD7靶核酸，该靶核酸包含或由以下组成：i编码SEQIDNO：3的氨基酸序列的核苷酸序列；iiSEQIDNO：6或11的核苷酸序列或其天然变体；iii编码与SEQIDNO：3具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少98％、甚至更优选至少99％同一性的氨基酸序列的核苷酸序列，其中多核苷酸编码具有聚腺苷酸聚合酶功能的多肽；iv与ii的核酸序列具有至少80％同一性、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少98％、甚至更优选至少99％同一性的核苷酸序列，其中由核酸序列表达的多肽具有聚腺苷酸聚合酶功能；v编码SEQIDNO：3的酶活性片段的核苷酸序列，如编码SEQIDNO：9的核苷酸序列；或者vi编码与SEQIDNO：3的酶活性片段的氨基酸序列如SEQIDNO：9具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少98％、甚至更优选至少99％同一性的氨基酸序列的核苷酸序列，其中多核苷酸编码具有聚腺苷酸聚合酶功能的多肽；或者vii包含SEQIDNO：6或11的核苷酸序列，或由SEQIDNO：6或11组成的核苷酸序列。在优选的实施方案中，PAPD7靶核酸是mRNA，如前mRNA或成熟mRNA。在进一步的实施方案中，PAPD7靶核酸是包含或由SEQIDNO：6或11的核苷酸序列或其天然变体组成的多核苷酸。然而，PAPD7mRNA也可以是包含或由与SEQIDNO：6或11具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少98％、甚至更优选至少99％同一性的核苷酸序列组成，其中多核苷酸编码具有聚腺苷酸聚合酶功能的多肽。在本发明的上下文中，用于筛选的细胞可以是真核细胞。例如，该细胞可以是酵母细胞或脊椎动物细胞。脊椎动物细胞包括鱼、禽类、爬行动物、两栖动物、有袋动物和哺乳动物细胞。优选地，细胞是哺乳动物细胞，最优选是人细胞。哺乳动物细胞还包括猫、犬、牛、马、山羊、绵羊、猪、鼠，如小鼠和大鼠，以及兔细胞。在本文提供的筛选方法中，“细胞”可以内源性表达PAPD5和或PAPD7或过表达PAPD5和或PAPD7。对于过表达PAPD5和或PAPD7，细胞可以包含表达载体内的编码PAPD5多肽和或PAPD7多肽的核苷酸序列。在优选的实施方案中，细胞包含编码PAPD5多肽的核苷酸序列和编码PAPD7多肽的核苷酸序列。本文提供的筛选方法的细胞可以包含在非人动物中，例如，小鼠、大鼠、兔或雪貂ferret。为本文所述的筛选方法提供的细胞也可称为靶细胞。在本文提供的筛选方法中，其中测量PAPD5多肽和或PAPD7多肽的活性，该PAPD5和PAPD7的活性优选为聚腺苷酸聚合酶功能即聚腺苷酸聚合酶活性。例如，如Rammelt,RNA,2011,17:1737–1746中所述，可以例如通过监测体外的mRNA多腺苷酸化测量多肽例如PAPD5或PAPD7的聚腺苷酸聚合酶功能活性。该方法还可用于在存在和不存在测试化合物的情况下，测量PAPD5和或PAPD7的聚腺苷酸聚合酶功能。简而言之，分别在ATPA、CTPC、GTPG、UTPU或所有四种dNTP的混合物存在下，核糖寡核苷酸A15可与大肠杆菌中表达的重组PAPD5蛋白一起孵育。例如，可以通过使用qPCR、蛋白印迹或MassSpec测量存在和不存在测试化合物的情况下PAPD5和或PAPD7在细胞中的表达。抑制HBV增殖的化合物可以是降低病毒RNA表达、降低病毒RNAHBVRNA衍生的病毒DNAHBVDNA的产生、降低新病毒颗粒HBV颗粒的产生和或引起HBsAg和或HBeAg产生和或分泌的化合物。因此，本发明的一个方面涉及本文提供的筛选方法，其中抑制HBV增殖的化合物抑制HBsAg的分泌、抑制HBeAg的分泌、和或抑制细胞内HBVmRNA或HBVDNA的产生。优选地，抑制HBV增殖的化合物是抑制HBsAg分泌、HBeAg分泌和细胞内HBVmRNA或HBVDNA产生的化合物。例如，当与未处理的细胞或动物或用适当的对照处理的细胞或动物比较时，抑制HBV增殖的化合物可以使病毒RNAHBVRNA的表达、病毒RNA衍生的病毒DNAHBVDNA的产生、新病毒颗粒HBV颗粒的产生、HBsAg和或HBeAg的产生和或分泌降低10-100％，优选20-100％，更优选30-100％，甚至更优选40-100％，甚至更优选50-100％，甚至更优选60-100％，甚至更优选70-100％，甚至更优选80-100％，最优选90-100％。例如，可以通过测量测试化合物是否具有抑制HBsAg和或HBeAg分泌、和或抑制细胞内HBVmRNA或HBVDNA产生的活性来测量对HBV增殖的抑制。可以通过ELISA，例如，根据制造商的说明书使用CLIAELISA试剂盒AutobioDiagnostic测量HBsAg和或HBeAg分泌的抑制。可以通过实时PCR测量细胞内HBVmRNA产生的抑制，例如，如所附实施例中所述。用于评估测试化合物是否抑制HBV增殖的其他方法是通过RT-qPCR测量HBVDNA的分泌，例如，如WO2015173208中所述或如所附实施例中所述；NorthernBlot；原位杂交或免疫荧光。本文提供的筛选方法可另外包括比较测试化合物与对照的步骤。该对照可以是无活性的测试化合物，其中该无活性的测试化合物是不降低PAPD5或PAPD7的表达和或活性的化合物。该无活性的测试化合物对HBV没有活性，例如其不导致抑制HBsAg和HBeAg的分泌，不导致抑制细胞内HBVmRNA的产生。例如，无活性测试化合物可具有超过6μM的HBsAg抑制的IC50值。在本文提供的筛选方法中，无活性测试化合物可以是非靶向反义寡核苷酸、siRNA或shRNA。在测量PAPD5和或PAPD7的表达和或活性的筛选方法中，可以使用如上i中定义的测试化合物。无活性化合物例如可以通过化学修饰和或功能干扰，从活性化合物设计。为了进行本文提供的筛选方法，可以使用公众可获得的或市售的分子文库。因此，在本发明的上下文中，该测试化合物可以是选自以下的核酸分子的筛选文库i单链反义寡核苷酸，优选至少包含在2’上修饰的核苷；或者iisiRNA分子；或者iiishRNA分子。所附实施例证明，通过抑制PAPD5和或PDPD7多肽或mRNA，可有效抑制HBsAg和HBeAg的分泌以及细胞内HBVmRNA的产生。这些数据表明PAPD5和或PAPD7的抑制剂可用于预防和或治疗HBV感染。本领域已经描述了几种在治疗HBV感染中具有一定功效的小分子化合物参见例如WO2015113990A1和WO2016177655。所附实施例首次证明了小分子化合物抗HBV感染的活性和对PAPD5和PAPD7的结合亲和力之间的明确相关性。该发现为设计靶向PAPD5或PAPD7mRNA的核酸分子，获得特别高的抗HBV功效打开大门。使用能够结合脱唾液酸糖蛋白受体ASGPr的缀合物能够将核酸分子直接靶向肝脏。与全身施用的小分子相比，核酸分子将具有不同的PKPD谱和毒性谱。此外，本发明首次表明抑制PAPD5或PAPD7或特别是抑制PAPD5和PAPD7的化合物在抑制HBsAg和HBeAg的分泌以及细胞内HBVmRNA的产生方面具有非常高的活性。与单独降低HBsAg的分泌相比，降低HBsAg和HBeAg的分泌更有效地抑制慢性HBV感染的出现或发展。此外，抑制HBsAg和HBeAg的分泌降低HBV感染者的传染性。此外，降低孕妇的HBeAg也可以抑制其孩子的慢性HBV感染的出现或发展。因此，本发明出乎意料地证明，选择性地使用抑制PAPD5或PAPD7靶核酸的化合物或抑制PAPD5和PAPD7靶核酸的化合物组合，由于更有效地降低HBsAg和HBeAg，导致在治疗HBV感染方面改善治疗成功性。因此，本发明的一个方面是使用一种或多种能够降低PAPD5或PAPD7靶核酸的抑制剂或抑制PAPD5和PAPD7靶核酸表达的化合物组合，治疗HBV感染，特别是慢性HBV感染。在另一个实施方案中，本发明涉及至少两种能够降低PAPD5和或PAPD7靶核酸的抑制剂在降低病毒抗原HBsAg和HBeAg中的用途。因此，本发明涉及用于治疗和或预防HBV感染的PAPD5和或PAPD7抑制剂或抑制剂组合，其中该一种或多种抑制剂独立地选自：a针对PAPD5或PAPD7的一种或多种RNA干扰RNAi分子；b基因组编辑器genomeeditingmachinery，其包含：i位点特异性DNA核酸酶或编码位点特异性DNA核酸酶的多核苷酸；和ii向导RNA或编码向导RNA的多核苷酸。RNAi分子可以独立地选自：a单链反义寡核苷酸；bsiRNA分子；和cshRNA分子；本发明的抑制剂还可以是PAPD5或PAPD7特异性锁核酸LNA分子。设想本发明的抑制剂用于治疗例如改善HBV感染。抑制剂可以是特异性抑制PAPD7的分子。优选地，抑制剂是特异性抑制PAPD5的分子。更优选地，组合抑制剂使得它们抑制PAPD5和PAPD7二者。因此，优先考虑本发明的抑制剂抑制PAPD5或组合本发明的抑制剂使得它们抑制PAPD5和PAPD7二者。最优选地，组合本发明的抑制剂使得它们抑制PAPD5和PAPD7。在本发明的一个方面，组合本发明的抑制剂使得它们抑制PAPD5和PAPD7二者，并且与无药物对照相比即与没有施用药物的细胞或受试者相比，导致HBsAg和或HBeAg的分泌降低至少50％。本发明的抑制剂可以具有低于6μM的抑制HBsAg和HBeAg的IC50值，优选低于5μM，优选低于4μM，优选低于3μM，优选低于2μM，更优选低于1μM，更优选低于0.5μM，最优选低于0.1μM。通过使用位点特异性DNA核酸酶例如Cas9或Cpf1和向导RNA进行的基因组编辑是本领域公知的，并且描述于例如“CRISPR-Cas:ALaboratoryManual”,2016,由JenniferDoudna编辑,ISBN978-1-621821-31-1中。例如，如果该位点特异性DNA核酸酶是Cas9核酸酶，那么基因组编辑器优选地还包括：i至少一种向导RNA，其由至少一种靶序列特异性CRISPRRNAcrRNA分子和至少一种反式激活crRNAtracrRNA分子组成；ii编码i的RNA分子的多核苷酸；iii至少一种向导RNA，其是包含至少一种靶序列特异性crRNA和至少一种tracrRNA的嵌合RNA分子；或者iv编码iii的嵌合RNA的多核苷酸。在一个替代的实施例中，位点特异性DNA核酸酶是Cpf1核酸酶，基因组编辑器优选地还包含：i至少一种包含靶序列特异性CRISPRRNAcrRNA分子的向导RNA；或者ii编码i的RNA分子的多核苷酸。本文提供的PAPD5或PAPD7抑制剂也可以是基因组编辑器，其包含至少一种预组装的Cas9蛋白质-向导RNA核糖核蛋白复合物RNP。在本文中，向导RNA被设计为靶向基因组PAPD5或PAPD7DNA。或者，使用几种向导RNA，从而可以靶向PAPD5和PAPD7的基因组DNA。可以通过非同源末端连接NHEJ将移码敲除突变引入基因组PAPD5和或PAPD7DNA，或通过同源定向修复HDR修饰基因组PAPD5和或PAPD7DNA来实现PAPD5和或PAPD7的抑制。如何诱导这些机制在本领域中是公知的，并且描述于例如Heidenreich,2016,NatRevNeurosci1736-44中。本发明的抑制剂优选为非天然存在的分子。本发明的抑制剂可以是选自RNAi剂的核酸分子，包括siRNA、shRNA、CrisperRNA和单链反义寡核苷酸。优选地，RNAi分子包含至少一种非天然存在的核苷酸，如寡核苷酸硫代磷酸酯、取代的核糖寡核苷酸、2’糖修饰的核苷、LNA核苷、PNA核苷、GNA乙二醇核酸分子、TNA苏糖核酸分子、吗啉代核苷酸或具有修饰骨架的核酸，如聚硅氧烷、2’-O-2-甲氧基乙基-硫代磷酸酯，或具有取代基的核酸，如甲基-、硫代-、硫酸、苯甲酰基-、苯基-、氨基-、丙基-、氯-和methanocarbanucleoside，或促进其检测的报告分子。本发明的抑制剂也可以是天然存在的或非天然存在的小分子或基因组编辑器。在本发明的上下文中，本文提供的抑制剂抑制PAPD5或PAPD7的表达和或活性。例如，本发明的抑制剂可以结合PAPD5靶核酸并抑制PAPD5多肽的活性。在另一个实施例中，本发明的抑制剂结合PAPD7靶核酸并抑制PAPD7多肽的活性。本文优先考虑将抑制剂组合以靶向PAPD5和PAPD7mRNA两者，并抑制PAPD5和PAPD7多肽两者的活性。本发明的抑制剂可以抑制PAPD5或PAPD7的表达；或抑制剂的组合可以抑制PAPD5和PAPD7二者的表达。本发明的化合物如上所述，本发明的抑制剂可以是核酸分子。在本发明的一个方面，本发明的抑制剂是针对PAPD5或PAPD7的RNAi分子。该RNAi分子可以是siRNA或shRNA。例如，本发明的抑制剂可以是针对PAPD5的siRNA，其中该siRNA是以下siRNA中的任何一种或其组合：PAPD5siRNA池L-010011-00-0010；ON-TARGETplusHumanPAPD5：siRNA–1–J-010011-05–靶序列:CAUCAAUGCUUUAUAUCGASEQIDNO:252siRNA–2–J-010011-06–靶序列:GGACGACACUUCAAUUAUUSEQIDNO:253siRNA–3–J-010011-07–靶序列:GAUAAAGGAUGGUGGUUCASEQIDNO:254siRNA–4–J-010011-08–靶序列:GAAUAGACCUGAGCCUUCASEQIDNO:255。本发明的抑制剂还可以是针对PAPD7的siRNA，其中该siRNA是以下siRNA中的任何一种或其组合：PAPD7siRNA池L-009807-00-0005；ON-TARGETplusHumanPAPD7:siRNA–1–J-009807-05–靶序列:GGAGUGACGUUGAUUCAGASEQIDNO:256siRNA–2–J-009807-06–靶序列:CGGAGUUCAUCAAGAAUUASEQIDNO:257siRNA–3–J-009807-07–靶序列:CGGAGUUCAUCAAGAAUUASEQIDNO:258siRNA–4–J-009807-08–靶序列:GCGAAUAGCCACAUGCAAUSEQIDNO:259以上显示了合适的siRNA的靶序列。相应siRNA的序列与这些靶序列直接互补。在本发明的上下文中设想组合制剂可以包含a针对PAPD5的siRNA与b针对PAPD7的siRNA组合，以抑制PAPD5和PAPD7二者的表达。在本发明的上下文中还设想组合制剂可以包含a针对PAPD5的shRNA与b针对PAPD7的shRNA组合，以抑制PAPD5和PAPD7二者的表达。在所述上下文中，a中的shRNA分子可以是以下shRNA分子中的一种或多种在本发明的另一方面，RNAi分子是能够抑制PAPD5或PAPD7表达的反义寡核苷酸。通过与编码PAPD5或PAPD7的靶核酸杂交来实现调节。靶核酸可以是哺乳动物PAPD5，如选自SEQIDNO：4、5和10或其天然变体的序列。靶核酸可以是哺乳动物PAPD7，如选自SEQIDNO：6或11或其天然变体的序列。本发明的寡核苷酸是靶向PAPD5或PAPD7的反义寡核苷酸。在一些实施方案中，本发明的反义寡核苷酸能够通过抑制或下调靶标来调节靶标的表达。优选地，与靶标的正常表达水平相比，这种调节产生至少20％的表达抑制，更优选与靶标的正常表达水平相比至少30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％的抑制。在一些实施方案中，使用HeLa细胞或HepaRG细胞，本发明的寡核苷酸能够在体外抑制PAPD5或PAPD7mRNA的表达水平至少60％或70％。在一些实施方案中，使用HeLa细胞或HepaRG细胞，本发明的化合物能够在体外抑制PAPD5或PAPD7蛋白的表达水平至少50％。在上述筛选方法中描述了可用于测量PAPD5或PAPD7RNA或蛋白抑制的合适的测定法。通过寡核苷酸的连续核苷酸序列与靶核酸之间的杂交触发靶调节。本发明的一个方面涉及反义寡核苷酸，其包含长度为10至30个核苷酸的连续核苷酸序列，其中该连续核苷酸序列至少90％与PAPD5互补。反义寡核苷酸能够降低PAPD5的表达。优选地，反义寡核苷酸包含至少一个2’糖修饰的核苷。本发明的另一方面涉及反义寡核苷酸，其包含长度为10至30个核苷酸的连续核苷酸序列，其中该连续核苷酸序列至少90％与PAPD7互补。反义寡核苷酸能够降低PAPD7的表达。优选地，反义寡核苷酸包含至少一个2’糖修饰的核苷。在一些实施方案中，寡核苷酸包含与靶核酸或靶序列区至少90％互补的连续序列，如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％，或100％互补。在优选的实施方案中，本发明的寡核苷酸或其连续核苷酸序列与靶核酸区完全互补100％互补，或者在一些实施方案中，在寡核苷酸和靶核酸之间可以包含一个或两个错配。在一些实施方案中，寡核苷酸包含长度为10至30个核苷酸的连续核苷酸序列，其与靶核酸区如SEQIDNO：4、5或10中存在的靶序列至少90％互补，如完全或100％互补。在一些实施方案中，寡核苷酸序列与SEQIDNO：10中存在的相应靶核酸区100％互补。在一些实施方案中，寡核苷酸序列与SEQIDNO：4、5或10中存在的相应的靶核酸区100％互补。在一些实施方案中，寡核苷酸包含长度为10至30个核苷酸的连续核苷酸序列，其与靶核酸区如SEQIDNO：6或11中存在的靶序列至少90％互补，如完全或100％互补。在一些实施方案中，寡核苷酸序列与SEQIDNO：11中存在的相应靶核酸区100％互补。在一些实施方案中，寡核苷酸序列与SEQIDNO：6或11中存在的相应靶核酸区100％互补。在一些实施方案中，本发明的寡核苷酸包含或由长度为10至35个核苷酸、如长度为10至30、如11至22、如12至20、如14至20、如14至18、如14至16、如16至20个连续核苷酸组成。在一些实施方案中，寡核苷酸或其连续核苷酸序列包含或由22或更少个核苷酸、如由20或更少个核苷酸组成。应理解，本文给出的任何范围包括范围端点。因此，如果说寡核苷酸包含10至30个核苷酸，则包括10和30个核苷酸。在一些实施方案中，寡核苷酸或连续核苷酸序列包含或由选自材料和方法部分中的表3列出的序列的序列组成。在一些实施方案中，反义寡核苷酸或连续核苷酸序列包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，该核苷酸与选自SEQIDNO：12至131的序列具有至少90％同一性，优选100％同一性参见表3中列出的基序序列。在一些实施方案中，反义寡核苷酸或连续核苷酸序列包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，该核苷酸与选自SEQIDNO：15、18、23、25、26、30、32、39、54、56、58、65、80、88、92、93、111、115、116和118的序列具有至少90％的同一性，优选具有100％的同一性参见表3中列出的基序序列。在一些实施方案中，反义寡核苷酸或连续核苷酸序列包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，该核苷酸与选自SEQIDNO：23、26、54、56、80、93和115的序列具有至少90％的同一性，优选具有100％的同一性。在一些实施方案中，寡核苷酸或连续核苷酸序列包含或由选自材料和方法部分中的表4列出的序列的序列组成。在一些实施方案中，反义寡核苷酸或连续核苷酸序列包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，其与选自SEQIDNO：132至251的序列具有至少90％的同一性，优选具有100％的同一性参见表4中列出的基序序列。在一些实施方案中，反义寡核苷酸或连续核苷酸序列包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，其与选自SEQIDNO：153、155、168、171、172、174、183、184、188、190、191、194、195、197、221、224、229、232、239和244的序列具有至少90％的同一性，优选具有100％的同一性参见表4中列出的基序序列。在一些实施方案中，反义寡核苷酸或连续核苷酸序列包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，其与选自SEQIDNO：172、188、190、229和239的序列具有至少90％的同一性，优选具有100％的同一性。在另一方面，本发明涉及组合制剂，其包含a抑制PAPD5的表达和或活性的核酸分子；b抑制PAPD7的表达和或活性的核酸分子。在特定实施方案中，核酸分子独立地选自本文所述的siRNA、shRNA和反义寡核苷酸。在一些实施方案中，组合制剂包含a靶向选自SEQIDNO：252、253、254和255中的一个或多个的PAPD5靶序列的多个siRNA分子中的一个；b靶向选自SEQIDNO：256、257、258和259中的一个或多个的PAPD7靶序列的多个siRNA分子中的一个。在一些实施方案中，组合制剂包含a靶向选自SEQIDNO：252、253、254和255中的一个或多个的PAPD5靶序列的多个siRNA分子中的一个；b靶向选自SEQIDNO：153、155、168、171、172、174、183、184、188、190、191、194、195、197、221、224、229、232、239和244中的PAPD7靶序列的多个反义寡核苷酸中的一个。在一些实施方案中，组合制剂包含a靶向选自SEQIDNO：15、18、23、25、26、30、32、39、54、56、58、65、80、88、92、93、111、115、116和118中的PAPD5靶序列的多个反义寡核苷酸分子中的一个；b靶向选自SEQIDNO：256、257、258和259中的一个或多个的PAPD7靶序列的多个siRNA分子中的一个。在一些实施方案中，组合制剂包含a靶向选自SEQIDNO：260、261、262、263和264中的一个或多个的PAPD5靶序列的多个shRNA分子中的一个；b靶向选自SEQIDNO：256、257、258和259中的一个或多个的PAPD7靶序列的多个siRNA分子中的一个。在一些实施方案中，组合制剂包含a靶向选自SEQIDNO：260、261、262、263和264中的一个或多个的PAPD5靶序列的多个shRNA分子中的一个；b靶向选自SEQIDNO：153、155、168、171、172、174、183、184、188、190、191、194、195、197、221、224、229、232、239和244中的PAPD7靶序列的多个反义寡核苷酸中的一个。在一些实施方案中，组合制剂包含a反义寡核苷酸或连续核苷酸序列，其包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，该核苷酸与选自SEQIDNO:15、18、23、25、26、30、32、39、54、56、58、65、80、88、92、93、111、115、116和118的序列具有至少90％的同一性，优选具有100％同一性，和b反义寡核苷酸或连续核苷酸序列，其包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，该核苷酸与选自SEQIDNO:153、155、168、171、172、174、183、184、188、190、191、194、195、197、221、224、229、232、239和244的序列具有至少90％的同一性，优选具有100％的同一性。在一些实施方案中，组合制剂包含a反义寡核苷酸或连续核苷酸序列，其包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，该核苷酸与选自SEQIDNO:18、23、25、26、32、39、54、56、80、92、93、116和118的序列具有至少90％的同一性，优选具有100％的同一性，和b反义寡核苷酸或连续核苷酸序列，其包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，该核苷酸与选自SEQIDNO:153、155、172、174、183、188、190、195、197、221、224、229、232和244的序列具有至少90％的同一性，优选具有100％的同一性。在一些实施方案中，组合制剂包含a反义寡核苷酸或连续核苷酸序列，其包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，该核苷酸与序列SEQIDNO：18具有至少90％的同一性，优选具有100％的同一性，和b反义寡核苷酸或连续核苷酸序列，其包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，该核苷酸与SEQIDNO：221的序列具有至少90％的同一性，优选具有100％的同一性。在一些实施方案中，组合制剂包含a反义寡核苷酸或连续核苷酸序列，其包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，该核苷酸与序列SEQIDNO：23具有至少90％的同一性，优选具有100％的同一性，和b反义寡核苷酸或连续核苷酸序列，其包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，该核苷酸与SEQIDNO：172或188的序列具有至少90％的同一性，优选具有100％的同一性。在一些实施方案中，组合制剂包含a反义寡核苷酸或连续核苷酸序列，其包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，该核苷酸与序列SEQIDNO：25具有至少90％的同一性，优选具有100％的同一性，和b反义寡核苷酸或连续核苷酸序列，其包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，该核苷酸与SEQIDNO：174或183的序列具有至少90％的同一性，优选具有100％的同一性。在一些实施方案中，组合制剂包含a反义寡核苷酸或连续核苷酸序列，其包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，该核苷酸与序列SEQIDNO：26具有至少90％的同一性，优选具有100％的同一性，和b反义寡核苷酸或连续核苷酸序列，其包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，该核苷酸与SEQIDNO：183的序列具有至少90％的同一性，优选具有100％的同一性。在一些实施方案中，组合制剂包含a反义寡核苷酸或连续核苷酸序列，其包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，该核苷酸与序列SEQIDNO：39具有至少90％的同一性，优选具有100％的同一性，和b反义寡核苷酸或连续核苷酸序列，其包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，该核苷酸与SEQIDNO：229的序列具有至少90％的同一性，优选具有100％的同一性。在一些实施方案中，组合制剂包含a反义寡核苷酸或连续核苷酸序列，其包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，该核苷酸与序列SEQIDNO：54具有至少90％的同一性，优选具有100％的同一性，和b反义寡核苷酸或连续核苷酸序列，其包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，该核苷酸与SEQIDNO：190或SEQIDNO：232的序列具有至少90％的同一性，优选具有100％的同一性。在一些实施方案中，组合制剂包含a反义寡核苷酸或连续核苷酸序列，其包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，该核苷酸与序列SEQIDNO：56具有至少90％的同一性，优选具有100％的同一性，和b反义寡核苷酸或连续核苷酸序列，其包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，该核苷酸与SEQIDNO：153或SEQIDNO：244的序列具有至少90％的同一性，优选具有100％的同一性。在一些实施方案中，组合制剂包含a反义寡核苷酸或连续核苷酸序列，其包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，该核苷酸与序列SEQIDNO：80具有至少90％的同一性，优选具有100％的同一性，和b反义寡核苷酸或连续核苷酸序列，其包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，该核苷酸与SEQIDNO：153或SEQIDNO：244的序列具有至少90％的同一性，优选具有100％的同一性。在一些实施方案中，组合制剂包含a反义寡核苷酸或连续核苷酸序列，其包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，该核苷酸与序列SEQIDNO：92具有至少90％的同一性，优选具有100％的同一性，和b反义寡核苷酸或连续核苷酸序列，其包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，该核苷酸与SEQIDNO：190或SEQIDNO：232的序列具有至少90％的同一性，优选具有100％的同一性。在一些实施方案中，组合制剂包含a反义寡核苷酸或连续核苷酸序列，其包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，该核苷酸与序列SEQIDNO：116具有至少90％的同一性，优选具有100％的同一性，和b反义寡核苷酸或连续核苷酸序列，其包含或由长度为10至30个的核苷酸组成，该核苷酸与SEQIDNO：155或SEQIDNO：195的序列具有至少90％的同一性，优选具有100％的同一性。寡核苷酸设计寡核苷酸设计是指寡核苷酸序列中核苷糖修饰的模式。本发明的寡核苷酸包含糖修饰的核苷，并且还可以包含DNA或RNA核苷。在一些实施方案中，寡核苷酸包含糖修饰的核苷和DNA核苷。将修饰的核苷并入本发明的寡核苷酸中可以增强寡核苷酸对靶核酸的亲和力。在那种情况下，修饰的核苷可以称为亲和力增强修饰的核苷酸。修饰的核苷也可称为单元unit。在一个实施方案中，寡核苷酸包含至少1个修饰的核苷，如1至8个修饰的核苷，如2至8个修饰的核苷，如3至7个修饰的核苷，如4至6个修饰的核苷。在一个实施方案中，寡核苷酸包含一种或多种糖修饰的核苷，如2’糖修饰的核苷。优选地，本发明的寡核苷酸包含一个或多个2’糖修饰的核苷，其独立地选自2’-O-烷基-RNA、2’-O-甲基-RNA、2’-烷氧基-RNA、2’-O-甲氧基乙基-RNA、2’-氨基-DNA、2’-氟-DNA、阿拉伯糖核酸ANA、2’-氟-ANA和LNA核苷。甚至更优选地，一种或多种修饰的核苷是锁核酸LNA。在进一步的实施方案中，寡核苷酸包含至少一个修饰的核苷间键。在优选的实施方案中，连续核苷酸序列内的所有核苷间键是硫代磷酸酯或硼烷磷酸酯boranophosphate核苷间键。在一些实施方案中，寡核苷酸的连续序列中的所有核苷酸间键是硫代磷酸酯键。在一些实施方案中，本发明的寡核苷酸包含至少一个LNA核苷，如1至8个LNA核苷，如2至8个LNA核苷，如3至7个LNA核苷，如4至6个LNA核苷。在一些实施方案中，本发明的寡核苷酸包含至少一个LNA核苷和至少一个2’取代的修饰核苷。在本发明的一个实施方案中，本发明的寡核苷酸能够募集RNaseH。间隙体gapmer设计在一个优选的实施方案中，本发明的寡核苷酸具有间隙体设计或结构，在本文中也仅称为“间隙体”。在间隙体结构中，寡核苷酸包含至少三个不同的结构区，5’-侧翼、间隙和3’-侧翼，F-G-F’为’5→3’方向。在该设计中，侧翼区F和F’也称为翼区wingregion包含连续的修饰核苷段，其与PAPD5或PAPD7靶核酸互补，而间隙区G包含连续的核苷酸段，当寡核苷酸与靶核酸形成双链体时，该间隙区G能够募集核酸酶，优选核酸内切酶如RNase，例如RNaseH。在优选的实施方案中，间隙区由DNA核苷组成。G区的5’和3’末端侧翼的F区和F’区优选包含非核酸酶募集核苷具有3’内切结构的核苷，更优选包含一种或多种亲和力增强修饰的核苷。在一些实施方案中，3’侧翼包含至少一个LNA核苷，优选至少2个LNA核苷。在一些实施方案中，5’侧翼包含至少一个LNA核苷。在一些实施方案中，5’和3’侧翼区均包含LNA核苷。在一些实施方案中，侧翼区中的所有核苷都是LNA核苷。在其他实施方案中，侧翼区可以包含LNA核苷和其他核苷混合侧翼，如DNA核苷和或非LNA修饰的核苷，如2’取代的核苷。在这种情况下，间隙被定义为至少5个RNaseH募集核苷具有2’内切结构的核苷，优选DNA的连续序列，其5’和3’末端的侧翼为亲和力增强的修饰核苷，优选LNA，如β-D-氧基-LNA。因此，与间隙区相邻的5’侧翼区和3’侧翼区的核苷是修饰的核苷，优选非核酸酶募集核苷或高亲和力核苷。F区F区5’侧翼或5’翼连接G区的5’末端，并且包含、含有或由至少一个修饰的核苷如至少2个、至少3个或至少4个修饰的核苷组成。在一个实施方案中，F区包含或由1至4个修饰的核苷如2至4个修饰的核苷、如1至3个修饰的核苷、如1、2、3或4个修饰的核苷组成。通过在该区的5’末端和3’末端至少具有修饰的核苷来定义F区。在一些实施方案中，F区中修饰的核苷具有3’内切结构。在一个实施方案中，F区中一个或多个修饰的核苷是2’修饰的核苷。在一个实施方案中，F区中所有核苷都是2’修饰的核苷。在另一个实施方案中，除了2’修饰的核苷外，F区还包含DNA和或RNA核苷。包含DNA和或RNA的侧翼的特征在于在F区的5’末端和3’末端与G区相邻具有2’修饰的核苷。侧翼中的DNA核苷应优选不能募集RNaseH。侧翼中具有DNA和或RNA核苷酸的寡核苷酸中5’侧翼F区的长度可以更长，保持如上所述的2’修饰的核苷酸的数目在1至4。在另一个实施方案中，F区中一个或多个2’修饰的核苷选自2’-O-烷基-RNA单元、2’-O-甲基-RNA、2’-氨基-DNA单元、2’-氟-DNA单元、2’-烷氧基-RNA、MOE单元、LNA单元、阿拉伯糖核酸ANA单元和2’-氟-ANA单元。在一些实施方案中，F区包含LNA和2’取代的修饰核苷两者。这些通常被称为混合翼或混合侧翼寡核苷酸。在本发明的一个实施方案中，F区中所有修饰的核苷都是LNA核苷。在另一个实施方案中，F区中所有核苷都是LNA核苷。在另一个实施方案中，F区中LNA核苷独立地选自β-D或α-L构型或其组合的氧基-LNA、硫代-LNA、氨基-LNA、cET和或ENA。在优选的实施方案中，F区在连续序列的5’末端包含至少1个β-D-氧基LNA单元。在进一步优选的实施方案中，F区由β-D-氧基LNA核苷组成。G区G区间隙区优选包含、含有或由4至18，或5至17，或6至16或8至12个能够募集RNaseH核酸酶的连续核苷酸单元组成。G区中能够募集核酸酶的核苷单元在一个实施方案中选自DNA、α-L-LNA、C4’烷基化DNA如PCTEP2009050349和Vester等人Bioorg.Med.Chem.Lett.1820082296–2300所述，二者均通过引用并入本文、阿拉伯糖衍生的核苷如ANA和2’F-ANAMangos等人2003J.AM.CHEM.SOC.125,654-661、UNA解锁核酸如Fluiter等人,Mol.Biosyst.,2009,10,1039所述，通过引用并入本文。UNA是解锁核酸，通常其中核糖的C2和C3之间的键已被除去，形成解锁的“糖”残基。在一些实施方案中，G区由100％DNA单元组成。在进一步的实施方案中，G区可以由DNA和能够介导RNaseH切割的其他核苷的混合物组成。在一些实施方案中，G区中的核苷具有2’内切结构。F’区F’区3’侧翼或3’翼连接G区的3’末端并且包含、含有或由至少一种修饰的核苷如至少2个、至少3个或至少4个修饰的核苷组成。在一个实施方案中，F’区包含或由1至4个修饰的核苷如2至4个修饰的核苷、如1至3个修饰的核苷、如1、2、3或4个修饰的核苷组成。F’区由在该区的5’末端和3’末端至少具有修饰的核苷定义。在一些实施方案中，F’区中修饰的核苷具有3’内切结构。在一个实施方案中，F’区中一个或多个修饰的核苷是2’修饰的核苷。在一个实施方案中，F’区中所有的核苷都是2’修饰的核苷。在另一个实施方案中，除了2’修饰的核苷外，F’区还包含DNA和或RNA核苷。包含DNA和或RNA的侧翼的特征在于在F’区的5’末端和3’末端与G区相邻具有2’修饰的核苷。侧翼中的DNA核苷应优选不能募集RNaseH。侧翼中具有DNA和或RNA核苷酸的寡核苷酸中3’侧翼F’区的长度可以更长，保持如上所述的2’修饰的核苷酸的数量在1至4。在另一个实施方案中，F’区中的一个或多个2’修饰的核苷选自2’-O-烷基-RNA单元、2’-O-甲基-RNA、2’-氨基-DNA单元、2’-氟-DNA单元、2’-烷氧基-RNA、MOE单元、LNA单元、阿拉伯糖核酸ANA单元和2’-氟-ANA单元。在一些实施方案中，F’区包含LNA和2’取代的修饰核苷。这些通常被称为混合翼或混合侧翼寡核苷酸。在本发明的一个实施方案中，F’区中所有修饰的核苷都是LNA核苷。在另一个实施方案中，F’区中所有核苷都是LNA核苷。在另一个实施方案中，F’区中的LNA核苷独立地选自β-D或α-L构型或其组合的氧基-LNA、硫代-LNA、氨基-LNA、cET和或ENA。在优选的实施方案中，F’区在连续序列的3’末端包含至少两个β-D-氧基LNA单元。在进一步优选的实施方案中，F’区由β-D-氧基LNA核苷组成。D’和D”区D’和D”区可以分别连接F区的5’末端或F’区的3’末端。D’或D”区可以独立地包含1、2、3、4或5个额外的核苷酸，其可以与靶核酸互补或非互补。在这方面，本发明的寡核苷酸在一些实施方案中可以包含能够调节靶标的连续核苷酸序列，在其5’和或3’末端侧翼为额外的核苷酸。此类额外的核苷酸可用作核酸酶敏感的可生物裂解接头参见接头的定义。在一些实施方案中，额外的5’和或3’末端核苷酸与磷酸二酯键连接，并且可以是DNA或RNA。在另一个实施方案中，额外的5’和或3’末端核苷酸是修饰的核苷酸，其可以例如包括在内以增强核酸酶稳定性或易于合成。在一个实施方案中，除连续核苷酸序列外，本发明的寡核苷酸还包含D’和或D”区。本发明的间隙体寡核苷酸可由下式表示：F-G-F’；特别是F1-7-G4-12-F’1-7D’-F-G-F’,特别是D’1-3-F1-7-G4-12-F’1-7F-G-F’-D”,特别是F1-7-G4-12-F’1-7-D”1-3D’-F-G-F’-D”,特别是D’1-3-F1-7-G4-12-F’1-7-D”1-3上面已经描述了F、G和F’、D’和D”区中核苷的优选数量和类型。在一些实施方案中，寡核苷酸是由长度为14-20个核苷酸组成的间隙体，其中F和F’区中的每一个独立地由1、2、3或4个修饰的核苷单元组成，并且G区由6-17个核苷单元组成，当与PAPD5或PAPD7靶核酸形成双链体时其能够募集核酸酶，并且其中寡核苷酸与PAPD5或PAPD7靶核酸互补。在所有情况下，F-G-F’设计可进一步包括D’和或D”区，其可具有1、2或3个核苷单元，如DNA单元。优选地，F和F’区中的核苷是修饰的核苷，而G区中的核苷酸是未修饰的核苷。在每种设计中，优选的修饰核苷是LNA。在另一个实施方案中，在间隙体的间隙中的所有核苷间键是硫代磷酸酯和或硼烷磷酸酯键。在另一个实施方案中，在间隙体的侧翼F和F’区中的所有核苷间键是硫代磷酸酯和或硼烷磷酸酯键。在另一个优选的实施方案中，在间隙体的D’和D”区中的所有核苷间键是磷酸二酯键。对于本文公开的特定间隙体，当胞嘧啶C残基注释为5-甲基-胞嘧啶时，在各种实施方案中，寡核苷酸中存在的一个或多个C可以是未修饰的C残基。对于本发明的某些实施方案，寡核苷酸选自具有CMP-ID-NO：12_1至131_1的寡核苷酸化合物参见表3中列出的寡核苷酸。对于本发明的某些实施方案，寡核苷酸选自具有CMP-ID-NO:15_1、18_1、23_1、25_1、26_1、30_、32_1、39_1、54_1、56_1、58_1、65_1、80_1、88_1、92_1、93_1、111_1、115_1、116_1和118_1寡核苷酸化合物参见表3中列出的寡核苷酸。对于本发明的某些实施方案，寡核苷酸选自具有CMP-ID-NO：23_1、26_1、54_1、56_1、80_1、93_1和115_1的寡核苷酸化合物。对于本发明的某些实施方案，寡核苷酸选自具有CMP-ID-NO：132_至251_1的寡核苷酸化合物参见表4中列出的寡核苷酸。对于本发明的某些实施方案，寡核苷酸选自具有CMP-ID-NO：153_1、155_1、168_1、171_1、172_1、174_1、183_1、184_1、188_1、190_1、191_1、194_1、195_1、197_1、221_1、224_1、229_1、232_1、239_1和244_1的寡核苷酸化合物参见表4中列出的寡核苷酸。对于本发明的某些实施方案，寡核苷酸选自具有CMP-ID-NO：172_1、188_1、190_1、229_1和237_1的寡核苷酸化合物。本发明的一个实施方案是组合制剂，其包含a寡核苷酸，其选自具有CMPIDNO:18_1、25_1、26_1、32_1、39_1、54_1、56_1、80_1、92_1、93_1、116_1和118_1的寡核苷酸化合物，和b寡核苷酸，其选自具有CMPIDNO:153_1、155_1、168_1、171_1、172_1、174_1、183_1、184_1、188_1、190_1、191_1、194_1、195_1、197_1、221_1、224_1、229_1、232_1、23_19和244_1的寡核苷酸化合物。本发明的一个实施方案是组合制剂，其包含a具有CMPIDNO：18_1的寡核苷酸化合物，和b具有CMPIDNO：221_1的寡核苷酸化合物。本发明的一个实施方案是组合制剂，其包含a具有CMPIDNO：23_1的寡核苷酸化合物，和b具有CMPIDNO：172_1或188_1的寡核苷酸化合物。本发明的一个实施方案是组合制剂，其包含a具有CMPIDNO：25_1的寡核苷酸化合物，和b具有CMPIDNO：174_1或183_1的寡核苷酸化合物。本发明的一个实施方案是组合制剂，其包含a具有CMPIDNO：26_1的寡核苷酸化合物，和b具有CMPIDNO：183_1的寡核苷酸化合物。本发明的一个实施方案是组合制剂，其包含a具有CMPIDNO：39_1的寡核苷酸化合物，和b具有CMPIDNO：229_1的寡核苷酸化合物。本发明的一个实施方案是组合制剂，其包含a具有CMPIDNO：54_1的寡核苷酸化合物，和b具有CMPIDNO：190_1或232_1的寡核苷酸化合物。本发明的一个实施方案是组合制剂，其包含a具有CMPIDNO：56_1的寡核苷酸化合物，和b具有CMPIDNO：153_1或244_1的寡核苷酸化合物。本发明的一个实施方案是组合制剂，其包含a具有CMPIDNO：80_1的寡核苷酸化合物，和b具有CMPIDNO：153_1或244_1的寡核苷酸化合物。本发明的一个实施方案是组合制剂，其包含a具有CMPIDNO：116_1的寡核苷酸化合物，和b具有CMPIDNO：155_1或195_1的寡核苷酸化合物。应用在本发明的上下文中，令人惊讶地显示PAPD5和PAPD7的组合抑制导致抑制HBV增殖的协同作用。所附实施例表明单独降低PAPD5的表达导致HBsAg和HBeAg分泌减少约50％，同样地使用PAPD5抑制剂细胞内HBVmRNA也降低。单独降低PAPD7的表达导致HBsAg和HBeAg的分泌减少不超过15％。同时敲低PAPD5和PAPD7导致HBsAg和HBeAg分泌减少的协同作用，其高于单个敲低的总和。不受理论束缚，这种协同作用可能是由于PAPD5和PAPD7的补偿作用，因为两种蛋白质具有高度序列同源性和相同的酶功能。由于HBsAg分泌减少，本发明的抑制剂抑制慢性HBV感染的出现或发展。特别地，由于抑制HBeAg分泌，与仅减少HBsAg分泌的化合物相比，本发明的抑制剂更有效地抑制慢性HBV感染的出现或发展。此外，降低孕妇的HBeAg也可以抑制其孩子慢性HBV感染的出现或发展。因此，由于HBeAg分泌的减少，本发明的抑制剂抑制慢性HBV感染的出现或发展如在HBV感染的母亲的后代中慢性HBV感染的出现或发展并降低HBV感染者的传染性。因此，本发明的一个方面涉及本文提供的抑制剂，其中该抑制剂降低HBsAg和HBeAg的分泌。与此一致，本发明的另一方面涉及本文提供的抑制剂，特别是核酸分子或核酸分子的组合，其中该抑制剂抑制慢性HBV感染的出现或发展并降低HBV感染者的传染性。在本发明的一个特定方面，本文提供的抑制剂抑制HBV感染的母亲的后代中慢性HBV感染的出现或发展。该母亲优选是HBeAg阳性。用本发明的抑制剂治疗或预防性接受本发明的抑制剂的受试者优选是人，更优选HBsAg阳性和或HBeAg阳性的人类患者，甚至更优选HBsAg阳性和HBeAg阳性的人类患者。该人类患者可以是孕妇，例如，HBeAg阳性和或HBsAg阳性的孕妇，更优选HBeAg阳性和HBsAg阳性的孕妇。本发明的一个实施方案涉及PAPD5抑制剂，特别是抑制PAPD5的表达和或活性的核酸分子，用于治疗和或预防HBV感染，特别是慢性HBV感染。本发明的另一个实施方案涉及组合制剂，其包含PAPD5抑制剂和PAPD7抑制剂，用于治疗和或预防HBV感染，特别是慢性HBV感染。在优选的实施方案中，用于治疗和或预防HBV感染的组合组合物包含a抑制PAPD5表达和或活性的核酸分子；和b抑制PAPD7表达和或活性的核酸分子。因此，本发明涉及组合制剂，其包含PAPD5抑制剂和PAPD7抑制剂，用于同时或相继用于治疗和或预防HBV感染。本发明还涉及组合制剂，其包含a抑制PAPD5表达和或活性的核酸分子；和b抑制PAPD7表达和或活性的核酸分子。在本发明的上下文中设想该组合制剂用于治疗例如改善HBV感染。本文公开的与本发明的抑制剂有关的定义经必要的变更适用于本发明的组合制剂。组合制剂可包含作为PAPD5抑制剂的分子和作为PAPD7抑制剂的单独的分子例如两个单独的RNAi分子，如siRNA分子、shRNA和反义寡核苷酸，或两个单独的小分子。这两个单独的抑制剂可以配制在一个单元内，例如在一个丸剂或小瓶内。或者，这两个单独的抑制剂可以以单独的单元例如，单独的丸剂或小瓶单独配制。两种单独的抑制剂可以一起施用即同时或分开施用即顺序，只要达到两种抑制剂的协同作用即可。在本发明的一个方面，与无药物对照相比即与未施用药物的细胞或受试者相比，组合制剂导致HBsAg和HBeAg分泌降低至少50％。本发明还涉及用于治疗和或预防HBV感染的药物组合物，其中该药物组合物包含i本发明的抑制剂；或本发明的组合制剂；和ii任选的可药用载体。因此，本发明涉及治疗和或预防HBV感染的方法，其中该方法包括向需要这种治疗的受试者施用有效量的本发明的抑制剂，特别是核酸分子、抑制剂的缀合物、本发明的药物组合物，或本发明的组合制剂。本发明还提供了本发明的抑制剂，特别是核酸分子、抑制剂的缀合物、本发明的药物组合物，或本发明的组合制剂用于制备药物的用途。在优选的实施方案中，药物以用于皮下施用的剂型制备，并且对于组合制剂，PAPD5抑制剂与PAPD7抑制剂的比例为1：1的重量比。本发明还提供了本发明的抑制剂，特别是核酸分子、抑制剂的缀合物、本发明的药物组合物或本发明的组合制剂用于制备药物的用途，其中药物为用于静脉内施用的剂型，并且对于组合制剂，PAPD5抑制剂与PAPD7抑制剂的比例为1：1的重量比。本发明的抑制剂、本发明的组合制剂或本发明的药物组合物可以用于组合疗法。例如，本发明的抑制剂、本发明的组合制剂或本发明的药物组合物可以与其他抗HBV剂组合，如干扰素α-2b、干扰素α-2a和干扰素alphacon-1聚乙二醇化和非聚乙二醇化、利巴韦林ribavirin,、拉米夫定lamivudine，3TC、恩替卡韦entecavir、替诺福韦tenofovir、替比夫定telbivudine，LdT、阿德福韦adefovir或其他新兴抗HBV剂，如HBVRNA复制抑制剂、HBsAg分泌抑制剂、HBV衣壳抑制剂、反义寡聚物例如，如WO2012145697和WO2014179629中所述、siRNA例如，如WO2005014806、WO2012024170、WO20122055362、WO2013003520、WO2013159109、WO2017027350和WO2017015175中所述、HBV治疗性疫苗、HBV预防性疫苗、HBV抗体疗法单克隆或多克隆，或用于治疗和或预防HBV的TLR2、3、7、8或9种激动剂。所附实施例证明，PAPD5和或PAPD7的下调伴随着HBsAg和HBeAg以及HBV感染细胞中细胞内HBVmRNA产生的降低。这些结果表明，例如，如果用PAPD5和或PAPD7抑制剂的治疗正在进行或已经进行，那么PAPD5和或PAPD7的量和或活性可用于监测治疗HBV感染期间的治疗成功。因此，本发明涉及一种用于监测治疗HBV感染期间治疗成功的方法，其中该方法包括：a分析从测试受试者获得的样品中PAPD5和或PAPD7的量和或活性；b将该量和或活性与至少一个参考受试者相应的PAPD5和或PAPD7的量和或活性的参考数据进行比较；和c基于比较步骤b预测治疗成功。在本发明的监测方法中，测试受试者可以是接受HBV感染药物或已经接受HBV感染药物的人。药物可包含如上所述的抗HBV剂。药物还可包含PAPD5和或PAPD7的抑制剂。在本发明的监测方法中，参考数据可以对应于至少一个参考受试者样品中的PAPD5和或PAPD7的量和或活性。该样品可以是血液或肝脏活检物。本发明的一个方面涉及本发明的监测方法，其中至少一个参考受试者患有HBV感染但未接受HBV感染的药物；并且其中在步骤c中，与参考数据相比，测试受试者中减少的PAPD5和或PAPD7的量和或活性表明在治疗HBV感染中治疗成功。例如，该减少的PAPD5和或PAPD7的量和或活性可以意味着在测试受试者的样品中PAPD5和或PAPD7的量和或活性是至少一个参考受试者的样品中的PAPD5和或PAPD7的量和或活性的0至90％。例如，该减少的PAPD5和或PAPD7的量和或活性可以是至少一个参考受试者的样品中的PAPD5和或PAPD7的量和或活性的0至80％，优选为0至70％，更优选0至60％，甚至更优选0至50％，甚至更优选0至40％，甚至更优选0至30％，甚至更优选0至20％，最优选0至10％。本发明的另一方面涉及本发明的监测方法，其中至少一个参考受试者患有HBV感染并且已接受用于HBV感染的药物；并且其中在步骤c中，与参考数据相比测试受试者中相同或相似的PAPD5和或PAPD7的量和或活性表明在治疗HBV感染中治疗成功。本发明的另一方面涉及本发明的监测方法，其中至少一个参考受试者不具有HBV感染；并且其中在步骤c中，与参考数据相比测试受试者中相同或相似的PAPD5和或PAPD7的量和或活性表明在治疗HBV感染中治疗成功。相同或相似的PAPD5和或PAPD7的量和或活性可以意味着测试受试者样品中PAPD5和或PAPD7的量和或活性是至少一个参考受试者样品中的PAPD5和或PAPD7的量和或活性的90-110％。例如，该相同或相似的PAPD5和或PAPD7的量和或活性可以是至少一个参考受试者样品中的PAPD5和或PAPD7的量和或活性的95-105％。本发明还包括具有增加、降低或缺失的PAPD5和或PAPD7表达的细胞或非人动物例如小鼠、大鼠、雪貂或兔，其可用于鉴定和或表征预防和或治疗例如改善HBV感染的化合物。例如，该细胞或非人动物可包含编码PAPD5和或PAPD7的外源核苷酸序列，例如，克隆到表达载体中并有效连接外源启动子。该细胞或非人动物可过表达PAPD5和或PAPD7，优选PAPD5和PAPD7。或者，该细胞或非人动物可具有PAPD5和或PAPD7的敲低，优选PAPD5和PAPD7的敲低。本发明的实施方案因此，本发明涉及以下项目：1.鉴定预防、改善和或抑制乙型肝炎病毒HBV感染的化合物的方法，其包括a.使测试化合物与表达PAPD5和或PAPD7的细胞接触；b.在存在和不存在该测试化合物的情况下，测量PAPD5和或PAPD7的表达和或活性；和c.将降低PAPD5或PAPD7的表达和或活性的化合物鉴定为预防、改善和或抑制HBV感染的化合物。2.项目1的方法，进一步包括测试c中鉴定的化合物组合降低PAPD5和PAPD7的表达和或活性的能力的步骤。3.项目1或2的方法，其中PAPD5是PAPD5靶核酸。4.项目3的方法，其中PAPD5靶核酸包含或由以下组成a.SEQIDNO：4或5或10或其天然变体的核苷酸序列；b.与a.的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列，其中由核酸序列表达的多肽具有聚腺苷酸聚合酶功能；c.包含或由SEQIDNO：4、5或10组成的核苷酸序列；d.编码SEQIDNO：1或2的氨基酸序列的核苷酸序列；e.编码与SEQIDNO：1或2具有至少80％同一性的氨基酸序列的核苷酸序列，其中多核苷酸编码具有聚腺苷酸聚合酶功能的多肽；f.编码SEQIDNO：1或2的酶活性片段的核苷酸序列，如SEQIDNO：7或8；或者g.编码与SEQIDNO：1或2的酶活性片段的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列的核苷酸序列，如SEQIDNO：7或8，其中多核苷酸编码具有聚腺苷酸聚合酶功能的多肽；5.项目1或2的方法，其中PAPD7是PAPD7靶核酸。6.项目5的方法，其中PAPD7靶核酸包含或由以下组成a.SEQIDNO：6或11或其天然变体的核苷酸序列；b.与a.的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列，其中由核酸序列表达的多肽具有聚腺苷酸聚合酶功能；c.包含或由SEQIDNO：6或11组成的核苷酸序列；d.编码SEQIDNO：3的氨基酸序列的核苷酸序列；e.编码与SEQIDNO：3具有至少80％同一性的氨基酸序列的核苷酸序列，其中多核苷酸编码具有聚腺苷酸聚合酶功能的多肽；f.编码SEQIDNO：3的酶活性片段的核苷酸序列，如SEQIDNO：9；或者g.编码与SEQIDNO：3的酶活性片段的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列的核苷酸序列，其中多核苷酸编码具有聚腺苷酸聚合酶功能的多肽。7.项目1至6中任一项的方法，其中该细胞是真核细胞。8.项目1至7中任一项的方法，其中抑制HBV增殖的化合物抑制HBV表面抗原HBsAg的分泌，抑制HBV包膜抗原HBeAg的分泌，和或抑制细胞内HBVmRNA或HBVDNA的产生。9.项目1至8中任一项的方法，其中该测试化合物是选自以下的核酸分子的筛选文库：a.单链反义寡核苷酸，或b.siRNA分子；和c.shRNA分子。10.项目1至9中任一项的方法，其中项目1的步骤c.中鉴定的化合物降低PAPD5或PAPD7mRNA表达至少50％。11.项目1至10中任一项的方法，其中测试化合物是能够降低PAPD5的核酸分子和能够降低PAPD7的核酸分子的组合制剂。12.项目11的方法，其中组合制剂降低HBV表面抗原HBsAg、HBV包膜抗原HBeAg和或细胞内HBVmRNA或HBVDNA至少70％。13.项目1至12中任一项的方法，其另外包括比较测试化合物与对照的步骤。14.项目13的方法，其中该对照是不降低PAPD5或PAPD7的表达和或活性的无活性测试化合物。15.项目1-14中任一项的方法，其中PAPD5和PAPD7的活性是聚腺苷酸聚合酶功能。16.PAPD5或PAPD7的抑制剂，用于治疗和或预防HBV感染的用途，其中该抑制剂是a.针对PAPD5或PAPD7的RNA干扰RNAi分子；或者b.基因组编辑器，其包含：i.位点特异性DNA核酸酶或编码位点特异性DNA核酸酶的多核苷酸；和ii.向导RNA或编码向导RNA的多核苷酸。17.根据项目16的用途的抑制剂，其中该抑制剂是选自以下的RNAi分子：a.单链反义寡核苷酸；b.siRNA分子；和c.shRNA分子。18.根据项目16或17的用途的抑制剂，其中该抑制剂是组合制剂，其包含a.抑制PAPD5表达和或活性的RNAi分子；和b.抑制PAPD7表达和或活性的RNAi分子。19.根据项目16至18中任一项的用途的抑制剂，其中该抑制剂降低HBsAg和HBeAg的分泌。20.根据项目16至18中任一项的用途的抑制剂，其中该抑制剂降低细胞内HBVmRNA或HBVDNA的产生。21.根据项目16至20中任一项的用途的抑制剂，其中该抑制剂抑制慢性HBV感染的出现或发展和或降低HBV感染者的传染性。22.反义寡核苷酸或siRNA分子，其包含长度为10至30个核苷酸的连续核苷酸序列，或由长度为10至30个核苷酸的连续核苷酸序列组成，其中该连续核苷酸序列与PAPD5靶核酸和能够降低PAPD5表达的反义寡核苷酸至少80％互补。23.核酸分子，其包含或由长度为10至30个核苷酸的连续核苷酸序列或组成，其中该连续核苷酸序列与PAPD7靶核酸和能够降低PAPD7表达的反义寡核苷酸至少80％互补。24.项目23的核酸分子，其中该核酸分子是单链反义寡核苷酸。25.项目22的反义寡核苷酸，其中寡核苷酸能够与选自SEQIDNO：4、5和10的靶核酸杂交，其中ΔG°低于-10kcal。26.项目23或24的反义寡核苷酸，其中寡核苷酸能够与选自SEQIDNO：6或11的靶核酸杂交，其中ΔG°低于-10kcal。27.项目22至26中任一项的反义寡核苷酸，其中靶核酸是RNA。28.项目27的反义寡核苷酸，其中RNA是mRNA。29.项目28的反义寡核苷酸，其中mRNA是前mRNA或成熟mRNA。30.项目22至29中任一项的反义寡核苷酸，其中连续核苷酸序列包含或由12至22个核苷酸组成。31.项目30的反义寡核苷酸，其中连续核苷酸序列包含或由14至20个核苷酸组成。32.项目22至31中任一项的反义寡核苷酸，其中反义寡核苷酸包含或由长度为12至25个核苷酸组成。33.项目22至32中任一项的反义寡核苷酸，其中寡核苷酸或连续核苷酸序列是单链的。34.项目22至33中任一项的反义寡核苷酸，其中寡核苷酸既不是siRNA也不是自身互补的。35.项目22或25中任一项的反义寡核苷酸，其中连续核苷酸序列包含或由选自SEQIDNO：12至131的序列组成。36.项目35的反义寡核苷酸，其中连续核苷酸序列包含或由选自SEQIDNO:15、18、23、25、26、30、32、39、54、56、58、65、80、88、92、93、111、115、116和118的序列组成。37.项目23、24或26中任一项的核酸分子或反义寡核苷酸，其中连续核苷酸序列包含或由选自SEQIDNO：132至151的序列组成。38.项目37的反义寡核苷酸，其中连续核苷酸序列包含或由选自SEQIDNO:153、155、168、171、172、174、183、184、188、190、191、194、195、197、221、224、229、232、239和244的序列组成。39.项目22至38中任一项的反义寡核苷酸分子，其中连续核苷酸序列与其互补的靶核酸相比，具有0至3个错配。40.项目39的反义寡核苷酸，其中连续核苷酸序列与靶核酸相比具有一个错配。41.项目39的反义寡核苷酸，其中连续核苷酸序列与靶核酸序列完全互补。42.项目22至41中任一项的反义寡核苷酸，其包含一个或多个修饰的核苷。43.项目42的反义寡核苷酸，其中一个或多个修饰的核苷是高亲和力修饰的核苷。44.项目22至43中任一项的反义寡核苷酸，其中反义寡核苷酸包含至少一个修饰的核苷间键。45.项目44的反义寡核苷酸，其中修饰的核苷间键是核酸酶抗性的。46.项目44或45的反义寡核苷酸，其中连续核苷酸序列内至少50％的核苷间键是硫代磷酸酯核苷间键或硼烷磷酸酯核苷间键。47.项目44或45的反义寡核苷酸，其中连续核苷酸序列内的所有核苷间键是硫代磷酸酯核苷间键。48.项目22至47中任一项的反义寡核苷酸，其中寡核苷酸能够募集RNaseH。49.项目48的反义寡核苷酸，其中寡核苷酸是间隙体。50.项目48或49的反义寡核苷酸，其中寡核苷酸是式5’-F-G-F’-3’的间隙体，其中F和F’区独立地包含或由1至4个修饰的核苷组成，G是6至17个核苷的区域，其能够募集RNaseH。51.项目42至44或50中任一项的反义寡核苷酸，其中修饰的核苷是2’糖修饰的核苷，其独立地选自2’-O-烷基-RNA、2’-O-甲基-RNA、2’-烷氧基-RNA、2’-O-甲氧基乙基-RNA、2’-氨基-DNA、2’-氟-DNA、阿拉伯糖核酸ANA、2’-氟-ANA和LNA核苷。52.项目50或51的反义寡核苷酸，其中F和F’区中的一个或多个修饰的核苷是LNA核苷。53.项目52的反义寡核苷酸，其中F和F’区中的所有修饰的核苷都是LNA核苷。54.项目53的反义寡核苷酸，其中F和F’区由LNA核苷组成。55.项目51至54中任一项的反义寡核苷酸，其中LNA核苷选自β-D-氧基-LNA、α-L-氧基-LNA、β-D-氨基-LNA、α-L-氨基-LNA、β-D-硫代-LNA、α-L-硫代-LNA、ScET、RcETβ-D-ENA和α-L-ENA。56.项目51至54中任一项的寡核苷酸，其中LNA核苷是氧基-LNA。57.项目51至56中任一项的反义寡核苷酸，其中LNA核苷是β-D-氧基-LNA。58.项目51至54中任一项的反义寡核苷酸，其中LNA核苷是硫代-LNA。59.项目51至54中任一项的反义寡核苷酸，其中LNA核苷是氨基-LNA。60.项目51至54中任一项的反义寡核苷酸，其中LNA核苷是cET。61.项目51至54中任一项的反义寡核苷酸，其中LNA核苷是ENA。62.项目52的反义寡核苷酸，其中F或F’区中的至少一个还包含至少一个2’取代的修饰核苷，其独立地选自2’-O-烷基-RNA、2’-O-甲基-RNA、2’-烷氧基-RNA、2’-O-甲氧基乙基-RNA、2’-氨基-DNA和2’-氟-DNA。63.项目52至62中任一项的反义寡核苷酸，其中G区中的RNaseH募集核苷独立地选自DNA、α-L-LNA、C4’烷基化DNA、ANA和2’F-ANA和UNA。64.项目50或63的反义寡核苷酸，其中G区中的核苷是DNA核苷。65.项目22或25中任一项的反义寡核苷酸，其中该反义寡核苷酸选自CMPIDNO：12_1至131_1。66.项目65的反义寡核苷酸，其中反义化合物选自CMPIDNO:15_1、18_1、23_1、25_1、26_1、30_、32_1、39_1、54_1、56_1、58_1、65_1、80_1、88_1、92_1、93_1、111_1、115_1、116_1和118_1。67.项目24的反义寡核苷酸，其中反义寡核苷酸选自CMPIDNO：132_至151_1。68.项目67的反义寡核苷酸，其中反义化合物选自CMPIDNO:153_1、155_1、168_1、171_1、172_1、174_1、183_1、184_1、188_1、190_1、191_1、194_1、195_1、197_1、221_1、224_1、229_1、232_1、239_1和244_1。69.项目22的siRNA分子，其中siRNA分子靶向选自SEQIDNO：252、253、254和255中一个或多个的PAPD5靶序列。70.项目23的核酸分子，其中该核酸分子是靶向选自SEQIDNO：256、257、258和259中一个或多个的PAPD7靶序列的siRNA分子。71.缀合物，其包含根据权利要求22至70中任一项的反义寡核苷酸或siRNA，和至少一个共价连接于该寡核苷酸的缀合部分。72.项目71的缀合物，其中缀合部分选自糖类、细胞表面受体配体、药物、激素、亲脂性物质、聚合物、蛋白质、肽、毒素、维生素、病毒蛋白或其组合。73.项目71或72的缀合物，其中缀合部分能够结合脱唾液酸糖蛋白受体。74.项目71至73中任一项的缀合物，其包含位于反义寡核苷酸和缀合部分之间的接头。75.项目74的缀合物，其中该接头是生理学上不稳定的接头。76.项目75的缀合物，其中生理学上不稳定的接头是核酸酶敏感的接头。77.项目75或76的缀合物，其中寡核苷酸具有式D’-F-G-F’或F-G-F’-D”，其中F、F’和G如项目52至65中任一项所定义，D’或D”包含1、2或3个具有硫代磷酸酯核苷间键的DNA核苷。78.组合制剂，其包含：a.抑制PAPD5表达和或活性的RNAi分子；和b.抑制PAPD7表达和或活性的RNAi分子。79.项目78的组合制剂，其中RNAi分子选自项目22至70，或是项目71至77中任一项的缀合物。80.项目78的组合制剂，其中a中的RNAi分子是项目36或66的反义化合物，并且其中b中的RNAi分子是项目38或68的反义化合物。81.药物组合物，其包含项目22至70中任一项的反义寡核苷酸或siRNA分子，或项71至77中任一项的缀合物，或项目78至80的组合制剂和任选的可药用稀释剂、载体、盐和或佐剂。82.用于调节表达PAPD5和或PAPD7的靶细胞中PAPD5和或PAPD7表达的体内或体外方法，该方法包括向该细胞施用有效量的项目22至70的反义寡核苷酸或siRNA分子，或项目71至77的缀合物，或项目78或79的组合制剂，或项目81的药物组合物。83.治疗或预防疾病的方法，包括向患有或易患该疾病的受试者施用治疗或预防有效量的项目22至70的反义寡核苷酸或siRNA分子，或项目71至77的缀合物，或项目78至80的组合制剂，或项目81的药物组合物。84.项目22至70的反义寡核苷酸或siRNA分子，或项目71至77的缀合物，或项目78至80的组合制剂，或项目81的药物组合物，用作治疗或预防受试者疾病的药物。85.项目22至70的寡核苷酸或siRNA分子的寡核苷酸，或项目71至77的缀合物，或项目78至80的组合制剂用于制备用于治疗或预防受试者疾病的药物中的用途。86.项目83至85中任一项的方法、反义寡核苷酸或用途，其中与没有项目22至70的反义寡核苷酸或siRNA分子，或项目71至77的缀合物，或项目78至80的组合制剂的表达相比，PAPD5和或PAPD7降低至少30％，或至少40％，或至少50％，或至少60％，或至少70％，或至少80％，或至少90％，或至少95％。87.项目83至85的方法、反义寡核苷酸或用途，其中该疾病选自HBV感染，特别是慢性HBV感染。88.监测治疗HBV感染期间治疗成功的方法，其中该方法包括：a.分析从测试受试者获得的样品中PAPD5和或PAPD7的量和或活性；b.将该量和或活性与至少一个参考受试者相应的PAPD5和或PAPD7的量和或活性的参考数据进行比较；和c.基于比较步骤b预测治疗成功。89.项目88的监测方法，其中该测试受试者是接受HBV感染药物或已经接受HBV感染药物的人。90.项目88或89的监测方法，其中参考数据对应于至少一个参考受试者的样品中PAPD5和或PAPD7的量和或活性。91.项目88至90中任一项的监测方法，其中至少一个参考受试者患有HBV感染但未接受HBV感染的药物；并且其中在步骤c中，与参考数据相比测试受试者中减少的PAPD5和或PAPD7的量和或活性表明在治疗HBV感染中治疗成功。92.项目91的监测方法，其中该减少的PAPD5和或PAPD7的量和或活性意味着在测试受试者的样品中PAPD5和或PAPD7的量和或活性是至少一个参考受试者的样品中的PAPD5和或PAPD7的量和或活性的0至90％。93.项目88至90中任一项的监测方法，其中至少一个参考受试者患有HBV感染并且已接受用于HBV感染的药物；并且其中在步骤c中，与参考数据相比测试受试者中相同或相似的PAPD5和或PAPD7的量和或活性表明在治疗HBV感染中治疗成功。94.项目88至90中任一项的监测方法，其中至少一个参考受试者不具有HBV感染；并且其中在步骤c中，与参考数据相比测试受试者中相同或相似的PAPD5和或PAPD7的量和或活性表明在治疗HBV感染中治疗成功。95.项目93或94的监测方法，其中该相同或相似的PAPD5和或PAPD7的量和或活性意味着测试受试者样品中PAPD5和或PAPD7的量和或活性是至少一个参考受试者样品中的PAPD5和或PAPD7的量和或活性的90-110％。药物组合物如上所述，本发明涉及包含单独的PAPD5抑制剂，或PAPD5抑制剂与PAPD7抑制剂组合的组合物，用于治疗和或预防HBV感染。抑制剂优选是如本文所定义的核酸分子。具体地，考虑了包含PAPD5抑制剂和PAPD7抑制剂的组合制剂，用于治疗和或预防HBV感染；和包含该抑制剂组合物或该组合制剂的药物组合物。该药物组合物即药物任选地包含可药用载体。该药物组合物可进一步包含可治疗用稀释剂、盐、赋形剂和或佐剂。通过将单独的PAPD5抑制剂和载体或赋形剂混合，或通过将PAPD5抑制剂与PAPD7抑制剂和载体或赋形剂混合来制备典型的药物组合物。合适的载体和赋形剂是本领域技术人员熟知的，并且在例如Ansel,Ansel’sPharmaceuticalDosageFormsandDrugDeliverySystems,Philadelphia:Lippincott,Williams&Wilkins,2004；Gennaro,Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy,Philadelphia:Lippincott,Williams&Wilkins,2000；和Rowe,HandbookofPharmaceuticalExcipients,Chicago,PharmaceuticalPress,2005中详细描述。该制剂还可包括一种或多种缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、润湿剂、润滑剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂、抗氧化剂、不透明剂、助流剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、芳香剂、矫味剂、稀释剂和其他已知的添加剂，以改善药物的外观或有助于制造药物产品即药物。例如，可以通过如下方式配制本发明的药物组合物：将具有所需纯度的PAPD5抑制剂和或PAPD7抑制剂在环境温度下在合适的pH下与生理学上可接受的载体混合，即，该载体在合适的施用形式中采用的剂量和浓度对接受者是无毒的。本发明的药物组合物可以是无菌的。对于核酸分子，合适的制剂可见于Remington’sPharmaceuticalSciences,MackPublishingCompany,Philadelphia,Pa.,第17版,1985。关于药物递送方法的简要综述参见例如LangerScience249:1527-1533,1990。WO2007031091进一步提供了可药用稀释剂、载体和佐剂的合适和优选的实例在此引入作为参考。WO2007031091中还提供了合适的剂量、制剂、施用途径、组合物、剂型、与其他治疗剂的组合、前药制剂。根据本发明的化合物可以以其可药用盐的形式存在。术语“可药用盐”是指常规的酸加成盐或碱加成盐，其保留本发明化合物的生物有效性和性质，并且由合适的无毒有机酸或无机酸或有机或无机碱形成。例如酸加成盐包括衍生自无机酸的那些，该无机酸例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸；以及衍生自有机酸的那些，该有机酸例如对甲苯磺酸、水杨酸、甲磺酸、草酸、琥珀酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸等。碱加成盐包括衍生自铵、钾、钠和季铵氢氧化物的那些，如，例如氢氧化四甲基铵。将药物化合物化学修饰成盐以获得改善的化合物的物理和化学稳定性、吸湿性、流动性和溶解性，是药物化学家熟知的技术。例如，描述于Bastin,OrganicProcessResearch&Development2000,4,427-435或Ansel,In:PharmaceuticalDosageFormsandDrugDeliverySystems,第6版1995,第196和1456-1457页中。例如，本文提供的化合物的可药用盐可以是钠盐。本发明的药物组合物以符合良好医学实践的方式配制、给药和施用。在此背景下考虑的因素包括所治疗的特定哺乳动物、个体患者的临床状况、药剂的递送部位、施用方法、施用计划、患者的年龄和性别以及执业医师已知的其他因素。本文中，“有效量”也称为“治疗有效剂量”是指将引起医师或其他临床医生正在寻求的受试者生物或医学反应的化合物的量。本发明的抑制剂、本发明的组合制剂或本发明的药物组合物的“有效量”将取决于这些考虑因素，并且是抑制HBsAg和或HBeAg所需的最小量。例如，这样的量可以低于对受体细胞或整个哺乳动物有毒的量。例如，如果PAPD5抑制剂或PAPD7抑制剂是反义寡核苷酸，那么施用的药学有效量是0.1-15mgkg，如0.2-10mgkg，如0.25-5mgkg的剂量。施用可以是每周一次，每两周一次，每三周一次，甚至每月一次。本发明的核酸分子或药物组合物可以局部施用如施用至皮肤、吸入、眼或耳或肠内施用例如口服或通过胃肠道施用或肠胃外施用如静脉内、皮下、肌内、脑内、脑室内或鞘内施用。在一个优选的实施方案中，本发明的核酸分子或药物组合物通过肠胃外途径施用，包括静脉内、动脉内、皮下、腹膜内或肌内注射或输注，鞘内或颅内施用，例如脑内或室内施用，玻璃体内施用。在一个实施方案中，静脉内施用活性寡核苷酸或寡核苷酸缀合物。在另一个实施方案中，皮下施用活性核酸分子或核酸分子缀合物。本发明的抑制剂、本发明的组合制剂或本发明的药物组合物可用于预防和或治疗HBV感染。其优选抑制HBsAg和或HBeAg的分泌，最优选抑制HBsAg和HBeAg的分泌。定义核苷酸序列术语“核苷酸序列”或“多核苷酸”是本领域公知的，其包括包含或由以下组成的分子：天然存在的分子如DNA和RNA以及核酸类似物例如寡核苷酸硫代磷酸酯、取代的核糖寡核苷酸、LNA分子、PNA分子、GNA乙二醇核酸分子、TNA苏糖核酸分子、吗啉代多核苷酸或具有修饰骨架如聚硅氧烷和2’-O-2-甲氧基乙基-硫代磷酸酯的核酸，或具有取代基如甲基-、硫代-、硫酸、苯甲酰基-、苯基-、氨基-、丙基-、氯-和methanocarbanucleoside的核酸，或促进其检测的报告分子。此外，术语“核苷酸序列”在本发明的上下文中与术语“核酸分子”等同地解释，并且尤其可以指DNA、RNA、PNA或LNA或其杂合体或任何本领域已知的其修饰修饰的实例参见例如US5,525,711、US4,711,955、US5,792,608或EP302175。本文描述和提供的核酸序列包含的核酸残基可以是天然存在的核酸残基或人工产生的核酸残基。核酸残基的实例是腺嘌呤A、鸟嘌呤G、胞嘧啶C、胸腺嘧啶T、尿嘧啶U、黄嘌呤X和次黄嘌呤HX。如本领域技术人员所理解的，胸腺嘧啶T和尿嘧啶U可以根据多核苷酸的相应类型互换使用。例如，如技术人员所知，作为DNA一部分的胸腺嘧啶T对应于作为相应转录的mRNA的一部分的尿嘧啶U。本文描述和提供的多核苷酸可以是单链或双链、线性或环状、天然或合成的。可以将本文提供的核苷酸序列克隆到载体中。本文所用的术语“载体”包括质粒、粘粒、病毒、噬菌体和常用于基因工程的其他载体。在优选的实施方案中，这些载体适用于转化细胞，如哺乳动物细胞或酵母细胞。文中载体可以是表达载体。通常，表达载体已在文献中广泛描述。它们可包含选择性标记基因和确保在宿主中复制的复制起点、启动子和用于转录的终止信号。在启动子和终止信号之间可以存在至少一个限制性位点或多接头，其能够实现希望表达的核酸序列的插入。可以将本文提供的核苷酸序列克隆入其中的载体的非限制性实例是腺病毒、腺相关病毒AAV、慢病毒、基于HIV的慢病毒、非病毒小环载体，或用于细菌和真核表达系统的其他载体。核酸分子如本领域技术人员通常理解的，本文所用的术语“核酸分子”或“治疗性核酸分子”定义为包含两个或更多个共价连接的核苷即核苷酸序列的分子。本发明方法中提到的核酸分子通常是长度低于50个核苷酸的治疗性寡核苷酸。核酸分子可以是或包含反义寡核苷酸，或可以是另一种寡聚核酸分子，如CRISPRRNA、siRNA、shRNA、适体或核酶。核酸分子是通常在实验室中通过固相化学合成然后纯化制备的组合物。当提及核酸分子的序列时，参考共价连接的核苷酸或核苷的核碱基部分或其修饰的序列或顺序。本发明的核酸分子是人工的、化学合成的，并且通常是纯化或分离的。本发明的核酸分子可包含一种或多种修饰的核苷或核苷酸。在一些实施方案中，本发明的核酸分子包含或由长度为8至40个核苷酸如长度为9至35、如10至30、如11至22、如12至20、如13至18或14至16个核苷酸的连续核苷酸组成。在一些实施方案中，核酸分子或其连续核苷酸序列包含或由22个或更少核苷酸、如20个或更少核苷酸、如18个或更少核苷酸、如14、15、16或17个核苷酸组成。应理解，本文给出的任何范围包括范围端点。因此，如果说核酸分子包含10至30个核苷酸，则包括10和30个核苷酸。在一些实施方案中，连续核苷酸序列包含或由长度为8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个连续核苷酸组成。核酸分子通常用于调节哺乳动物中靶核酸的表达。在一些实施方案中，核酸分子，如siRNA、shRNA和反义寡核苷酸通常用于抑制靶核酸的表达。因此，当组合时，核酸分子可以有效地调节哺乳动物中一种或多种靶核酸的表达。在本发明的一个实施方案中，核酸分子选自RNAi剂，如siRNA、shRNA或反义寡核苷酸。在优选的实施方案中，核酸分子是高亲和力修饰的反义寡核苷酸。在一些实施方案中，核酸分子是硫代磷酸酯核酸分子。在一些实施方案中，核酸分子包含硫代磷酸酯核苷间键。在一些实施方案中，核酸分子可以与非核苷部分缀合部分缀合。核酸分子文库应理解为变体核酸分子的集合。核酸分子文库的目的可以不同。在一些实施方案中，核酸分子文库由具有不同核碱基序列的寡核苷酸组成，例如其可以是跨靶核酸例如RNA序列设计的核酸分子文库，例如，反义寡核苷酸或siRNA分子的文库可以通过mRNA基因步移gene-walk产生，目的是鉴定核酸分子有效调节靶核酸的靶核酸上的区域。在一些实施方案中，核酸分子文库由具有靶向靶核酸上的特定区的重叠核碱基序列的寡核苷酸组成，目的是鉴定核酸分子文库中最有效的序列。在一些实施方案中，核酸分子文库是亲本或祖先核酸分子的核酸分子设计变体子核酸分子的文库，其中核酸分子设计变体保留了亲本核酸分子的核心核碱基序列。寡核苷酸如本领域技术人员通常理解的，本文所用的术语“寡核苷酸”定义为包含两个或更多个共价连接的核苷的分子。这种共价结合的核苷也可称为核酸分子或寡聚体。寡核苷酸通常在实验室中通过固相化学合成然后纯化制备。当提及寡核苷酸的序列时，参考共价连接的核苷酸或核苷的核碱基部分或其修饰的序列或顺序。本发明的寡核苷酸是人工的、化学合成的，并且通常是纯化或分离的。本发明的寡核苷酸可包含一个或多个修饰的核苷或核苷酸。反义寡核苷酸是单链寡核苷酸，具有最小或没有内部双链体形成。siRNA分子通常由形成双链分子的2个互补寡核苷酸正义链和反义链组成。shRNA分子是通常比反义寡核苷酸长并且在分子内形成内部双链体发夹结构的寡核苷酸。反义寡核苷酸如本文所用的术语“反义寡核苷酸”定义为能够通过与靶核酸杂交，特别是与靶核酸上的连续序列杂交来调节靶基因表达的寡核苷酸。反义寡核苷酸基本上不是双链的，因此不是siRNA或shRNA。优选地，本发明的反义寡核苷酸是单链的。RNAi本文中，术语“RNA干扰RNAi分子”是指抑制RNA表达或翻译的任何分子，包括本文定义的核酸分子。小干扰RNAsiRNA是双链RNA分子，其通过在转录后结合互补mRNA导致其降解和翻译损失。小发夹RNAshRNA是具有发夹结构的人工RNA分子，其在表达后能够通过DICER和RNA诱导沉默复合物RISC来减少mRNA。可以在感兴趣基因的RNA序列的基础上设计RNAi分子。然后可以化学合成或通过体外转录合成相应的RNAi，或者从载体或PCR产物表达RNAi。siRNA和shRNA分子的长度通常在20到50个核苷酸之间，如长度在25到35个核苷酸之间，并且与被称为Dicer的内切核酸酶相互作用，认为Dicer将dsRNA加工成具有特征性两个碱基的3’突出端的19-23碱基对的短干扰RNA，然后该两个碱基的3’突出端并入RNA诱导的沉默复合物RISC中。在US8,349,809和US8,513,207中描述了有效延伸形式的Dicer底物，在此引入作为参考。在与适当的靶mRNA结合后，RISC内的一个或多个内切核酸酶切割靶标以诱导沉默。可以使用修饰的核苷酸间键和高亲和力核苷如2’-4’双环核糖修饰的核苷，包括LNA和cET化学修饰RNAi剂。连续核苷酸序列术语“连续核苷酸序列”是指与靶核酸互补的寡核苷酸区。该术语在本文中可与术语“连续核碱基序列”和术语“寡核苷酸基序序列”互换使用。在一些实施方案中，寡核苷酸的所有核苷酸构成连续核苷酸序列。在一些实施方案中，寡核苷酸包含连续核苷酸序列，并且可任选地包含其他核苷酸，例如可用于将官能团连接至连续核苷酸序列的核苷酸接头区。核苷酸接头区可以与靶核酸互补或不互补。核苷酸核苷酸是寡核苷酸和多核苷酸的构建单元，并且出于本发明的目的，核苷酸包括天然存在的和非天然存在的核苷酸。在自然界中，核苷酸，如DNA和RNA核苷酸包含核糖部分、核碱基部分和一个或多个磷酸基团其在核苷中不存在。核苷和核苷酸也可互换地称为“单元”或“单体”。修饰的核苷如本文所用的术语“修饰的核苷”或“核苷修饰”是指与等同的DNA或RNA核苷相比通过引入一个或多个糖部分或核碱基部分的修饰而修饰的核苷。在优选的实施方案中，修饰的核苷包含修饰的糖部分。术语“修饰的核苷”在本文中也可与术语“核苷类似物”或修饰的“单元”或修饰的“单体”互换使用。具有未修饰的DNA或RNA糖部分的核苷在本文中称为DNA或RNA核苷。在DNA或RNA核苷的碱基区具有修饰的核苷仍然通常被称为DNA或RNA，如果它们允许WatsonCrick碱基配对的话。修饰的核苷间键如本领域技术人员通常理解的，术语“修饰的核苷间键”定义为不同于磷酸二酯PO键的键，其将两个核苷共价偶联在一起。具有修饰的核苷间键的核苷酸也称为“修饰的核苷酸”。在一些实施方案中，与磷酸二酯键相比，修饰的核苷间键增加本发明核酸分子的核酸酶抗性。对于天然存在的寡核苷酸，核苷间键包括在相邻核苷之间产生磷酸二酯键的磷酸基团。修饰的核苷间键特别适用于稳定寡核苷酸以及用作体内使用的siRNA，并且可用于防止本发明的寡核苷酸或siRNA中的DNA或RNA核苷区处的核酸酶切割，例如在间隙体寡核苷酸的间隙区，以及修饰核苷的区域。在一个实施方案中，核酸分子例如，反义寡核苷酸、shRNA或siRNA包含一个或多个从天然磷酸二酯修饰的核苷间键，例如其为对核酸酶攻击更具抗性的键。可以通过在血清中孵育寡核苷酸或通过使用核酸酶抗性测定法例如蛇毒磷酸二酯酶SVPD来测定核酸酶抗性，两者都是本领域公知的。能够增强寡核苷酸的核酸酶抗性的核苷间键是指核酸酶抗性核苷间键。在一些实施方案中，在反义寡核苷酸或其连续核苷酸序列中至少50％的核苷间键被修饰，在寡核苷酸或其连续核苷酸序列中如至少60％、如至少70％、如至少80％或如至少90％的核苷间键被修饰。在一些实施方案中，寡核苷酸或其连续核苷酸序列中的所有核苷间键都被修饰。在一些实施方案中，认识到将本发明的寡核苷酸连接到非核苷酸官能团如缀合物的核苷可以是磷酸二酯。在一些实施方案中，寡核苷酸或其连续核苷酸序列的所有核苷间键是核酸酶抗性的核苷间键。修饰的核苷间键可选自硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯和硼烷磷酸酯。在一些实施方案中，修饰的核苷间键例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯或硼烷磷酸酯与本发明寡核苷酸的RNaseH募集相容。在一些实施方案中，核苷间键包含硫S，如硫代磷酸酯核苷间键。由于核酸酶抗性、有益的药学动力学和易于制造，硫代磷酸酯核苷间键特别有用。在一些实施方案中，寡核苷酸或其连续核苷酸序列中至少50％的核苷间键是硫代磷酸酯，寡核苷酸或其连续核苷酸序列中如至少60％、如至少70％、如至少80％或如至少90％的核苷间键是硫代磷酸酯。在一些实施方案中，寡核苷酸或其连续核苷酸序列的所有核苷间键是硫代磷酸酯。在一些实施方案中，寡核苷酸包含一个或多个中性核苷间键，特别是选自磷酸三酯、甲基膦酸酯、MMI、酰胺-3、甲缩醛formacetal或硫代甲缩醛thioformacetal的核苷间键。进一步的核苷间键在WO2009124238中公开通过引用并入本文。在一个实施方案中，核苷间键选自WO2007031091中公开的接头通过引用并入本文。特别地，核苷间键可以选自-O-PO2-O-、-O-PO,S-O-、-O-PS2-O-、-S-PO2-O-、-S-PO,S-O-、-S-PS2-O-、-O-PO2-S-、-O-PO,S-S-、-S-PO2-S-、-O-PORH-O-、0-POOCH3-0-、-O-PONRH-O-、-O-POOCH2CH2S-R-O-、-O-POBH3-O-、-O-PONHRH-O-、-O-PO2-NRH-、-NRH-PO2-O-、-NRH-CO-O-、-NRH-CO-NRH-，和或核苷间连接头可选自：-O-CO-O-、-O-CO-NRH-、-NRH-CO-CH2-、-O-CH2-CO-NRH-、-O-CH2-CH2-NRH-、-CO-NRH-CH2-、-CH2-NRHCO-、-O-CH2-CH2-S-、-S-CH2-CH2-O-、-S-CH2-CH2-S-、-CH2-SO2-CH2-、-CH2-CO-NRH-、-O-CH2-CH2-NRH-CO-、-CH2-NCH3-O-CH2-，其中RH选自氢和C1-4-烷基。特别地，核酸酶抗性键如硫代磷酸酯键可用于在与靶核酸形成双链体时能够募集核酸酶的反义寡核苷酸区，如间隙体的G区，或者头部和尾部的未修饰的核苷区。然而，硫代磷酸酯键也可用于非核酸酶募集区和或亲和力增强区，如间隙体的F和F’区，或者头部和尾部的修饰的核苷区。然而，每个设计区可以包含不同于硫代磷酸酯的核苷间键，如磷酸二酯键，特别是在其中修饰的核苷如LNA防止键被核酸酶降解的区域。包含磷酸二酯键如一个或两个键，特别是在修饰的核苷单元之间或附近通常在非核酸酶募集区中包含磷酸二酯键，可以改变寡核苷酸的生物利用度和或生物分布-参见WO2008113832，其并入本文作参考。在一个实施方案中，反义寡核苷酸中的所有核苷间键都是硫代磷酸酯和或硼烷磷酸酯键。优选地，寡核苷酸中的所有核苷间键都是硫代磷酸酯键。碱基术语核碱基包括存在于核苷和核苷酸中的嘌呤例如腺嘌呤和鸟嘌呤和嘧啶例如尿嘧啶、胸腺嘧啶和胞嘧啶部分，其在核酸杂交中形成氢键。在本发明的上下文中，术语核碱基还包括修饰的核碱基，其可以不同于天然存在的核碱基，但在核酸杂交期间是有功能的。在上下文中，“核碱基”是指天然存在的核碱基如腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸苷、尿嘧啶、黄嘌呤和次黄嘌呤以及非天然存在的变体。这些变体例如描述于Hirao等人2012AccountsofChemicalResearch第45卷，第2055页和Bergstrom2009CurrentProtocolsinNucleicAcidChemistrySuppl.371.4.1.。在一些实施方案中，通过将嘌呤或嘧啶改变为修饰的嘌呤或嘧啶来修饰核碱基部分，如取代的嘌呤或取代的嘧啶，如选自异胞嘧啶、假异胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、5-硫代-胞嘧啶、5-丙炔基-胞嘧啶、5-丙炔基-尿嘧啶、5-溴尿嘧啶5-噻唑并-尿嘧啶、2-硫代-尿嘧啶、2’-硫代-胸腺嘧啶、肌苷、二氨基嘌呤、6-氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、2,6-二氨基嘌呤和2-氯-6-氨基嘌呤的核碱基。核碱基部分可以用每个相应核碱基的字母代码表示，例如，A、T、G、C或U，其中每个字母可任选地包括具有等同功能的修饰的核碱基。例如，在示例性寡核苷酸中，核碱基部分选自A、T、G、C和5-甲基胞嘧啶。任选地，对于LNA间隙体，可以使用5-甲基胞嘧啶LNA核苷。修饰的寡核苷酸术语修饰的寡核苷酸或修饰的核酸分子描述了包含一个或多个糖修饰的核苷和或修饰的核苷间键的寡核苷酸或核酸分子。术语“嵌合”是在文献中用于描述具有修饰的核苷的寡核苷酸或核酸分子特别是间隙体寡核苷酸的术语。互补术语“互补”描述了核苷核苷酸的Watson-Crick碱基配对的能力。Watson-Crick碱基对是鸟嘌呤G-胞嘧啶C和腺嘌呤A-胸腺嘧啶T尿嘧啶U。应当理解，寡核苷酸可以包含具有修饰的核碱基的核苷，例如通常使用5-甲基胞嘧啶代替胞嘧啶，因此术语互补包括未修饰和修饰的核碱基之间的WatsonCrick碱基配对参见例如Hirao等人2012AccountsofChemicalResearch第45卷第2055页和Bergstrom2009CurrentProtocolsinNucleicAcidChemistrySuppl.371.4.1。如本文所用，术语“互补％”是指核酸分子例如寡核苷酸中在给定位置的连续核苷酸序列与在单独核酸分子例如靶核酸的给定位置处的连续核苷酸序列互补即与其形成WatsonCrick碱基对的核苷酸数百分比。通过计算在两个序列之间形成对当将靶序列5’-3’和寡核苷酸序列3’-5’进行比对时的比对碱基的数目除以寡核苷酸中核苷酸的总数再乘以100来计算百分比。在这种比较中，不对齐形成碱基对的核碱基核苷酸称为错配。优选地，在计算连续核苷酸序列的互补％时不允许插入和缺失。术语“完全互补”是指100％互补。以下是与靶核酸区SEQIDNO：10完全互补的寡核苷酸SEQIDNO：12的实例。同一性在本发明的上下文中，术语“同一性”或“同一性百分比”是指氨基酸或核苷酸序列与本文所示序列例如SEQIDNO：1、2或3的那些具有至少80％、优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少98％、甚至更优选至少99％同一性，其中较高的同一性值比较低的值优选。根据本发明，在两个或更多个核酸或氨基酸序列的上下文中，术语“同一性同一性”或“同一性同一性百分比”是指如使用本领域已知的序列比较算法或通过手动比对和目视检查，在比较窗口或指定区域上进行最大对应性的比较和比对时所测量的，相同或具有特定的相同氨基酸残基或核苷酸百分比的两个或更多个序列例如，与例如SEQIDNO：1、2、3、7、8或9的氨基酸序列或与例如SEQIDNO：4、5、6、10或11的核苷酸序列至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％同一性。对于氨基酸序列，优选地，所描述的同一性存在于至少约50个氨基酸、优选至少100个氨基酸、更优选至少400个氨基酸、更优选至少500个氨基酸、更优选至少600个氨基酸、最优选所有氨基酸长度的区域上。在核苷酸序列的情况下，所描述的同一性最优选存在于至少100个核苷酸、优选至少1,000个核苷酸、更优选至少2,000个核苷酸、最优选所有核苷酸长度的区域上。然而，对于通常低于50个核苷酸的核酸分子，可以在显著更短的区域上评估同一性。通常，通过计算两个序列之间相同的比对碱基的数目除以核酸分子中的核苷酸总数并乘以100来计算核酸分子的百分比同一性。百分比同一性＝匹配x100比对区的长度。优选地，在计算核酸分子中连续核苷酸序列的％同一性时不允许插入和缺失。如本领域中已知的，本领域技术人员将知道如何使用例如基于CLUSTALW计算机程序Thompson,1994,NuclAcidsRes,2:4673-4680或FASTDBBrutlag,1990,CompAppBiosci,6:237-245的算法确定序列之间的百分比同一性。对于本领域技术人员而言也可使用BLAST和BLAST2.0算法Altschul,1997,NuclAcidsRes25:3389-3402；Altschul,1993,JMolEvol,36:290-300；Altschul,1990,JMolBiol215:403-410。例如，代表BasicLocalAlignmentSearchToolBLAST的BLAST2.0Altschul,1997,loc.cit.；Altschul,1993,loc.cit.；Altschul,1990,loc.cit.可用于搜索局部序列比对。如上所述，BLAST产生核苷酸和氨基酸序列的比对以确定序列相似性。由于比对的局部性质，BLAST在确定精确匹配或在鉴定相似序列中特别有用。BLAST的类似计算机技术Altschul,1997,loc.cit.；Altschul,1993,loc.cit.；Altschul,1990,loc.cit.用于在核苷酸数据库如GenBank或EMBL中搜索相同或相关的分子。杂交如本文所用的术语“杂交”或“杂交”应理解为两条核酸链例如寡核苷酸和靶核酸在相对链上的碱基对之间形成氢键，从而形成双链体。两条核酸链之间的结合亲和力是杂交强度。其通常根据解链温度Tm描述，该解链温度定义为一半寡核苷酸与靶核酸形成双链体的温度。在生理条件下，Tm与亲和力不严格成比例MergnyandLacroix,2003,Oligonucleotides13:515–537。标准状态Gibbs自由能ΔG°是结合亲和力更精确的表示，并且与根据ΔG°＝-RTlnKd的反应的解离常数Kd相关，其中R是气体常数，T是绝对温度。因此，寡核苷酸与靶核酸之间非常低的反应的ΔG°反映了寡核苷酸与靶核酸之间的强杂交。ΔG°是与反应相关的能量，其中水性溶液浓度为1M，pH为7，温度为37℃。寡核苷酸与靶核酸的杂交是自发反应，对于自发反应，ΔG°小于零。ΔG°可以通过实验测量，例如，通过使用如Hansen等人,1965，Chem.Comm.36–38和Holdgate等人,2005,DrugDiscovToday中描述的等温滴定量热法ITC测量。技术人员将知道商业设备可用于ΔG°测量。还可以通过使用如SantaLucia,1998,ProcNatlAcadSciUSA.95:1460–1465所述的最近邻模型、使用Sugimoto等人,1995,Biochemistry34:11211–11216和McTigue等人,2004,Biochemistry43:5388–5405描述的适当的衍生热力学参数来数值估算ΔG°。为了获得通过杂交调节其预期核酸靶的可能性，对于长度为10-30个核苷酸的寡核苷酸，本发明的寡核苷酸以低于-10kcal的估算ΔG°值与靶核酸杂交。在一些实施方案中，通过标准状态Gibbs自由能ΔG°测量杂交的程度或强度。对于长度为8-30个核苷酸的寡核苷酸，寡核苷酸可以以低于范围-10kcal的估算ΔG°值与靶核酸杂交，如低于-15kcal、如低于-20kcal、如低于-25kcal。在一些实施方案中，寡核苷酸以-10至-60kcal的估算ΔG°值与靶核酸杂交、如-12至-40、如-15至-30kcal或-16至-27kcal、如-18至-25kcal。靶核酸根据本发明，靶核酸是编码哺乳动物PAPD5或PAPD7的核酸，并且可以是例如基因、RNA、mRNA和前mRNA、成熟mRNA或cDNA序列。因此，靶标可以称为PAPD5或PAPD7靶核酸。本发明的寡核苷酸或核酸分子可以例如靶向哺乳动物PAPD5或PAPD7的外显子区，或者可以例如靶向PAPD5或PAPD7前mRNA中的内含子区。合适地，靶核酸编码PAPD5或PAPD7蛋白，特别是哺乳动物PAPD5或PAPD7，如人PAPD5或PAPD7参见例如表1A和B以及表2A和B，其提供人、猴、大鼠和猪PAPD5或PAPD7的mRNA和前mRNA序列。在一些实施方案中，靶核酸选自SEQIDNO：4、5或10或其天然存在的变体例如编码哺乳动物PAPD5的序列。在一些实施方案中，靶核酸选自SEQIDNO：6或11或其天然存在的变体例如编码哺乳动物PAPD7的序列。如果在研究或诊断中使用本发明的寡核苷酸，则靶核酸可以是cDNA或衍生自DNA或RNA的合成核酸。对于体内或体外应用，本发明的寡核苷酸通常能够抑制PAPD5或PAPD7靶核酸在表达PAPD5或PAPD7靶核酸的细胞中的表达。如在寡核苷酸的整个长度上测量的，本发明寡核苷酸的连续核碱基序列通常与PAPD5或PAPD7靶核酸互补，任选除了一个或两个错配，并且任选排除基于核苷酸的接头区，该接头区可以将寡核苷酸连接至任选的官能团，如缀合物，或其他非互补的末端核苷酸例如D’或D”区。在一些实施方案中，靶核酸可以是RNA或DNA，如信使RNA，如成熟mRNA或前mRNA。在一些实施方案中，靶核酸是编码哺乳动物PAPD5或PAPD7如人PAPD5或PAPD7蛋白的RNA或DNA，例如，如SEQIDNO4、5或10公开的人PAPD5mRNA序列，或如SEQIDNO6或11公开的人PAPD7mRNA序列。表1A和B和表2A和B中提供了关于示例性靶核酸的进一步信息。表1A.PAPD5跨物种的基因组和组装信息。表1B.PAPD7跨物种的基因组和组装信息。Fwd＝正向链。Rev＝反向链。基因组坐标提供前mRNA序列基因组序列。靶序列如本文所用的术语“靶序列”是指靶核酸中存在的核苷酸序列，其包含与本发明的寡核苷酸或核酸分子互补的核碱基序列。在一些实施方案中，靶序列由与本发明寡核苷酸的连续核苷酸序列即亚序列互补的靶核酸上的区域组成。本发明的寡核苷酸或核酸分子包含与靶核酸上的区域如本文所述的靶序列互补或杂交的连续核苷酸序列。寡核苷酸与其互补或杂交的靶核酸序列通常包含至少10个核苷酸的一段连续核碱基。连续核苷酸序列为10至50个核苷酸，如12至30个核苷酸，如13至25个核苷酸，如14至20个核苷酸，如15至18个连续核苷酸。天然存在的变体术语“天然存在的变体”是指PAPD5或PAPD7基因的变体或起源于与靶核酸相同的遗传基因座的转录物，但是其可以不同，例如由于遗传密码的简并导致多种密码子编码相同的氨基酸，或由于前mRNA的可变剪接，或多态性如单核苷酸多态性和等位基因变体的存在。基于寡核苷酸的足够互补序列的存在，本发明的寡核苷酸因此可以靶向靶核酸及其天然存在的变体。在一些实施方案中，天然存在的变体与哺乳动物PAPD5靶核酸如选自SEQIDNO：4、5或10的靶核酸具有至少95％，如至少98％或至少99％的同源性。在一些实施方案中，天然存在的变体与哺乳动物PAPD5靶核酸如选自SEQIDNO：6或11的靶核酸具有至少95％，如至少98％或至少99％的同源性。已知PAPD5或PAPD7基因中的许多单核苷酸多态性，例如表2A中公开的那些人前mRNA起始参考序列是SEQIDNO：10，和表2B人前mRNA起始参考序列是SEQIDNO：11。表2A：PAPD5多态性天然存在的变体次要等位基因次要等位基因频率在SEQIDNO:10上起始G0,0039936129G0,00019968134T0,00039936139A0,00059904262A0,00059904297G0,000199681141A0,000199681142T0,000199681158A0,0241613235A0,00239617279-0,214058370G0,000798722450CAGCA0,000798722603A0,02236421028C0,0001996811044A0,01896961068T0,0001996811181T0,02496011199T0,0009984031258A0,0001996811261T0,0005990421441T0,0001996811443C0,0005990421469A0,0003993611535表2B：PAPD7多态性天然存在的变体表达的调节如本文所用的术语“表达的调节”应理解为当与施用核酸分子之前的PAPD5或PAPD7的量比较时，核酸分子改变PAPD5或PAPD7的量的能力的总称。或者，可以通过参考对照实验来确定表达的调节。通常理解的是，对照是用盐水组合物处理的个体或靶细胞，或用非靶向或核酸分子模拟处理的个体或靶细胞。然而，其也可以是用标准疗法治疗的个体。一种类型的调节是核酸分子抑制、下调、降低、抑制、去除、阻止、阻断、预防、减轻、减低、避免或终止PAPD5或PAPD7表达的能力，例如，通过mRNA的降解或转录的阻断。高亲和力修饰的核苷高亲和力修饰的核苷是修饰的核苷酸，当其并入寡核苷酸中时增强寡核苷酸对其互补靶的亲和力，例如如通过解链温度Tm测量的。本发明的高亲和力修饰的核苷优选导致每个修饰核苷的解链温度增加+0.5至+12℃、更优选增加+1.5至+10℃、最优选增加+3至+8℃。许多高亲和力修饰的核苷是本领域已知的，包括例如许多2’取代的核苷以及锁核酸LNA参见例如Freier&Altmann；Nucl.AcidRes.,1997,25,4429-4443和Uhlmann；Curr.OpinioninDrugDevelopment,2000,32,293-213。糖修饰本发明的核酸分子可包含一个或多个核苷，其具有修饰的糖部分，即与DNA和RNA中发现的核糖部分相比具有糖部分的修饰。已经制备了许多具有核糖部分修饰的核苷，主要目的是改善核酸分子的某些性质，如亲和力和或核酸酶抗性。这些修饰包括例如通过用己糖环HNA，或通常在核糖环的C2和C4碳之间具有双基桥的双环LNA，或通常在C2和C3碳之间缺乏键的未连接核糖环例如UNA取代修饰核糖环结构的那些修饰。其他糖修饰的核苷包括例如双环己糖核酸WO2011017521或三环核酸WO2013154798。修饰的核苷还包括其中糖部分被非糖部分取代的核苷，例如在肽核酸PNA或吗啉代核酸的情况下。糖修饰还包括通过将核糖环上的取代基改变为除氢以外的基团或天然存在于DNA和RNA核苷中的2’-OH基团而进行的修饰。例如取代基可以在2’、3’、4’或5’位置引入。具有修饰的糖部分的核苷还包括2’修饰的核苷，如2’取代的核苷。实际上，已经将很多注意力集中在开发2’取代的核苷上，并且已发现许多2’取代的核苷在并入寡核苷酸时具有有益的性质，如增强的核苷抗性和增强的亲和力。2’修饰的核苷。2’糖修饰的核苷是在2’位置具有除H或-OH之外的取代基2’取代的核苷或包含2’连接的双基biradicle的核苷，其包括2’取代的核苷和LNA2’-4’双基桥连的核苷。例如，2’修饰的糖可以为寡核苷酸提供增强的结合亲和力和或增加的核酸酶抗性。2’取代的修饰核苷的实例是2’-O-烷基-RNA、2’-O-甲基-RNA、2’-烷氧基-RNA、2’-O-甲氧基乙基-RNAMOE、2’-氨基-DNA、2’-氟-RNA和2’-F-ANA核苷。更多的实例，请参见例如Freier&Altmann；Nucl.AcidRes.,1997,25,4429-4443和Uhlmann；Curr.OpinioninDrugDevelopment,2000,32,293-213,和DeleaveyandDamha,ChemistryandBiology2012,19,937。下面是一些2’取代的修饰核苷的描述。锁核酸核苷LNA。LNA核苷是修饰的核苷，其包含核苷酸的核糖糖环的C2’和C4’之间的接头基团称为双基或桥。这些核苷在文献中也称为桥接的核酸或双环核酸BNA。在一些实施方案中，本发明寡聚物的修饰的核苷或LNA核苷具有式I或II的一般结构：其中W选自-O-、-S-、-NRa-、-CRaRb-，如在一些实施方案中为-O-；B表示核碱基或修饰的核碱基部分；Z表示至邻近核苷或5’-末端基团的核苷间键；Z*表示至邻近核苷或3’-末端基团的核苷间键；X表示选自-CRaRb-、-CRa＝CRb-、-CRa＝N-、-O-、-SiRa2-、-S-、-SO2-、-NRa-和C＝Z的列表中的基团。在一些实施方案中，X选自：–O-、-S-、NH-、NRaRb、-CH2-、CRaRb、-C＝CH2-和-C＝CRaRb-在一些实施方案中，X是-O-Y表示选自-CRaRb-、-CRa＝CRb-、-CRa＝N-、-O-、-SiRa2-、-S-、-SO2-、-NRa-和C＝Z的基团。在一些实施方案中，Y选自：–CH2-、-CRaRb-、–CH2CH2-、-CRaRb-CRaRb-、–CH2CH2CH2-、-CRaRbCRaRbCRaRb-、-CRa＝CRb-和-CRa＝N-在一些实施方案中，Y选自-CH2-、-CHRa-、-CHCH3-、CRaRb-或-X-Y-一起表示二价接头基团也称为基一起表示由1、2、3或4个基团原子组成的二价接头基团，该基团原子选自-CRaRb-、-CRa＝CRb-、-CRa＝N-、-O-、-SiRa2-、-S-、-SO2-、-NRa-和C＝Z，在一些实施方案中，-X-Y-表示选自下组的双基：-X-CH2-、-X-CRaRb-、-X-CHRa-、-X-CHCH3-、-O-Y-、-O-CH2-、-S-CH2-、-NH-CH2-、-O-CHCH3-、-CH2-O-CH2、-O-CHCH3CH3-、-O-CH2-CH2-、OCH2-CH2-CH2-,-O-CH2OCH2-、-O-NCH2-、-C＝CH2-CH2-、-NRa-CH2-、N-O-CH2、-S-CRaRb-和-S-CHRa-。在一些实施方案中，-X-Y-表示–O-CH2-或–O-CHCH3-。其中Z选自-O-、-S-和-NRa-，当存在Rb时，Ra和Rb各自独立地选自氢，任选取代的C1-6-烷基，任选取代的C2-6-烯基，任选取代的C2-6-炔基、羟基，任选取代的C1-6-烷氧基、C2-6-烷氧基烷基、C2-6-链烯氧基、羧基、C1-6-烷氧基羰基、C1-6-烷基羰基、甲酰基、芳基、芳氧基-羰基、芳氧基、芳基羰基、杂芳基、杂芳氧基-羰基、杂芳氧基、杂芳基羰基、氨基、单-和二C1-6-烷基氨基、氨基甲酰基、单-和二C1-6-烷基-氨基-羰基、氨基-C1-6-烷基-氨基羰基、单-和二C1-6-烷基氨基-C1-6-烷基-氨基羰基、C1-6-烷基-羰基氨基、脲基、C1-6-烷酰氧基、磺酰基、C1-6-烷基磺酰氧基、硝基、叠氮基、硫基、C1-6-烷硫基、卤素，其中芳基和杂芳基可以任选地被取代，并且其中两个偕位取代基Ra和Rb一起可以表示任选取代的亚甲基＝CH2，其中对于所有手性中心，可以在R或S方向中找到不对称基团。其中R1、R2、R3、R5和R5*独立地选自：氢，任选取代的C1-6-烷基，任选取代的C2-6-烯基，任选取代的C2-6-炔基、羟基、C1-6-烷氧基、C2-6-烷氧基烷基、C2-6-链烯氧基、羧基、C1-6-烷氧基羰基、C1-6-烷基羰基、甲酰基、芳基、芳氧基-羰基、芳氧基、芳基羰基、杂芳基、杂芳氧基-羰基、杂芳氧基、杂芳基羰基、氨基、单-和二C1-6-烷基氨基、氨基甲酰基、单-和二C1-6-烷基-氨基-羰基、氨基-C1-6-烷基-氨基羰基、单-和二C1-6-烷基氨基-C1-6-烷基-氨基羰基、C1-6-烷基-羰基氨基、脲基、C1-6-烷酰氧基、磺酰基、C1-6-烷基磺酰氧基、硝基、叠氮基、硫基、C1-6-烷硫基，卤素，其中芳基和杂芳基可任选被取代，并且其中两个偕位取代基一起可表示氧代、硫代、亚氨基或任选取代的亚甲基。在一些实施方案中，R1、R2、R3、R5和R5*独立地选自C1-6烷基，如甲基和氢。在一些实施方案中，R1、R2、R3、R5和R5*均为氢。在一些实施方案中，R1、R2、R3全部是氢，并且R5和R5*之一也是氢，而R5和R5*中的另一个不是氢，如C1-6烷基，如甲基。在一些实施方案中，Ra是氢或甲基。在一些实施方案中，当存在时，Rb是氢或甲基。在一些实施方案中，Ra和Rb中的一个或两个是氢；在一些实施方案中，Ra和Rb中的一个是氢，另一个不是氢；在一些实施方案中，Ra和Rb中的一个是甲基，另一个是氢；在一些实施方案中，Ra和Rb均为甲基。在一些实施方案中，双基-X-Y-是-O-CH2-，W是O，并且R1、R2、R3、R5和R5*全部都是氢。这种LNA核苷在WO99014226、WO0066604、WO98039352和WO2004046160中公开，它们都通过引用并入本文，并且包括通常称为β-D-氧基LNA和α-L-氧基LNA核苷的物质。在一些实施方案中，双基-X-Y-是-S-CH2-，W是O，并且R1、R2、R3、R5和R5*全部都是氢。这种硫代LNA核苷在WO99014226和WO2004046160中公开，其通过引用并入本文。在一些实施方案中，双基-X-Y-是-NH-CH2-，W是O，并且R1、R2、R3、R5和R5*全部都是氢。此类氨基LNA核苷在WO99014226和WO2004046160中公开，其通过引用并入本文。在一些实施方案中，双基-X-Y-是–O-CH2-CH2-或–O-CH2-CH2-CH2-，W是O，并且R1、R2、R3、R5和R5*全部都是氢。这种LNA核苷公开于WO00047599和Morita等人,Bioorganic&Med.Chem.Lett.1273-76，在此引入作为参考，并且包括通常称为2’-O-4’C-亚乙基桥接的核酸ENA。在一些实施方案中，双基-X-Y-是-O-CH2-，W是O，并且R1、R2、R3的全部和R5和R5*中的一个是氢，R5和R5*中的另一个不是氢，如C1-6烷基，如甲基。这种5’取代的LNA核苷在WO2007134181中公开，其通过引用并入本文。在一些实施方案中，双基-X-Y-是-O-CRaRb-，其中Ra和Rb中的一个或两个不是氢，如甲基，W是O，以及R1、R2、R3的全部和R5和R5*中的一个是氢，R5和R5*中的另一个不是氢，如C1-6烷基，如甲基。这种双修饰的LNA核苷在WO2010077578中公开，其通过引用并入本文。在一些实施方案中，双基-X-Y-表示二价接头基团-O-CHCH2OCH3-2’O-甲氧基乙基双环核酸-Seth等人,2010,J.Org.Chem.第755卷第1569-81页。在一些实施方案中，双基-X-Y-表示二价接头基团-O-CHCH2CH3-2’O-乙基双环核酸-Seth等人,2010,J.Org.Chem.第755卷第1569-81页。在一些实施方案中，双基-X-Y-是-O-CHRa-，W是O，并且R1、R2、R3、R5和R5*全部都是氢。这种6’取代的LNA核苷在WO10036698和WO07090071中公开，其都通过引用并入本文。在一些实施方案中，双基-X-Y-是-O-CHCH2OCH3-，W是O，并且R1、R2、R3、R5和R5*全部都是氢。此类LNA核苷在本领域中也称为环状MOEMOE，其在WO07090071中公开。在一些实施方案中，在R-或S-构型中，双基-X-Y-表示二价接头基团-O-CHCH3-。在一些实施方案中，双基-X-Y-一起表示二价接头基团–O-CH2-O-CH2-Seth等人,2010,J.Org.Chem。在一些实施方案中，双基-X-Y-是-O-CHCH3-，W是O，并且R1、R2、R3、R5和R5*全部都是氢。这种6’甲基LNA核苷在本领域中也称为cET核苷，并且可以是ScET或RcET立体异构体，如WO07090071β-D和WO2010036698α-L中所公开的。均通过引用并入本文。在一些实施方案中，双基-X-Y-是-O-CRaRb-，其中Ra或Rb均不是氢，W是O，并且R1、R2、R3、R5和R5*全部都是氢。在一些实施方案中，Ra和Rb均为甲基。这种6’二取代的LNA核苷在WO2009006478中公开，其通过引用并入本文。在一些实施方案中，双基-X-Y-是-S-CHRa-，W是O，并且R1、R2、R3、R5和R5*全部都是氢。这种6’取代的硫代LNA核苷在WO11156202中公开，其通过引用并入本文。在一些6’取代的硫代LNA实施方案中，Ra是甲基。在一些实施方案中，双基-X-Y-是-C＝CH2-CRaRb-，如–C＝CH2-CH2-或–C＝CH2-CHCH3-W是O，并且R1、R2、R3、R5和R5*全部都是氢。这种乙烯基碳LNA核苷公开在WO08154401和WO09067647中，它们都通过引用并入本文。在一些实施方案中，双基-X-Y-是-N-ORa-，W是O，并且R1、R2、R3、R5和R5*全部都是氢。在一些实施方案中，Ra是C1-6烷基，如甲基。这种LNA核苷也称为N取代的LNA，并且在WO2008150729中公开，其通过引用并入本文。在一些实施方案中，双基-X-Y-一起表示二价接头基团-O-NRa-CH3-Seth等人，2010，J.Org.Chem。在一些实施方案中，双基-X-Y-是-NRa-，W是O，并且R1、R2、R3、R5和R5*全部都是氢。在一些实施方案中，Ra是C1-6烷基，如甲基。在一些实施方案中，R5和R5*中的一个或两个是氢，并且当被取代时，R5和R5*中的另一个是C1-6烷基，如甲基。在这样的实施方案中，R1、R2、R3可以全部是氢，并且双基-X-Y-可以选自–O-CH2-或–O-CHCRa-,如–O-CHCH3-。在一些实施方案中，双基是–CRaRb-O-CRaRb-，如CH2-O-CH2-，W是O并且R1、R2、R3、R5和R5*全部都是氢。在一些实施方案中，Ra是C1-6烷基，如甲基。这种LNA核苷也称为构象限制性核苷酸CRN，并且在WO2013036868中公开，其通过引用并入本文。在一些实施方案中，双基是–O-CRaRb-O-CRaRb-,如O-CH2-O-CH2-，W是O并且R1、R2、R3、R5和R5*全部都是氢。在一些实施方案中，Ra是C1-6烷基，如甲基。这种LNA核苷也称为COC核苷酸，并且在Mitsuoka等人,NucleicAcidsResearch2009374,1225-1238中公开，其通过引用并入本文。除非另有说明，否则将认为LNA核苷可以是β-D或α-L立体异构体。方案1中给出了LNA核苷的某些实例。方案1如实施例中所示，在本发明的一些实施方案中，寡核苷酸中的LNA核苷是β-D-氧基-LNA核苷。核酸酶介导的降解核酸酶介导的降解是指当与互补核苷酸序列形成双链体时能够介导这种序列降解的寡核苷酸。在一些实施方案中，寡核苷酸可通过核酸酶介导的靶核酸降解发挥作用，其中本发明的寡核苷酸能够募集核酸酶，特别是内切核酸酶，优选内切核糖核酸酶RNase，如RNaseH。通过核酸酶介导机制起作用的寡核苷酸设计的实例是通常包含至少5或6个DNA核苷区域的寡核苷酸，并且在其一侧或两侧侧翼为亲和力增强核苷，例如间隙体、头部headmer和尾部tailmer。RNaseH活性和募集反义寡核苷酸的RNaseH活性是指其在与互补RNA分子的双链体中时募集RNaseH的能力。WO0123613提供了用于测定RNaseH活性的体外方法，其可用于测定募集RNaseH的能力。通常认为寡核苷酸能够募集RNaseH，如果它具有互补的靶核酸序列时的初始速率以pmollmin测量具有至少5％，如至少10％或超过20％的以下初始速率，该初始速率是使用WO0123613通过引用并入本文的实施例91-95提供的方法，当使用与待测修饰寡核苷酸具有相同碱基序列，但寡核苷酸中所有单体之间仅含有具有硫代磷酸酯键的DNA单体时所测定的初始速率。间隙体如本文所用的术语间隙体是指反义寡核苷酸，其包含RNaseH募集寡核苷酸区间隙，该区的5’和3’侧翼为包含一个或多个亲和力增强的修饰核苷的区域侧翼或翼。本文描述了各种间隙体设计。头部和尾部是能够募集RNaseH的寡核苷酸，其中一个侧翼缺失，即仅寡核苷酸的一个末端包含亲和力增强的修饰核苷。对于头部，3’侧翼缺失即5’侧翼包含亲和力增强的修饰核苷，对于尾部，5’侧翼缺失即3’侧翼包含亲和力增强的修饰核苷。LNA间隙体术语LNA间隙体是间隙体寡核苷酸，其中至少一种亲和力增强的修饰核苷是LNA核苷。混合翼间隙体术语混合翼间隙体或混合侧翼间隙体是指LNA间隙体，其中至少一个侧翼区包含至少一个LNA核苷和至少一个非LNA修饰的核苷，如至少一个2’取代的修饰核苷，如例如，2’-O-烷基-RNA、2’-O-甲基-RNA、2’-烷氧基-RNA、2’-O-甲氧基乙基-RNAMOE、2’-氨基-DNA、2’-氟-RNA和2’-F-ANA核苷。在一些实施方案中，混合翼间隙体具有一个侧翼，其仅包含LNA核苷例如5’或3’，另一侧翼相应的3’或5’包含2’取代的修饰核苷和任选的LNA核苷。缀合物如本文所用的术语缀合物是指与非核苷酸部分缀合部分或C区或第三区共价连接的寡核苷酸。本发明的寡核苷酸与一个或多个非核苷酸部分的缀合，可以例如，通过影响寡核苷酸的活性、细胞分布、细胞摄取或稳定性改善寡核苷酸的药理学。在一些实施方案中，缀合部分通过改善寡核苷酸的细胞分布、生物利用度、代谢、排泄、渗透性和或细胞摄取改变或增强寡核苷酸的药代动力学特性。特别地，缀合物可以将寡核苷酸靶向特定器官、组织或细胞类型，从而增强寡核苷酸在该器官、组织或细胞类型中的有效性。同时，缀合物可用于降低寡核苷酸在非靶细胞类型、组织或器官中的活性，例如，脱靶活性或在非靶细胞类型、组织或器官中的活性。WO9307883和WO2013033230提供了合适的缀合部分，其通过引用并入本文。其他合适的缀合部分是能够与脱唾液酸糖蛋白受体ASGPr结合的那些。特别地，三价N-乙酰半乳糖胺缀合部分适合结合ASGPr，参见例如WO2014076196、WO2014727232和WO2014179620通过引用并入本文。寡核苷酸缀合物及其合成还报道于Manoharan，AntisenseDrugTechnology,Principles,Strategies,andApplications,S.T.Crooke编著,第16章,MarcelDekker,Inc.,2001以及Manoharan,AntisenseandNucleicAcidDrugDevelopment,2002,12,103的综述评述中，每一篇均通过引用整体并入本文。在一个实施方案中，非核苷酸部分缀合部分选自糖类、细胞表面受体配体、药物、激素、亲脂性物质、聚合物、蛋白质、肽、毒素例如细菌毒素、维生素、病毒蛋白例如衣壳或其组合。缀合物接头连接或接头是两个原子之间的连接，其通过一个或多个共价键将一个化学基团或目标片段连接到另一个化学基团或目标片段。缀合部分可以直接地或通过连接部分例如接头或连接子与寡核苷酸连接。接头用于共价连接第三区，例如，寡核苷酸例如A或C区的末端的缀合部分。在本发明的一些实施方案中，本发明的缀合物或寡核苷酸缀合物可任选地包含位于寡核苷酸和缀合部分之间的接头区。在一些实施方案中，缀合物和寡核苷酸之间的接头是可生物裂解的。可生物裂解的接头包含或由生理学不稳定的键组成，在哺乳动物体内通常遇到的或类似于哺乳动物体内通常遇到的条件下该生理学不稳定的键可被裂解。生理学上不稳定的接头被化学转化例如，裂解的条件包括化学条件，如在哺乳动物细胞中存在的pH、温度、氧化或还原条件或试剂、以及盐浓度或类似于哺乳动物细胞中遇到的这些条件。哺乳动物细胞内条件还包括通常存在于哺乳动物细胞中的酶活性，如蛋白水解酶或水解酶或核酸酶的活性。在一个实施方案中，可生物裂解的接头易受S1核酸酶裂解。在优选的实施方案中，核酸酶敏感性接头包含1至10个核苷，如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个核苷，更优选2至6个核苷，最优选2至4个连接的核苷，其包含至少两个连续的磷酸二酯键，如至少3或4或5个连续的磷酸二酯键。优选地，核苷是DNA或RNA。含有可生物裂解的接头的磷酸二酯在WO2014076195中更详细地描述通过引用并入本文。缀合物也可以通过不可生物裂解的接头与寡核苷酸连接，或者在一些实施方案中，缀合物可以包含与可生物裂解的接头共价连接的不可裂解的接头。接头不一定是可生物裂解的，但主要用于将缀合部分共价连接至寡核苷酸或可生物裂解的接头。这种接头可包含链结构或重复单元的低聚物，如乙二醇、氨基酸单元或氨基烷基。在一些实施方案中，接头Y区是氨基烷基，如C2-C36氨基烷基，包括例如C6-C12氨基烷基。在一些实施方案中，接头Y区是C6氨基烷基。缀合物接头基团可以通过使用氨基修饰的寡核苷酸和缀合基团上的活化酯基团常规连接到寡核苷酸上。治疗本文使用的术语“治疗”等通常意指获得所需的药理学和或生理学效果。就部分或完全治愈疾病和或归因于疾病的副作用而言，该效果是治疗性的。本文所用的术语“治疗”涵盖对受试者疾病的任何治疗，包括：a抑制疾病，即阻止其发展，如抑制HBsAg和或HBeAg的增加；或b改善即缓解疾病，即引起疾病消退，如抑制HBsAg和或HBeAg产生。因此，改善和或抑制HBV感染的化合物是治疗HBV感染的化合物。优选地，如本文所用的术语“治疗”涉及对已显现病症的医学干预，如治疗已经明确定义和表现的HBV感染。预防本文中术语“预防”或“防止”涉及预防性治疗，即涉及其目的是预防而不是治愈疾病的措施或方法。预防意味着获得所需的药理学和或生理学效果，其在完全或部分预防疾病或其症状方面是预防性的。因此，本文中“预防HBV感染”包括预防受试者中发生HBV感染，以及预防HBV感染症状的发生。在本发明中，特别考虑了预防从HBV感染母亲导致孩子感染HBV。患者出于本发明的目的，“受试者”或“患者”可以是脊椎动物。在本发明的上下文中，术语“受试者”包括人和其他动物，特别是哺乳动物和其他生物。因此，本文提供的手段和方法适用于人类治疗和兽医应用。因此，本文的受试者可以是动物，如小鼠、大鼠、仓鼠、兔、豚鼠、雪貂、猫、狗、鸡、绵羊、牛物种、马、骆驼或灵长类动物。优选地，受试者是哺乳动物。更优选地，受试者是人。HBV感染术语“乙型肝炎病毒感染”或“HBV感染”在本领域中是公知的，并且是指由乙型肝炎病毒HBV引起并影响肝脏的传染病。HBV感染可以是急性或慢性感染。一些感染者在感染初期没有任何症状，有些患者出现呕吐、皮肤发黄、疲倦、尿色深、腹痛等疾病的快速发作“HepatitisBFactsheetN°204”.who.int.2014年7月，2014年11月4日可检索。这些症状通常持续数周，可能导致死亡。症状开始可能需要30到180天。在那些在出生时被感染的人中，90％发展为慢性乙型肝炎感染，而在5岁以后感染的人中只有不到10％发展为慢性乙型肝炎感染“HepatitisBFAQsforthePublic-Transmission”,美国疾病控制和预防中心CDC,2011-11-29可检索。大多数慢性病患者没有症状；然而，最终可能发展为肝硬化和肝癌Chang,2007,SeminFetalNeonatalMed,12:160-167。这些并发症导致15％至25％的慢性病患者死亡“HepatitisBFactsheetN°204”.who.int.2014年7月,2014年11月4可检索。本文中，术语“HBV感染”包括急性和慢性乙型肝炎感染。术语“HBV感染”还包括初始感染的渐近阶段、症状阶段、以及HBV感染的渐近慢性阶段。酶活性片段本文中，SEQIDNO：1或2即PAPD5的酶活性片段涉及包含SEQIDNO：1或2即PAPD5的一段连续氨基酸残基且保留PAPD5的生物学活性即功能的那些多肽，特别是保留聚腺苷酸聚合酶功能。与此一致，本文中，SEQIDNO：3即PAPD7的酶活性片段涉及包含SEQIDNO：3即PAPD7的一段连续氨基酸残基且保留PAPD7的生物学活性即功能的多肽，特别是保留聚腺苷酸聚合酶功能。PAPD5和PAPD7的酶活性片段的实例是核苷酸转移酶结构域和Cid1polyA聚合酶。多肽本文中，术语“多肽”包括包含或由通过肽酰胺键连接的氨基酸单体组成的所有分子。因此，术语“多肽”包括所有氨基酸序列，如肽、寡肽、多肽和蛋白质。本文描述的“多肽”可以是天然存在的多肽或非天然存在的多肽。与天然存在的对应物相比，非天然存在的多肽可包含至少一个突变例如氨基酸取代、氨基酸缺失或氨基酸添加。非天然存在的多肽也可以克隆到载体中和或有效连接至启动子，该启动子不是该多肽的天然启动子。该启动子可以是组成型活性启动子。本文所用的术语“氨基酸”或“残基”包括天然存在的氨基酸以及其他氨基酸例如，非天然存在的氨基酸、不是由核酸序列编码的氨基酸、合成氨基酸等的L-和D-异构体。天然存在的氨基酸的实例是丙氨酸Ala；A、精氨酸Arg；R、天冬酰胺Asn；N、天冬氨酸Asp；D、半胱氨酸Cys；C、谷氨酰胺Gln；Q、谷氨酸Glu；E、甘氨酸Gly；G、组氨酸His；H、异亮氨酸Ile；I、亮氨酸Leu；L、赖氨酸Lys；K、蛋氨酸Met；M、苯丙氨酸Phe；F、脯氨酸Pro；P、丝氨酸Ser；S、苏氨酸Thr；T、色氨酸Trp；W、酪氨酸Tyr；Y、缬氨酸Val；V。翻译后修饰的天然存在的氨基酸是脱氢酪氨酸dehydrobutyrine，Dhb和labioninLab。以上描述了非天然存在的氨基酸的实例。与天然形式存在的多肽的氨基酸序列相比，非天然存在的多肽可包含一个或多个与氨基酸序列共价或非共价结合的非氨基酸取代或异源氨基酸取代，例如报告分子或其他配体。化合物本文中，术语“化合物”意指任何核酸分子，如根据本发明的RNAi分子或包含这种核酸分子的任何缀合物。例如，本文化合物可以是针对PAPD5或PAPD7的RNAi分子，特别是反义寡核苷酸、siRNA或shRNA。组合物术语“组合物”也可用于描述核酸分子化合物。核酸分子组合物具有小于20％的杂质，优选小于15％或10％的杂质，更优选小于9％、8％、7％或6％的杂质，最优选小于5％的杂质。杂质通常是比主要核酸分子组分短一个或两个核苷酸n-1或n-2的核酸分子。抑制剂术语“抑制剂”是本领域已知的并且涉及能够完全或部分地预防或降低a一种或多种特定蛋白质例如PAPD5和或PAPD7的生理功能即活性的化合物物质或组合物。在本发明的上下文中，PAPD5或PAPD7的“抑制剂”能够通过预防或降低PAPD5或PAPD7基因产物的表达分别预防或降低PAPD5或PAPD7的活性功能。因此，PAPD5或PAPD7的抑制剂可导致PAPD5或PAPD7的表达水平降低例如PAPD5或PAPD7mRNA或PAPD5或PAPD7蛋白的水平降低，其反映在PAPD5或PAPD7的功能即活性降低，其中该功能包括聚腺苷酸聚合酶功能。因此，在本发明的上下文中，PAPD5或PAPD7的抑制剂还可以包括能够降低PAPD5或PAPD7水平的PAPD5或PAPD7表达的转录抑制因子。优选的抑制剂是本发明的核酸分子。测量文中，术语“测量”还表示“分析”或“测定”即检测和或量化。例如，术语“测量PAPD5和或PAPD7的表达和或活性”意指测定PAPD5和或PAPD7表达和或活性的量，例如，测定PAPD5和或PAPD7多肽即蛋白质的量。测量即测定PAPD5和或PAPD7蛋白质的量和或活性的方法是本领域已知的并且在上文中描述。与此一致，术语“测量测试化合物是否抑制HBV的增殖”是指分析或测定即检测和或定量测试化合物或组合物是否抑制HBV的增殖。通过参考非限制性附图和实施例进一步描述本发明。实施例实施例说明了本发明。材料和方法寡核苷酸基序序列和寡核苷酸化合物表3：靶向人PAPD5转录物SEQIDNO：10的寡核苷酸基序序列由SEQIDNO表示的列表、其设计以及基于基序序列所设计的特异性反义寡核苷酸化合物由CMPIDNO表示。基序序列代表寡核苷酸中存在的核碱基的连续序列。设计是指间隙体设计，F-G-F’，其中每个数字代表连续修饰的核苷的数目，例如，2’修饰的核苷第一个数字＝5’侧翼，然后是DNA核苷的数目第二个数字＝间隙区，然后是修饰的核苷的数目，例如2’修饰的核苷第三个数字＝3’侧翼，任选地之前或之后有DNA和LNA的其他重复区，其不一定是与靶核酸互补的连续序列的一部分。表4：靶向人PAPD7转录物SEQIDNO：11的寡核苷酸基序序列由SEQIDNO表示的列表、其设计以及基于基序序列所设计的特异性反义寡核苷酸化合物由CMPIDNO表示。基序序列代表寡核苷酸中存在的核碱基的连续序列。设计是指间隙体设计，F-G-F’，其中每个数字代表连续修饰的核苷的数目，例如，2’修饰的核苷第一个数字＝5’侧翼，然后是DNA核苷的数目第二个数字＝间隙区，然后是修饰的核苷的数目，例如2’修饰的核苷第三个数字＝3’侧翼，任选地之前或之后有DNA和LNA的其他重复区，其不一定是与靶核酸互补的连续序列的一部分。化合物化学合成来自两个化学系列DHQ和THP的每种化合物，以适合通过HYBRIGENICSSERVICESSAS进行Y3H筛选。两种化合物都包括PEG5接头，并用甲氧苄氨嘧啶TMP锚定配体标记表5。表5：TMP标记的小分子化合物IDY3HULTImateYChemHTM筛选这两种化合物由Roche提供给HYBRIGENICSSERVICESSAS并测试其渗透性和毒性。然后针对HYBRIGENICS的cDNA人胎盘文库PLA筛选化合物。使用不同的化合物浓度、根据针对HybrigenicsULTImateY2HTM开发的优化细胞-至-细胞配对方案进行筛选表6。表6：YChemH筛选IDY3HULTImateYChemHTM依赖性测定法在96孔格式中挑选从筛选中获得的克隆，并且使用斑点测定在依赖性测定法中评估选择条件下HIS+生长的阳性克隆。只挑选在存在标记化合物的选择培养基中能够生长的克隆、加工细胞裂解、PCR、基因测序并使用Blast分析绘制蛋白比对。Y3HULTImateYChemHTM1×1验证实验-猎物片段在该验证步骤中，在1×1实验中测试每个鉴定的片段猎物和一个化学探针HBX129653，HBX129654。从酵母细胞中提取来自筛选文库的3个选择的猎物的质粒，在大肠杆菌中扩增并重新转化到YHGX13酵母细胞中。对于每次相互作用，将表达钓钩和猎物构建体的二倍体酵母培养物的DO1、110、1100和11000在不含色氨酸、亮氨酸和组氨酸，并补充有化学探针和FK506的选择培养基上点样。一式两份测试相互作用。每种化学化合物和浓度DMSO；5、10和20μM的HBX129653；5、10和20μM的HBX129654；5μM的HBX24786甲氧苄胺Trimethoprim，TMP和5μM的HBX129634TMP-PEG5-OH使用一个板。将板在30℃下孵育3天。Y3HULTImateYChemHTM1×1验证实验-全长蛋白质从N-末端密码子优化的基因片段以除去高GC含量和商业上可获得的蛋白质C-末端区的克隆重构全长PAPD5var1NM_001040284.2和PAPD7varX1XM_005248234.2的编码序列，并将其与Gal4激活结构域AD符合读框地克隆到质粒pP7AD-Prey中，该质粒衍生自原始pGADGHBartel等人,1993，在Cellularinteractionsindevelopment:Apracticalapproach.Hartley,D.A.编辑,牛津大学出版社,牛津,第153-179页。通过对整个插入物进行测序来检查构建体。对于每个猎物，进行用猎物质粒转化的YHGX13Y187ade2-101::loxP-kanMX-loxP,matα和用DHFR钓钩二氢叶酸还原酶转化的YPT6AT酵母细胞mata之间的小配对，以产生二倍体酵母培养物。对于每次相互作用，将表达钓钩和猎物构建体的二倍体酵母培养物的DO1、110、1100和11000点样在不含色氨酸、亮氨酸和组氨酸，并补充有化学探针和FK506的选择培养基上。一式两份测试相互作用。每种化学化合物和浓度DMSO；5、10和20μM的HBX129653；5、10和20μM的HBX129654；5μM的HBX24786甲氧苄胺TMP和5μM的HBX129634TMP-PEG5-OH使用一个板。将板在30℃下孵育3天。Y3HULTImateYChemHTM-与游离化合物竞争竞争测定法基于之前描述的1×1验证，其中化学探针HBX129653，HBX129654的浓度恒定，化学探针的母体化合物MOL653，MOL654或其无活性对映体INACT653，INACT654的浓度递增表7。竞争测定法在选择培养基上，游离化合物的8个浓度0、0.25、0.5、1、2、5、10和20μM下进行，并且标记的Y3H-化合物具有恒定的浓度1μM。表7：YChemH竞争IDHepaRG细胞培养在37℃在具有5％CO2的潮湿气氛中在完全HepaRG生长培养基中培养HepaRG细胞BiopredicsInternational,Rennes,法国,目录号HPR1012周，该完全HepaRG生长培养基由William’sE培养基GIBCO、生长培养基补充物Biopredics,目录号ADD710和1％vvGlutaMAX-IGibco#32551和1xPenStrepGibco,#15140组成。为了启动分化，将0.9％vvDMSOSigma-Aldrich，D2650加入到铺满培养细胞的生长培养基中。一周后，用完全分化培养基补充有1.8％vvDMSO的HepaRG生长培养基代替培养基，其中细胞维持约4周，每7天更新分化培养基。分化的HepaRG细胞dHepaRG呈现由单层胆管样细胞围绕的肝细胞样细胞岛。在HBV感染和化合物处理之前，将dHepaRG细胞以每孔60,000个细胞接种到胶原蛋白I包被的96孔板Gibco，Cat#A11428-03中的100μL完全分化培养基中。在HBV感染之前，允许细胞在铺板后在96孔板中恢复其分化型约1周。dHepaRG细胞的HBV感染用HBV颗粒以MOI30感染dHepaRG细胞。由产生HBV的HepG2.2.15细胞产生HBV颗粒Sells等人1987ProcNatlAcadSciUSA84,1005–1009。先前已经描述了dHepaRG培养条件、分化和HBV感染Hantz,2009,J.Gen.Virol.,2009,90:127-135。简言之，加入含有4％PEG-8000和病毒原液20至30GE细胞的完全分化培养基由William’sE培养基GIBCO、生长培养基补充物Biopredics,目录号ADD710和1％vvGlutaMAX-IGibco#32551和1xPenStrepGibco,#15140组成的HepaRG生长培养基,补充有1.8％vvDMSO120μL孔。感染后一天，用磷酸盐缓冲液洗涤细胞三次，并在实验期间每两天更换培养基完全分化培养基。siRNA治疗HBV感染的HepaRG从GEDharmaconONTARGETplus获得四种不同siRNA池表8。表8：siRNA概述用针对PAPD5、PAPD7、PAPD5和PAPD7两者的siRNA池或作为对照的非靶向siRNA处理用HBV感染前一天的细胞和感染后4天的细胞。根据制造商的方案，使用DharmaFect4GEDharmacon；目录号T-2004-01和OPTI-MEMThermoScientific；目录号51985034转染siRNA各25nM。实验进行11天。HBV抗原测量为了评估对HBV抗原表达和分泌的影响，在第11天收集上清液。根据制造商的方案，使用CLIAELISA试剂盒AutobioDiagnostic#CL0310-2,#CL0312-2测量HBVHBsAg和HBeAg水平。简言之，将每孔25μL上清液转移到相应的抗体包被的微量滴定板中，并加入25μL酶缀合试剂。将板在室温下在摇床上孵育60分钟，然后使用自动洗涤器用洗涤缓冲液洗涤孔5次。向每个孔中加入25μL底物A和B。将板在摇床上在室温下孵育10分钟，然后使用Envision发光读数器PerkinElmer测量发光。细胞活力从HBV感染的dHepaRG细胞中除去上清液后，将细胞与CellTiterGloOneSolutionPromega一起孵育以测量细胞活力。用LNA寡核苷酸处理HBV感染的dHepaRG细胞后，使用细胞计数试剂盒-8Sigma-Aldrich，#96992根据制造商的方案测量细胞活力。简言之，从细胞中除去培养基并用110μL含有9％细胞计数试剂盒-8的培养基替换。将细胞在37℃下孵育1小时。将上清液转移到新的96孔板中，使用Envision发光读数器PerkinElmer测量450nm处的吸光度。细胞内mRNA的实时PCR对于细胞内mRNA分离，用PBSGibco洗涤dHepaRG一次，并使用MagNAPure“96细胞RNA大体积试剂盒”Roche#05467535001裂解。可以在-80℃下储存裂解物。对于实时qPCR反应，使用AB7900HT序列检测系统AppliedBiosystems，基因表达主混合物ThermoFisherScientific。使用用于检测HBVmRNA的HBV核心特异性引物整合的DNA技术表9和测量在siRNA存在时PAPD5和PAPD7减少的基因特异性表达分析探针ThermoFisherScientific；PAPD5目录号4331182；PAPD7目录号4331182。使用针对b-肌动蛋白的表达分析探针ThermoFisherScientific；PAPD5目录号4331182对样品进行归一化。表9：HBV核心特异性TaqMan探针从病毒制备物中提取和定量HBVDNA根据制造商的方案，使用QIAampUltraSensVirus试剂盒Qiagen，#53704进行HBVDNA提取，并进行以下优化。将30μL和3μL病毒样品稀释到1mLPBS中，然后加入缓冲液AC。第一次离心步骤在全速和4℃下进行45分钟。使用QuantStudio12KFlexAppliedBiosystems、TaqMan基因表达主混合物AppliedBiosystems，#4369016和上述表9中所示引物的1：1：0.5的预混物和100μM重构的探针，通过qPCR一式两份定量HBVDNA。使用以下设置进行qPCR：UDG孵育2分钟，50℃，酶活化10分钟，95℃和qPCR40个循环：95℃15秒用于变性，60℃1分钟用于退火和延长。基因组等效计算基于由已知浓度的HBV基因型D质粒稀释液产生的标准曲线。寡核苷酸合成寡核苷酸合成通常是本领域已知的。以下是可以应用的方案。本发明的寡核苷酸可以通过在装置、支持物和所用浓度方面稍微改变的方法制备。使用亚磷酰胺方法在1μmol规模的Oligomaker48上，在尿苷通用支持物上合成寡核苷酸。在合成结束时，使用氨水在60℃下将寡核苷酸从固体支持物上切割5-16小时。通过反相HPLCRP-HPLC或通过固相提取纯化寡核苷酸，通过UPLC表征，并通过ESI-MS进一步确认分子量。寡核苷酸的延长：通过使用含0.1M的5’-O-DMT-保护的亚酰胺的乙腈和含DCI4,5-二氰基咪唑0.25M的乙腈溶液作为激活剂进行β-氰乙基-亚磷酰胺DNA-ABz、DNA-Gibu、DNA-CBz、DNA-T、LNA-5-甲基-CBz、LNA-ABz、LNA-Gdmf或LNA-T的偶联。对于最后的循环，可以使用具有所需修饰的亚磷酰胺，例如，用于连接缀合基团或这样的缀合基团的C6接头。通过使用氢化黄原胶0.01M，在9：1的乙腈吡啶中进行用于引入硫代磷酸酯键的硫醇化。可以使用含0.02M碘的7：2：1的THF吡啶水引入磷酸二酯键。其余试剂是通常用于寡核苷酸合成的试剂。对于后固相合成缀合，可以在固相合成的最后一个循环中使用市售的C6氨基接头亚磷酰胺，并且在从固体支持物脱保护和切割后，分离氨基连接的脱保护寡核苷酸。使用标准合成方法通过官能团活化引入缀合物。通过RP-HPLC纯化：通过制备型RP-HPLC在PhenomenexJupiterC1810μ150x10mm柱上纯化粗化合物。使用0.1M乙酸铵，pH8和乙腈作为缓冲液，流速为5mLmin。将收集的级分冻干，得到纯化的化合物，通常为白色固体。缩写：DCI：4,5-二氰基咪唑DCM：二氯甲烷DMF：二甲基甲酰胺DMT：4,4’-二甲氧三苯甲基THF：四氢呋喃BZ：苯甲酰Ibu：异丁酰RP-HPLC：反相高效液相色谱法Tm分析：将寡核苷酸和RNA靶磷酸盐连接的，PO双链体在500ml无RNase的水中稀释至3mM，并与500ml2xTm缓冲液200mMNaCl、0.2mMEDTA、20mM磷酸钠，pH7.0混合。将溶液加热至95℃，3分钟，然后在室温下退火30分钟。在配备有Peltier温度编程器PTP6的Lambda40UVVIS分光光度计上使用PETemplab软件PerkinElmer测量双链体解链温度Tm。温度从20℃上升到95℃然后下降到25℃，记录260nm处的吸光度。使用解链和退火的一阶导数firstderivative和局部最大值来评估双链体Tm。实施例1：DHQ和THP结合PAPD5和PAPD7在Y3HUltimateYChemH筛选中将PAPD57鉴定为DHQ和THP的共同相互作用配偶体如材料和方法部分中所述，对于两种化合物DHQ和THP，通过Y3H筛选中的大量片段鉴定了两种蛋白质PAPD5变体1：NP_001035374；变体2：NP_001035375和PAPD7XP_005248291。通过HYBRIGENICS将鉴定的蛋白质根据A的置信度得分标度A-D排序表10。表10：PAPD57的YChemH筛选结果可以使用鉴定的猎物片段的Y3HULTImateYChemH1×1验证和进一步的全长蛋白质来确认PAPD57与DHQ和THP的相互作用在第一验证步骤中，选择在第一筛选中鉴定的三个片段用于1×1验证测定法如材料和方法部分中所述并在三种不同浓度5、10和20μM下测试表11。表11：选择用于验证测定法的相互作用片段相互作用#猎物片段ID猎物蛋白质APLA_RP6_hgx4240v1_pB409_A-15PAPD7BPLA_RP6_hgx4241v1_pB409_A-112PAPD5变体1CPLA_RP6_hgx4240v1_pB409_A-24PAPD5变体2在最低测试浓度下所有三个片段都被验证可作为DHQ和THP的特异性结合物图1。在第二验证步骤中，合成PAPD5和PAPD7的全长蛋白质，并用于DHQ和THP的1×1验证如材料和方法部分中所述表12。表12：在1×1验证测定法中使用的全长猎物蛋白质的参考ID相互作用#HYBRIGENICS参考猎物蛋白质Ahgx4386v1_pP7PAPD5变体1全长Bhgx4388v2_pP7PAPD7变体1全长在最低测试浓度下证实了这些全长蛋白质与DHQ和THP化合物之间的相互作用，并显示对化学探针的特异性图2。在Y3H中PAPD57与DHQ和THP的相互作用可以被这两种游离活性化合物竞争，但不被无活性对映体竞争在验证DHQ和THP与蛋白质片段和全长PAPD5和PAPD7结合后，使用无活性或活性游离化合物在Y3HULTImateYChenH竞争实验如材料和方法部分中所述中确认结合表13。在母体活性化合物存在下，而不是在无活性对映体存在下，酵母生长损失减少，这意味着母体化合物与化学探针竞争并与蛋白质靶标相互作用。针对所有测试的化合物，根据制造商的方案，使用CellTiter-Glo发光细胞活力测定法Promega测试在最高浓度20μM下，非选择培养基上的毒性。对于任何化合物，在该浓度下未观察到毒性，因为酵母生长未受影响数据未显示。对于二者的活性游离母体化合物DHQ和THP分别为MOL653和MOL654可以观察到竞争，其中竞争结合全长蛋白质所需的浓度低于片段相互作用所需的浓度图3+4。成功的交叉竞争表明DHQ和THP对PAPD57具有共同的结合位点，或者至少在彼此靠近处结合。表13：竞争测定法中使用的猎物蛋白质的参考ID相互作用#猎物片段ID猎物蛋白质APLA_RP6_hgx4241v1_pB409_A-112PAPD5变体1实验片段Bhgx4386v1_pP7PAPD5变体1全长CPLA_RP6_hgx4240v1_pB409_A-15PAPD7变体X1实验片段Dhgx4388v2_pP7PAPD7变体X1全长实施例2：用siRNA抑制PAPD5和或PAPD7导致有效治疗HBV感染为了将DHQ和THP与PAPD57的结合以及这两种蛋白质对HBV基因表达的影响关联起来，我们使用RNAi技术降低天然HBV感染的dHepaRG中的这些蛋白质并监测这种降低对病毒参数的影响。为此，如在材料和方法部分中所述，我们在HBV感染的dHepaRG细胞中使用针对PAPD5和PAPD7的siRNA池参见表8。PAPD5的降低导致病毒表达通过测量分泌的HBsAg和HBeAg以及细胞内HBVmRNA的抑制使用如材料和方法部分中所述的CLIAELISA和实时PCR测量。虽然PAPD5mRNA的降低显著降低了HBV基因表达，但PAPD7的抑制对HBV表达具有适度的作用图7。然而，当组合针对PAPD7和PAPD5的siRNA时，观察到增强的协同抗HBV活性图7，表明不存在PAPD5时PAPD7具有补偿作用。实施例3：DHQ和THP有效降低HBsAg和HBeAg使用HBsAg和HBeAg作为读数，在HepG2.2.15细胞中测量DHQ和THP及其变体针对HBV感染的功效。将HepG2.2.15细胞Sells等人1987ProcNatlAcadSciUSA84,1005–1009在96孔板15.000细胞孔，100uL中在DMEM+GluTaMax-1GiBCO目录号10569、1％PenStrepGibcoCat.15140、10％FBSClontechCat.No.631106、遗传霉素0.25ugmlInvitrogen10131035中培养。使用DMSO中的三倍系列稀释液测试化合物，最高浓度为100μM，系列稀释9次。每个化合物一式四份inquadricate测试。将细胞培养3天，收集上清液，如材料和方法部分所述测量HBsAg和HBeAg。测试化合物在降低HBsAg和HBeAg分泌中的IC50值如下所示：HBX129653DHQ–TMP:IC50HBsAg1.181uMHBX129654THP–TMP:IC50HBsAg0.299uMMOL653DHQ–游离-活性:IC50HBsAg0.003uM；IC50HBeAg0.007uMMOL654THP–游离-活性:IC50HBsAg0.003uMINACT653DHQ–游离-无活性:IC50HBsAg3.15uMINACT654THP–游离-无活性:IC50HBsAg25uM实施例4：筛选靶向PAPD5的反义寡核苷酸的体外功效使用16至20mer间隙体在PAPD5mRNA上进行寡核苷酸筛选。在HeLa细胞的体外实验中进行功效测试。细胞系HeLa细胞系购自EuropeanCollectionofAuthenticatedCellCulturesECACC，#93021013，并按照供应商的建议在37℃，5％CO2的潮湿培养箱中维持。对于测定法，将2,500个细胞孔接种在具有10％胎牛血清FBS、2mM谷氨酰胺AQ、1％NEAA、25μgml庆大霉素的Eagle’s最小必需培养基Sigma，M2279的96多孔板中。寡核苷酸功效将细胞孵育24小时，然后加入溶解在PBS中的寡核苷酸。寡核苷酸的最终浓度为5和25μM，最终培养体积为100μl孔。加入寡核苷酸化合物后3天收获细胞，并使用PureLinkPro96RNA纯化试剂盒Ambion根据制造商的说明提取RNA。在RNALNA双链体变性90℃，40秒后，使用一步方案qScriptTMXLTOne-StepRT-qPCRLowROXTM，来自QuantaBioscience,#95134-500，根据提供者的建议进行QPCR，该一步方案为用TaqMan引物测定法针对双链体中感兴趣基因PAPD5Hs00223727_m1，FAM-MGB，LifeTechnologies和持家基因GUSBHu_4326320E，VIC-MGB，LifeTechnologies的设置。相对PAPD5mRNA表达水平在表14中显示为平均对照样品PBS处理的细胞的％。图8显示了用各寡核苷酸化合物在PAPAD5编码序列上实现的靶标敲低。表14：抗PAPD5化合物的体外功效双链体QPCR的单个实验。将HeLa细胞中的PAPD5mRNA水平归一化至GUSB，并显示为对照的％PBS处理的细胞。实施例5：筛选靶向PAPD7的反义寡核苷酸的体外功效基本上如实施例4中所述进行PAPD7mRNA上的寡核苷酸筛选，其中TaqMan引物测定法替换为目的基因PAPD7Hs00173159_m1，FAM-MGB，LifeTechnologies。相对PAPD7mRNA表达水平在表15中显示为平均对照样品PBS处理的细胞的％。图9显示了用各寡核苷酸化合物在PAPAD5编码序列上实现的靶标敲低。表15：抗PAPD7化合物的体外功效双链体QPCR的单个实验。将HeLa细胞中的PAPD5mRNA水平归一化至GUSB，并显示为对照的％PBS处理的细胞。实施例6：使用通过剥裸gymnosis递送至细胞的所选靶向PAPD5或PAPD7的反义寡核苷酸对HBV感染的dHepaRG细胞的作用。选择来自实施例4和5的最有效的寡核苷酸，以测试其对HBV感染的dHepaRG细胞中HBV增殖参数的作用。在96孔板中培养HBV感染的dHepaRG细胞描述于材料和方法部分，dHepaRG细胞的HBV感染。HBV感染一天后，使用无辅助摄取剥裸将20μM寡核苷酸递送至细胞。测试总共40种寡核苷酸，20种靶向PAPD5，20种靶向PAPD7。一式三份进行实验，以及PBS对照。在第4天和第7天重复寡核苷酸处理，包括更换培养基这与材料和方法部分中描述的每2天更换不同。在感染后第11天，收获上清液，并使用CLIAELISA测定法评估HBsAg和HBeAg水平参见材料和方法，HBV抗原测量。如材料和方法部分细胞活力中所述，测量细胞活力。根据制造商的方案，使用MagNAPure机制人和MagNAPure96细胞RNA大体积试剂盒Roche，#05467535001从细胞中提取mRNA。使用QuantStudio12KFlexAppliedBiosystems、TaqManRNA-to-CT一步试剂盒AppliedBiosystems，#4392938、人ACTB内源对照AppliedBiosystems，#4310881E，通过qPCR一式两份定量HBVmRNA和PAPD5或PAPD7mRNA。Taqman试剂与以下商售ThermoFisher科学引物HBVPa03453406_s1；PAPD5Hs00900790_m1；和PAPD7Hs00173159_m1一起使用。使用归一化至参考基因ACTBThermoFisherSceintific4310881E和PBS处理细胞的比较循环阈值2-ΔΔCt方法分析mRNA表达。寡核苷酸处理对PAPD5或PAPD7mRNA的作用以及对HBV增殖参数HBsAg的作用显示在表16和表17中。表16：PAPD5靶向化合物对靶mRNA和HBsAg的体外作用3次的平均值表17：PAPD7靶向化合物对靶mRNA和HBsAg的体外作用3次的平均值从这些数据可以看出，对于大多数寡核苷酸化合物，PAPD5mRNA表16和PAPD7mRNA表17的抑制是非常有效的。然而，观察到的PAPD5和PAPD7mRNA降低对HBsAg水平的作用不太明显，即使在无辅助递送寡核苷酸后处理11天的细胞中该作用也不太明显。此处，仅PAPD5靶向的CMPIDNO：23_1、26_1和115_1显示出明显的HBsAg抑制，并且PAPD7靶向化合物中仅CPMIDNO：229_1显示出明显的HBsAg抑制。不受理论束缚，这可能是由于在本测定法中由靶标敲低引起的对HBsAg的抑制作用起效缓慢，因此，对于一些化合物，除非在稍后时间点测定，否则不会看到HBsAg抑制。实施例7：使用通过剥裸递送至细胞的PAPD5和PAPD7靶向反义寡核苷酸的组合制剂对HBV感染的dHepaRG细胞的作用。在实施例2中，观察到混合靶向PAPD7的siRNA池与靶向PAPD5的siRNA池导致协同的抗HBV活性。本实施例旨在研究当组合两个单独的单链反义寡核苷酸时是否可以观察到类似的协同作用，其中一个靶向PAPD5，一个靶向PAPD7。如实施例6所述进行实验，其中改变是，不是添加单个寡核苷酸，而是将两种寡核苷酸的组合添加至细胞，使得添加20μM的一个靶向PAPD5的寡核苷酸与20μM靶向PAPD7的第二寡核苷酸。针对组合仅测量HBsAg。寡核苷酸的组合可见于表18，包括对HBV增殖参数、HBsAg抑制的结果。表18：PAPD5和PAPD7靶向化合物的组合对HBsAg的体外作用3次的平均值。表16和17中对单个化合物的HBsAg抑制结果也包括在该表中，以便于比较单个治疗与组合治疗。结果也总结在图10中。在上述测试的40个组合中，18个对HBsAg抑制产生明显的协同作用。在当前测定法中这些协同组合中的7个中的寡核苷酸单独对HBsAg抑制没有产生任何作用。从该实验可以得出结论，即PAPD5和PAPD7靶向寡核苷酸的组合产生对HBsAg抑制的协同作用的可能性很高。实施例8：重复实施例7的所选组合用表19中所示的寡核苷酸组合重复实施例7中的实验。表19：PAPD5和PAPD7靶向化合物的组合对HBsAg的体外作用3次的平均值。表6和17中对各个化合物的HBsAg抑制结果也包括在该表中，以便于比较单个治疗与组合治疗。从这些数据可以看出，实施例7中观察到的协同作用是可重复的。实施例9：使用通过转染递送至细胞的靶向PAPD5或PAPD7的反义寡核苷酸对HBV感染的dHepaRG细胞的作用在以下实验中，研究了使用转染到HBV感染的dHepaRG细胞而不是无辅助递送的寡核苷酸是否可以实现类似的协同结果。使用本文所述的转染测定法分别测试12个PAPD5靶向寡核苷酸表20和13个PAPD7靶向寡核苷酸表21。在用HBV感染后一天，寡核苷酸以500nM孔的终浓度转染至96孔板形式的分化的HepaRG细胞中描述在材料和方法部分，dHepaRG细胞的HBV感染。在转染之前，用100uL无青霉素链霉素的完全分化培养基替换培养基。对于单寡核苷酸处理，将寡核苷酸在Opti-MEM+Glutamax-I还原血清培养基Gibco，#51985中稀释，并根据制造商的说明在室温下以1：1的比例与LipofectamineRNAiMaxInvitrogen，#56532孵育5分钟。然后从该LNA-转染试剂混合物中，取20μl加入细胞顶部。3天后，用完全分化培养基替换培养基。在转染后第5天，如材料和方法部分中所述测量HBsAg，如实施例6中所述测量PAPD5和PAPD7mRNA。另外，组合测试了一些PAPD5和PAPD7寡核苷酸表22。使用与最终浓度为500nM每种寡核苷酸的单一处理相同的方案，将寡核苷酸共转染到HBV感染的HepaRG细胞中。表20：PAPD5靶向化合物对靶mRNA和HBsAg的体外作用。表21：PAPD7靶向化合物对靶mRNA和HBsAg的体外作用表22PAPD5和PAPD7靶向化合物的组合的体外作用。表20和表21中对各个化合物的HBsAg抑制结果也包括在本表中，以便于比较单个治疗与组合治疗。从这些数据可以看出，当使用转染测定法时，12个靶向PAPD5的寡核苷酸中6个有明显的HBsAg抑制作用，这远超过比实施例6中的剥裸测定法gymnoticassay观察到的结果。此外，使用转染测定法也增加了具有HBsAg抑制作用的PAPD7靶向化合物的数量，使得12个化合物中的4个对具有明显的HBsAg抑制作用。来自组合的数据总结在表22和图11中。从这些数据可以看出，12个测试组合中的9个对HBsAg抑制产生明显的协同作用。

权利要求：1.包含核酸分子的组合物用于治疗和或预防乙型肝炎病毒感染的用途，其中所述核酸分子抑制PAP相关结构域5PAPD5的表达和或活性。2.根据权利要求1所述用途的组合物，其中所述组合物是组合制剂，其包含：a.抑制PAPD5表达和或活性的核酸分子；和b.抑制PAP相关结构域7PAPD7的表达和或活性的核酸分子。3.根据权利要求1或2所述用途的组合物，其中所述核酸分子独立地选自：a.单链反义寡核苷酸；b.siRNA分子；c.shRNA分子；和d.基因组编辑器，其包含：i.位点特异性DNA核酸酶或编码位点特异性DNA核酸酶的多核苷酸；和ii.向导RNA或编码向导RNA的多核苷酸。4.根据权利要求2或3所述用途的组合物，其中所述核酸分子选自：a.单链反义寡核苷酸，其包含长度为10至30个核苷酸的连续核苷酸序列，所述核苷酸序列与PAPD5靶核酸至少80％互补，并且能够降低PAPD5的表达；和b.单链反义寡核苷酸，其包含长度为10至30个核苷酸的连续核苷酸序列，所述核苷酸序列与PAPD7靶核酸至少80％互补，并且能够降低PAPD7的表达。5.根据权利要求1至4中任一项所述用途的组合物，其中所述组合物降低HBsAg、HBeAg的分泌和或抑制细胞内HBVmRNA或HBVDNA的产生。6.根据权利要求1至5中任一项所述用途的组合物，其中所述组合物抑制慢性HBV感染的出现或发展和或降低HBV感染者的传染性。7.鉴定预防、改善和或抑制乙型肝炎病毒HBV感染的化合物或组合物的方法，其包括：a.使测试化合物或组合物与表达PAPD5和或PAPD7的细胞接触；b.在存在和不存在所述测试化合物或组合物的情况下，测量PAPD5和或PAPD7的表达和或活性；和c.将降低PAPD5和或PAPD7的表达和或活性的化合物或组合物鉴定为预防、改善和或抑制HBV感染的化合物。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述测试化合物是核酸分子文库，并且步骤c鉴定降低PAPD5或PAPD7mRNA表达至少60％的核酸分子。9.根据权利要求7所述的方法，其中所述测试组合物是能够降低PAPD5的核酸分子和能够降低PAPD7的核酸分子的组合制剂。10.根据权利要求7至9中任一项所述的方法，其中抑制HBV增殖的化合物抑制HBV表面抗原HBsAg的分泌、和或抑制HBV包膜抗原HBeAg的分泌、和或抑制细胞内HBVmRNA的产生。11.单链反义寡核苷酸，其包含长度为10至30个核苷酸的连续核苷酸序列，或由长度为10至30个核苷酸的连续核苷酸序列组成，其中所述连续核苷酸序列与PAPD5靶核酸至少80％互补，并且所述反义寡核苷酸能够降低PAPD5的表达。12.核酸分子，其包含长度为10至30个核苷酸的连续核苷酸序列，或由长度为10至30个核苷酸的连续核苷酸序列组成，其中所述连续核苷酸序列与PAPD7靶核酸至少80％互补，并且所述核酸分子能够降低PAPD7的表达。13.根据权利要求12所述的核酸分子，其中所述核酸分子是单链反义寡核苷酸。14.根据权利要求11至13中任一项所述的反义寡核苷酸或核酸分子，其包含一个或多个2’糖修饰的核苷。15.根据权利要求14所述的反义寡核苷酸或核酸分子，其中所述一个或多个2’糖修饰的核苷独立地选自2’-O-烷基-RNA、2’-O-甲基-RNA、2’-烷氧基-RNA、2’-O-甲氧基乙基-RNA、2’-氨基-DNA、2’-氟-DNA、阿拉伯糖核酸ANA、2’-氟-ANA和LNA核苷。16.根据权利要求14或15所述的反义寡核苷酸或核酸分子，其中所述一个或多个2’糖修饰的核苷是LNA核苷。17.根据权利要求11至16中任一项所述的反义寡核苷酸或核酸分子，其中连续核苷酸序列内的核苷间键是硫代磷酸酯核苷间键。18.根据权利要求11或13至17中任一项所述的反义寡核苷酸，其中寡核苷酸是式5’-F-G-F’-3’的间隙体，其中F和F’区独立地包含1至7个2’糖修饰的核苷，并且G是能够募集RNaseH的6至16个核苷的区域。19.缀合物，其包含根据权利要求11至18中任一项所述的反义寡核苷酸或核酸分子，和至少一个与所述寡核苷酸共价连接的缀合部分。20.组合制剂，其包含a.抑制PAPD5的表达和或活性的核酸分子；和b.抑制PAPD7的表达和或活性的核酸分子。21.根据权利要求20所述的组合制剂，其中所述核酸分子选自权利要求11至18中任一项或权利要求19的缀合物。22.药物组合物，其包含根据权利要求11至18中任一项所述的反义寡核苷酸或核酸分子，或权利要求19所述的缀合物，或权利要求20或21所述的组合制剂。

百度查询： 豪夫迈·罗氏有限公司 用于减少PAPD5或PAPD7 mRNA治疗乙型肝炎感染的核酸分子

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD