申请/专利权人：江苏省农业科学院

申请日：2018-11-20

公开（公告）日：2021-12-07

公开（公告）号：CN109329046B

主分类号：A01H1/04(20060101)

分类号：A01H1/04(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2021.12.07#授权;2019.03.12#实质审查的生效;2019.02.15#公开

摘要：本发明涉及一种长萼片、抗TYLCV樱桃番茄自交系的选育方法。利用抗TYLCV的品种连续自交获得的含有抗性基因Ty‑2的优良材料与优良品种圣桃6号杂交配组，F2代进行抗TYLCV基因的分子标记辅助选择和烟粉虱接种鉴定，获得抗TYLCV基因型为Ty‑2Ty‑2的纯合体和未发病单株种植于田间，后续世代以果实萼片长度为主并结合产量、其他农艺性状进行选择，至F6代选育出农艺性状稳定一致、果实萼片长、抗TYLCV的樱桃番茄自交系。本发明为优良番茄自交系的选育提供了一种新的育种途径，利用其可进而培育出长萼片、抗TYLCV的樱桃番茄杂交种，可在育种与生产中推广应用。

主权项：1.一种长萼片、抗TYLCV樱桃番茄自交系的选育方法，其特征在于包括以下步骤：（1）选用金陵梦玉樱桃番茄品种自交得到F2代；（2）F2代进行Ty-2基因分子标记辅助选择和烟粉虱的接种鉴定，Ty-2基因分子标记引物为：正向引物T0302-F：SEQIDNO.1反向引物T0302-R：SEQIDNO.2；所述引物对F2代基因组进行PCR扩增后，经溴化乙锭染色后观察，选择具有900bp的特征条带的基因纯合体且烟粉虱接种后未发病单株；（3）将上一步选择的F2代中含有900bp的特征条带的基因纯合体且烟粉虱接种后未发病的单株种植于田间，生长期间选择果实大小均匀、花序较长的单株为F3代，在种植F3、F4、F5过程中，继续按照上述标准进行单株选择，到F6代时性状基本稳定，再用Ty-2基因分子标记和烟粉虱接种鉴定，获得抗TYLCV的优良自交系；（4）选用萼片长、不含Ty-2基因的樱桃番茄品种圣桃6号为母本，以获得的抗TYLCV的优良自交系为父本进行杂交，获得F1；（5）种植F1，果实成熟后单株混收留种，将F2代中含有900bp的特征条带的基因纯合体且烟粉虱接种后未发病的单株种植于田间，生长期间选择萼片长、果实大小均匀、花序长的单株为F3代，在种植F3、F4、F5过程中，继续按照该标准单株选择，到F6代时性状基本稳定，再用所述的Ty-2基因分子标记和烟粉虱接种鉴定，获得长萼片、抗TYLCV的优良自交系，该自交系为无限生长类型、长势强、萼片长、果实短椭圆形、单果重18g-23g、具有抗TYLCV特性；番茄果实萼片长度的判断方法为：每个单株测同一成熟度的果实5个，测定时从萼片与果柄连接处测量,当番茄果实萼片长度大于等于3.0cm时，表明樱桃番茄果实萼片长；当长度低于1.5cm时，表明樱桃番茄果实萼片短；当长度介于1.5-3.0cm之间的表明樱桃番茄果实萼片中等。

全文数据：一种长萼片、抗TYLCV樱桃番茄自交系的选育方法技术领域本发明涉及一种培育长萼片、抗TYLCV的樱桃番茄自交系的选育方法，属于植物育种技术领域。背景技术番茄Solanumlycopersicum是世界上重要的蔬菜作物之一，在促进农业发展、农民增收方面发挥着巨大的作用。樱桃番茄以种植效益高、品质较优而深受种植者和消费者的青睐，种植面积不断增大。利用传统的育种方法已经培育出了许多具有优良性状的品种，如多抗、抗逆、耐贮等。自2005年以来由烟粉虱传播的毁灭性病害-番茄黄化曲叶病毒病在我国大面积发生蔓延，该病具有暴发突然、扩展迅速、为害极强、化学方法根本无法防治等特点，一旦发病，尤其在开花前发病，产量大幅度下降甚至绝产，致使我国大部分番茄主产区的番茄生产损失惨重，部分地区造成绝产绝收，农民种植番茄的信心大受打击。只能通过种植抗病品种才能加以解决，而以往育成的樱桃番茄品种对番茄黄化曲叶病毒病缺乏抗性，在此背景下，多家育种单位及公司开展抗TYLCV品种选育研究并育成了相应品种，解决了番茄黄花曲叶病难以防治的问题。然而随着人们生活水平的提高，樱桃番茄主要作为水果生食，除需要具有美丽的外观、可口的品质外，果实是否新鲜也越来越受到消费者的关注。而消费者最简单的评价标准就是看萼片是否发生萎蔫，因此销售的过程就需要带萼片销售，生产上对萼片的要求则是萼片要长且厚硕。所以培育具有长萼片的樱桃番茄品种具有良好的市场前景。发明内容本发明提供了一种长萼片、抗TYLCV樱桃番茄自交系选育的方法，采用高效转育方法是本发明的宗旨。本发明的技术方案是通过以下措施来实现的：1选用江苏省农业科学院蔬菜研究所自主育成金陵梦玉樱桃番茄品种鉴定证书编号：苏鉴番茄201502，含有抗TYLCV基因Ty-2显性基因，具有长势强、口感佳的特性，利用该品种自交得到F2代；2F2代进行抗TYLCV的Ty-2基因分子标记辅助选择和对4叶1心期的幼苗进行烟粉虱的接种鉴定，苗期各单株DNA提取方法采用CTAB法。抗TYLCV的分子检测，利用Ty-2基因分子标记引物为：正向引物T0302-F5’-TGGCTCATCCTGAAGCTGATAGCGC-3’反向引物T0302-R5’-AGTGTACATCCTTGCCATTGACT-3’PCR扩增样品基因组DNA后，经溴化乙锭染色后观察，选择具有900bp的特征条带的基因纯合体和烟粉虱接种后未发病单株。3将F2代中含有900bp的特征条带的基因纯合体且烟粉虱接种后未发病的单株种植于田间，生长期间选择果实大小均匀、花序较长等农艺性状优良的单株为F3代，在种植F3、F4、F5过程中，继续单株选择，到F6代时性状基本稳定，再用分子标记和烟粉虱接种鉴定，获得抗TYLCV的优良自交系JSCT-2184。4选用萼片长、不含Ty-2基因的樱桃番茄品种圣桃6号为母本，与获得的抗TYLCV的优良自交系JSCT-2184为父本杂交，获得F1。5种植F1，果实成熟后单株混收留种，将F2代中含有900bp的特征条带的基因纯合体且烟粉虱接种后未发病的单株种植于田间，生长期间选择萼片长、果实大小均匀、花序长等农艺性状优良的单株为F3代，在种植F3、F4、F5过程中，继续单株选择，到F6代时性状基本稳定，再用Ty-2基因分子标记和烟粉虱接种鉴定，获得长萼片、抗TYLCV的优良自交系JSCT-S6-2184，该自交系为无限生长类型、长势强、萼片长、果实短椭圆形、单果重18g-23g、抗TYLCV等特性。作为本发明所述的选育方法的优选，烟粉虱要饲养在隔离条件较好的人工气候室，防止烟粉虱扩散。作为本发明所述的选育方法的优选，烟粉虱接种鉴定时番茄苗龄为4叶1心期。作为本发明所述的选育方法的优选，每个单株测同一成熟度的果实5个，测定时从萼片与果柄连接处测量。作为本发明所述的选育方法的优选，当番茄果实萼片长度大于等于3.0cm时，表明樱桃番茄果实萼片长；当长度低于1.5cm时，表明樱桃番茄果实萼片短；当长度介于1.5-3.0cm之间的表明樱桃番茄果实萼片中等。本发明所述的烟粉虱为仅携带TYLCV病毒的烟粉虱。有益效果：本发明提供的一种长萼片、抗TYLCV樱桃番茄自交系选育的方法，具有以下优点：1利用与Ty-2基因紧密连锁的标记进行TYLCV分子标记辅助选择，加速对含有Ty-2基因的番茄材料选育进程；2本发明的自交系应用于品种选育，可降低生产过程中化学农药的施用，减轻病害的传播，同时带萼片采收后不仅提高番茄果实的外观，而且萼片不易萎蔫提升新鲜度感，更易受到广大消费者的喜爱，保障番茄生产的顺利开展，提高番茄产业的经济效益。附图说明：图1Ty-2基因分子标记在F2群体单株的扩增图谱；其中M：DL2000DNAmarker；F2单株；由金陵梦玉自交获得的任意24株F2单株。具体实施方式下面结合实施例，对本发明的具体实施方式作详细描述。以下实施例仅用于说明本发明，但不能用来限制本发明的范围。1.抗TYLCV自交系的选育1金陵梦玉樱桃番茄为江苏省农业科学院蔬菜研究所自主育成的粉红色杂交一代品种，鉴定证书编号为苏鉴番茄201502，含有抗TYLCV基因Ty-2，具有长势强、口感佳的特性，利用该品种自交得到F2代；2分子标记辅助选择和烟粉虱接种鉴定1Ty-2标记检测：①DNA的提取：苗期各单株DNA采用Karroten植物基因组DNA提取试剂盒来提取。②利用PCR标记引物为：正向引物T0302-F5’-TGGCTCATCCTGAAGCTGATAGCGC-3’SEQIDNO.1反向引物T0302-R5’-AGTGTACATCCTTGCCATTGACT-3’SEQIDNO.2③反应体系和扩增程序PCR反应体系为：反应体系共10μL，10ngμL模板DNA1.0μL；4pmmolL分子标记引物1.0μL、10×PCRBuffer1.0μL、25mmolLMgCl20.8μL、10mmolLdNTPs0.4μL、5UμLTaq酶0.1μL、ddH2O5.7μL；PCR反应扩增程序为：94℃变性4min；每个循环94℃变性30s，55℃退火1min，72℃延伸1.5min，共35个循环，最后72℃延伸10min。扩增后，经溴化乙锭染色后观察，记录实验结果。2抗病性鉴定：将4叶1心期的F2群体单株幼苗带到人工气候室，进行带TYLCV烟粉虱的人工接种，接种7d后喷施杀虫剂杀死幼苗上的烟粉虱，之后将接种后的番茄幼苗定植于田间；定植4周后调查植株发病情况，按照发病严重程度分为0-4级：0级，无任何感病症状；1级，顶端叶边缘轻微黄化；2级，顶端小叶稍微变黄并发生很小的卷曲；3级，大范围的叶片黄化、卷曲，植株生长量小；4级，叶片严重黄化、卷曲，植株矮化，停止生长。3将F2代播种育苗1000株，进行抗TYLCV分子标记筛选，选择含有900bp的特征条带的基因纯合体单株进行烟粉虱接种，未发病的单株按照上一段的标准就是发病严重程度为0级的单株种植于田间，生长期间选择长势强、果实整齐一致、花序较长的单株为F3代。4种植F3代400株，选中的F3代留种为F4代，F4代种植200株，选中的F4代留种为F5代，F5代种植100株，继续单株选择，到F6代时性状基本稳定，再用Ty-2分子标记和烟粉虱接种鉴定，获得抗TYLCV的优良自交系JSCT-218，该自交系无限生长类型、中熟、粉红果、短椭圆形、18g-22g。2.选用萼片长、不含Ty-2基因的樱桃番茄品种圣桃6号为母本，与获得的抗TYLCV的优良自交系JSCT-2184为父本杂交。3.种植F1，果实成熟后全部单株混收留种，得到F2代；4.将F2代播种育苗5000株，进行抗TYLCV分子标记筛选，选择含有900bp的特征条带的基因纯合体单株进行烟粉虱接种，未发病的单株种植于田间，生长期间选择萼片长、长势强、果实整齐一致、花序较长的单株为F3代。1萼片长度测定方法番茄果实萼片长度的判断，先采用肉眼观察选择萼片较长的单株，然后游标卡尺测定，每个单株测同一成熟度的果实5个，测定时从萼片与果柄连接处测量，当番茄果实萼片长度大于3.0cm时，表明樱桃番茄果实萼片长；5.种植F3代500株，选中的F3代留种为F4代，F4代种植300株，选中的F4代留种为F5代，F5代种植200株，选中的F5代留种为F6代，F6代种植100株，此时性状基本稳定，再用分子标记和烟粉虱接种鉴定，获得长萼片、抗TYLCV的优良自交系JSCT-S6-2184，该自交系为无限生长类型、长势强、萼片长、果实短椭圆形、单果重18g-23g、抗TYLCV等特性。序列表110江苏省农业科学院120一种长萼片、抗TYLCV樱桃番茄自交系的选育方法1602170SIPOSequenceListing1.0210221125212DNA213人工序列ArtificialSequence4002tggctcatcctgaagctgatagcgc25210121123212DNA213人工序列ArtificialSequence4001agtgtacatccttgccattgact23

权利要求：1.一种长萼片、抗TYLCV樱桃番茄自交系的选育方法，其特征在于包括以下步骤：1选用金陵梦玉樱桃番茄品种自交得到F2代；2F2代进行Ty-2基因分子标记辅助选择和烟粉虱的接种鉴定，Ty-2基因分子标记引物为：正向引物T0302-F：SEQIDNO.1反向引物T0302-R：SEQIDNO.2；所述引物对F2代基因组进行PCR扩增后，经溴化乙锭染色后观察，选择具有900bp的特征条带的基因纯合体且烟粉虱接种后未发病单株；3将上一步选择的F2代中含有900bp的特征条带的基因纯合体且烟粉虱接种后未发病的单株种植于田间，生长期间选择果实大小均匀、花序较长的单株为F3代，在种植F3、F4、F5过程中，继续按照上述标准进行单株选择，到F6代时性状基本稳定，再用Ty-2基因分子标记和烟粉虱接种鉴定，获得抗TYLCV的优良自交系JSCT-2184；4选用萼片长、不含Ty-2基因的樱桃番茄品种圣桃6号为母本，与获得的抗TYLCV的优良自交系JSCT-2184为父本杂交，获得F1；5种植F1，果实成熟后单株混收留种，将F2代中含有900bp的特征条带的基因纯合体且烟粉虱接种后未发病的单株种植于田间，生长期间选择萼片长、果实大小均匀、花序长的单株为F3代，在种植F3、F4、F5过程中，继续按照该标准单株选择，到F6代时性状基本稳定，再用所述的Ty-2基因分子标记和烟粉虱接种鉴定，获得长萼片、抗TYLCV的优良自交系JSCT-S6-2184，该自交系为无限生长类型、长势强、萼片长、果实短椭圆形、单果重18g-23g、具有抗TYLCV特性。2.根据权利要求1所述的选育方法，其特征在于：烟粉虱要饲养在隔离条件较好的人工气候室，防止烟粉虱扩散。3.根据权利要求1所述的选育方法，其特征在于：烟粉虱接种鉴定时番茄苗龄为4叶1心期。4.根据权利要求1所述的选育方法，其特征在于：每个单株测同一成熟度的果实5个，测定时从萼片与果柄连接处测量。5.根据权利要求1所述的选育方法，其特征在于：当番茄果实萼片长度大于等于3.0cm时，表明樱桃番茄果实萼片长；当长度低于1.5cm时，表明樱桃番茄果实萼片短；当长度介于1.5-3.0cm之间的表明樱桃番茄果实萼片中等。

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