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申请/专利权人：河北医科大学
申请日：2021-12-29
公开（公告）日：2022-05-24
公开（公告）号：CN114525307A
主分类号：C12N15/867
分类号：C12N15/867;C12N15/66;C12N15/65;C12N15/62;C12N5/10;C12R1/91
优先权：
专利状态码：失效-发明专利申请公布后的驳回
法律状态：2024.06.07#发明专利申请公布后的驳回;2022.06.10#实质审查的生效;2022.05.24#公开
摘要：本发明公开了一种Grx‑roGFPGpx3‑roGFP基因过表达16HBE单克隆细胞系模型构建方法，其构建方法步骤如下：步骤一：首先将目的基因Grx‑roGFP和Gpx‑roGFP克隆至慢病毒载体pLV‑puro上；步骤二：进一步用慢病毒载体pLV‑W包装成慢病毒后感染16HBE细胞，并通过puromycin筛选Grx‑roGFP和Gpx‑roGFP基因过表达稳定细胞株，从而构建了可实时动态观察支气管上皮细胞线粒体内氧化还原动态的细胞系，将可特异性检测GSH的谷氧还蛋白Glutaredoxin，Grx与特异性检测H2O2的谷胱甘肽过氧化酶Gpx3和roGFP融合，通过观测Grx‑roGFP及GPX3‑roGFP可实时动态检测细胞内谷胱甘肽和H2O2，从而推测细胞体内氧化还原状态的变化，揭示活性氧的致病机理，为研究细菌、病毒感染，烟草暴露，以及一些工作场所的灰尘和烟雾、天气和空气质量引起的肺部病变提供了原位模型。
主权项：1.一种Grx-roGFPGpx3-roGFP基因过表达16HBE单克隆细胞系模型构建方法，其特征在于：其构建方法步骤如下：步骤一：首先将目的基因Grx-roGFP和Gpx-roGFP克隆至慢病毒载体pLV-puro上；步骤二：进一步用慢病毒载体pLV-W包装成慢病毒后感染16HBE细胞，并通过puromycin筛选Grx-roGFP和Gpx-roGFP基因过表达稳定细胞株，从而构建了可实时动态观察支气管上皮细胞线粒体内氧化还原动态的细胞系。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 河北医科大学 一种Grx-roGFP Gpx3-roGFP基因过表达16HBE单克隆细胞系模型
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2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。
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