买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：上海医药工业研究院;中国医药工业研究总院

摘要：本发明公开了一种蝼蛄提取物的提取方法。该提取方法包括如下步骤：以蝼蛄为原料用低极性溶剂提取，之后减压浓缩，至提取液无溶剂味后与丙酮水溶液或丁酮水溶液混合，之后冷藏，取下层液体，浓缩干燥即得蝼蛄提取物。本发明的提取工艺简单、成本低、污染少，提取得到的蝼蛄提取物对脑胶质瘤细胞U87的抑制作用明显。

主权项：1.一种蝼蛄提取物的提取方法，其特征在于，其包括如下步骤：以蝼蛄为原料用低极性溶剂提取，之后减压浓缩，至提取液无溶剂味后与丙酮水溶液或丁酮水溶液混合，之后冷藏，取下层液体，浓缩干燥即得蝼蛄提取物；其中，所述低极性溶剂为环已烷、石油醚、己烷或戊烷，所述低极性溶剂的体积与所述原料的质量比为6-10mLg，所述提取的次数为3-4次，所述丙酮水溶液中的丙酮的体积百分比浓度为60-80%，所述丁酮水溶液中的丁酮的体积百分比浓度为60-80%，所述丙酮水溶液或所述丁酮水溶液的体积是所述提取液的体积的4-8倍，所述冷藏的温度为4-10℃，所述冷藏的时间为10-15h。

全文数据：一种蝼蛄提取物及其提取方法技术领域本发明涉及一种蝼蛄提取物及其提取方法。背景技术蝼蛄是一种直翅目蝼蛄科昆虫。其中，我国的华北蝼蛄具有药用价值，在一些医药古籍中记载其可用于利水通淋、消肿解毒、石淋、瘰疬、恶疮等症。脑胶质瘤是由于大脑和脊髓胶质细胞癌变所产生的、最常见的原发性颅脑肿瘤。年发病率约为3-8人10万人口。临床经验发现，胶质瘤很难根治，往往会复发。在肿瘤复发后，根据患者的功能状况，需要再次手术、放疗、化疗等治疗。CN1582970A中提到了从蝼蛄中提取的有效部位可用于制备治疗抗肿瘤药物。CN1582970A通过将蝼蛄整虫粉碎用醇溶液提取，再用低极性有机溶剂进行萃取，以获得蝼蛄有效部位，同时给出了该有效部位在制备治疗抗肝癌，肉瘤实体瘤，Lewis肺癌，骨髓瘤，白血病和胃癌药物中的应用。但该提取过程复杂，成本高。经本发明人试验，CN1582970A中提取得到的蝼蛄有效部位体外抑制脑胶质瘤细胞U87的作用却并不明显。因此，研发一种提取工艺简单、成本低、污染少的提取方法，进而得到对脑胶质瘤细胞U87的抑制作用明显的活性物质是发明人的研发初衷。发明内容本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中蝼蛄药物活性成分的提取过程复杂、成本高、得到的蝼蛄提取物对于脑胶质瘤细胞U87的抑制作用不明显等缺陷，提供了一种蝼蛄提取物及其提取方法。本发明的提取工艺简单、成本低、污染少，提取得到的蝼蛄提取物对脑胶质瘤细胞U87的抑制作用明显。本发明提供了一种蝼蛄提取物的提取方法，包括如下步骤：以蝼蛄为原料用低极性溶剂提取，之后减压浓缩，至提取液无溶剂味后与丙酮水溶液或丁酮水溶液混合，之后冷藏，取下层液体，浓缩干燥即得蝼蛄提取物。本发明中，所述蝼蛄作为原料，一般来讲是本领域技术人员均知的中药材蝼蛄，在使用前可将干燥的蝼蛄整虫粉碎，使用的原料为粉碎后的蝼蛄药材粗粉，水分的质量含量一般在5-10％。本发明中，所述低极性溶剂为本领域常规使用的低极性溶剂，“低极性溶剂”这一概念本领域技术人员均知其涵盖的低极性溶剂的种类，例如环已烷、石油醚、己烷、戊烷等，较佳地为石油醚。其中，所述石油醚为本领域常规使用的石油醚，如沸程为30-60℃的石油醚、沸程为60-90℃的石油醚，较佳地为沸程为60-90℃的石油醚。本发明中，所述低极性溶剂的用量为本领域常规的用量，较佳地，所述低极性溶剂的体积与所述原料的质量比为6-10mLg，较佳地为8mLg。本发明中，所述提取的操作和条件为本领域常规的提取的操作和条件，例如回流提取，所述提取较佳地进行3-4次，更佳地为3次。本发明中，所述减压浓缩的操作和条件为本领域常规的减压浓缩的操作和条件，较佳地，所述减压浓缩为真空减压浓缩；所述减压浓缩的温度较佳地为50-70℃，更佳地为60℃。本发明中，所述丙酮水溶液为本领域常规使用的丙酮水溶液，较佳地，所述丙酮水溶液中丙酮体积百分比浓度为60-80％，更佳地为70％。本发明中，所述丁酮水溶液为本领域常规使用的丁酮水溶液，较佳地，所述丁酮水溶液中丁酮体积百分比浓度为60-80％，更佳地为70％。本发明中，所述丙酮水溶液或所述丁酮水溶液的用量为本领域的常规用量，较佳地，所述丙酮水溶液或所述丁酮水溶液的体积是所述提取液的体积的4-8倍，更佳地为6倍。本发明中，所述冷藏的操作和条件为本领域常规的冷藏的操作和条件，较佳地，所述冷藏在冰箱中进行，所述冷藏的温度为4-10℃，所述冷藏的时间为10-15h，更佳地为12-14h。本发明中，所述浓缩干燥的操作和条件为本领域常规的浓缩干燥的操作和条件，较佳地，所述浓缩干燥为真空减压浓缩，所述浓缩干燥的温度较佳地为50-70℃，更佳地为60℃。本发明还提供了一种由上述提取方法提取的蝼蛄提取物。在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。本发明所用试剂和原料均市售可得。本发明的积极进步效果在于：本发明的提取工艺简单、成本低、污染少，提取得到的蝼蛄提取物对脑胶质瘤细胞U87的抑制作用明显。具体实施方式下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。实施例1取粉碎后的蝼蛄干燥药材粗粉100g，以800mL的石油醚沸程为60-90℃回流提取三次，60℃下真空减压浓缩，至无溶剂味，步骤得率约为25％。再溶入6倍量70％的丙酮水溶液中，之后冰箱冷藏室中放置12小时，取出下层溶液，60℃真空下减压浓缩，本步骤得率为25％；按药材计算的总得率6.25％。得到的提取物进行抗脑胶质瘤细胞U87的体外抑制试验。对比例1取粉碎后的蝼蛄干燥药材粗粉100g，以400mL的石油醚沸程为60-90℃回流提取三次，60℃下真空减压浓缩，至无溶剂味，本步骤得率约为25％。再溶入70％的丙酮水溶液中，之后冰箱冷藏室中放置12小时，取出下层溶液，60℃真空下减压浓缩，本步骤得率约为18％，按药材计算的总得率为4.5％得到的提取物进行抗脑胶质瘤细胞U87的体外抑制试验。对比例2取粉碎后的蝼蛄干燥药材粗粉100g，以400mL的石油醚沸程为60-90℃回流提取三次，60℃下真空减压浓缩，至无溶剂味，本步骤得率约为25％。再溶入70％的丙酮水溶液中，之后冰箱冷藏室中放置8小时，取出下层溶液，60℃真空下减压浓缩，本步骤得率约为20％，按药材计算的总得率为5％，得到的提取物进行抗脑胶质瘤细胞U87的体外抑制试验。对比例3取粉碎后的蝼蛄干燥药材粗粉100g，以500mL的85-95％乙醇回流提取三次，本步骤得率约为30％。减压浓缩后，加水至生药量的0.8-1倍，再溶入等量的石油醚60-90℃中萃取，回收石油醚层的粗提物，本步骤得率约为20％，按药材计算的总得率约为6％得到的提取物进行抗脑胶质瘤细胞U87的体外抑制试验。效果实施例1接种脑胶质瘤U87细胞于96孔板上，用药物处理细胞48h后。毎孔加入75μL1％冰醋酸配制的磺酰罗丹明BSRB染色液0.4％，室温下染色10min；弃去各孔内染色液后，充分溶解SRB后，使用酶标仪在490630nm波长下测吸光度OD值。根据酶标仪测定的OD值，按下列公式计算细胞存活率：存活率％＝处理组OD对照组OD×100％。抑制率％＝100％-存活率％。以上实施例1和对比例1-4的得率和抑制率见表1。表1实施例1和对比例1-4的得率和抑制率上述表1中的对照药-紫杉醇购自上海同田生物技术股份有限公司，纯度为≥98％HPLC。实施例2取粉碎后的蝼蛄干燥药材粗粉100g，以600mL的环已烷回流提取三次，60℃下真空减压浓缩，至无溶剂味，本步骤得率约为25％。再溶入4倍量80％的丙酮水溶液中，之后冰箱冷藏室中放置10小时，取出下层溶液，60℃真空下减压浓缩，本步骤得率约为20％，得到的提取物进行抗脑胶质瘤细胞U87的体外抑制试验。实施例3取粉碎后的蝼蛄干燥药材粗粉100g，以1000mL的己烷回流提取4次，60℃下真空减压浓缩，至无溶剂味，本步骤得率约为25％。再溶入8倍量60％的丙酮水溶液中，之后冰箱冷藏室中放置12小时，取出下层溶液，60℃真空下减压浓缩，本步骤得率约为22％，得到的提取物进行抗脑胶质瘤细胞U87的体外抑制试验。实施例4取粉碎后的蝼蛄干燥药材粗粉100g，以800mL的石油醚沸程为60-90℃回流提取4次，50℃下真空减压浓缩，至无溶剂味，本步骤得率约为25％。再溶入6倍量60％的丁酮水溶液中，之后冰箱冷藏室中放置14小时，取出下层溶液，70℃真空下减压浓缩，本步骤得率约得率为22％，得到的提取物进行抗脑胶质瘤细胞U87的体外抑制试验。实施例5取粉碎后的蝼蛄干燥药材粗粉100g，以800mL的戊烷回流提取三次，60℃下真空减压浓缩，至无溶剂味，本步骤得率约为25％。再溶入6倍量70％的丁酮水溶液中，之后冰箱冷藏室中放置15小时，取出下层溶液，60℃真空下减压浓缩，本步骤得率约为23％，得到的提取物进行抗脑胶质瘤细胞U87的体外抑制试验。经试验，实施例2-5获得的蝼蛄提取物在抗脑胶质瘤细胞U87的体外抑制试验中表现的性能与实施例1基本相当。虽然以上描述了本发明的具体实施方式，但是本领域的技术人员应当理解，这仅是举例说明，本发明的保护范围是由所附权利要求书限定的。本领域的技术人员在不背离本发明的原理和实质的前提下，可以对这些实施方式做出多种变更或修改，但这些变更和修改均落入本发明的保护范围。

权利要求：1.一种蝼蛄提取物的提取方法，其特征在于，其包括如下步骤：以蝼蛄为原料用低极性溶剂提取，之后减压浓缩，至提取液无溶剂味后与丙酮水溶液或丁酮水溶液混合，之后冷藏，取下层液体，浓缩干燥即得蝼蛄提取物。2.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述原料为粉碎后的蝼蛄药材粉末。3.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述低极性溶剂为环已烷、石油醚、己烷或戊烷；所述低极性溶剂的体积与所述原料的质量比为6-10mLg，较佳地为8mLg。4.如权利要求2所述的提取方法，其特征在于，所述石油醚的沸程为30-60℃或60-90℃。5.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述提取的次数为3-4次，较佳地为3次。6.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述减压浓缩为真空减压浓缩；所述减压浓缩的温度为50-70℃，较佳地为60℃。7.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述丙酮水溶液中的丙酮的体积百分比浓度为60-80％，较佳地为70％；所述丁酮水溶液中的丁酮的体积百分比浓度为60-80％，较佳地为70％；所述丙酮水溶液或所述丁酮水溶液的体积是所述提取液的体积的4-8倍，较佳地为6倍。8.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述冷藏的温度为4-10℃；所述冷藏的时间为10-15h，较佳地为12-14h。9.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述浓缩干燥为真空减压浓缩；所述浓缩干燥的温度为50-70℃，较佳地为60℃。10.一种如权利要求1～9任一项所述的提取方法提取得到的蝼蛄提取物。

百度查询： 上海医药工业研究院 中国医药工业研究总院 一种蝼蛄提取物及其提取方法