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申请/专利权人：中山大学
申请日：2021-03-02
公开（公告）日：2022-11-29
公开（公告）号：CN113061605B
主分类号：C12N15/113
分类号：C12N15/113;C12N5/10;C12N15/85;C12N15/11;C12Q1/6869;C12Q1/6888;C12Q1/04
优先权：["20200713 CN 2020106689013"]
专利状态码：有效-授权
法律状态：2022.11.29#授权;2021.07.20#实质审查的生效;2021.07.02#公开
摘要：本发明公开了一种岩藻糖转移酶8FUT8功能缺失细胞株的构建方法及其应用。本发明通过筛选并选取FUT8的活性位点，采用碱基编辑技术，在不引入外源蛋白、且不破坏内源蛋白整体结构的情况下，以最小的基因层面的改动，达到让构建成熟的工程细胞失去岩藻糖转移酶FUT8功能，从正常生产含有岩藻糖的抗体药物的宿主，转变为生产不含有岩藻糖的抗体药物的宿主，从而提高了其生产的抗体药物的产量和品质。
主权项：1.一种岩藻糖转移酶8功能缺失细胞株，其特征在于，所述细胞株表达的岩藻糖转移酶8蛋白序列如SEQIDNO.2；所述的岩藻糖转移酶8功能缺失细胞株的构建方法，包括以下步骤：（1）培养细胞株；（2）混合构建质粒和碱基编辑器，孵育，得到转染试剂；（3）混合转染试剂和培养细胞株，孵育；（4）观察细胞，判断转染情况，转染成功即得岩藻糖转移酶功能缺失细胞株；（5）分选带有荧光的单克隆细胞；（6）测序检测确定岩藻糖转移酶8功能缺失细胞株；其中，所述判断转染情况为：观察细胞荧光，如有荧光，则细胞转染成功；所述质粒中包含用于构建岩藻糖转移酶8功能缺失细胞株的靶向序列和荧光蛋白，所述靶向序列的序列为5’-TGTCAGACGCACTGACAAAG-3’（SEQIDNO.1）；所述碱基编辑器为腺嘌呤碱基编辑器；所述细胞株为生产不含有岩藻糖的抗体药物的工程细胞。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中山大学 一种岩藻糖转移酶8(FUT8)功能缺失细胞株的构建方法及其应用
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