申请/专利权人：贵州医科大学

申请日：2023-06-29

公开（公告）日：2023-09-08

公开（公告）号：CN116718452A

主分类号：G01N1/30

分类号：G01N1/30;G01N1/42;G01N1/36;G01N1/28;G01N1/06

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.03.26#实质审查的生效;2023.09.08#公开

摘要：本发明提供了一种冰冻切片在高尔基染色中的运用方法，该方法包括：取材、浸液、浸泡冷冻保护液、冰冻切片、染色、脱水和安装。本发明简单、实用，更加容易操作。

主权项：1.一种冰冻切片在高尔基染色中的运用方法，其特征在于，该方法为：S1、取材：取C57BL6J小鼠脑组织，用双蒸水清洗后，对脑区进行切块，切取厚度为0.5cm的脑组织块；S2、浸液：将S1中得到的脑组织块放入装有工作液的离心管中浸泡，浸泡6h～24h后更换工作液，后续不更换工作液，共浸泡7天～14天，室温避光保存，得到浸液后的脑组织块；所述工作液的配制方法为：将溶液A、溶液B、溶液C和双蒸水按照体积比为5:5:4:10震荡混匀，然后在室温黑暗中反应24h～48h后，用0.22μmm过滤器或者滤纸过滤后，得到工作液；所述溶液A由5g重铬酸钾溶解于100mL的双蒸水而成；所述溶液B由5g氯化汞在温度为90℃的条件下水浴加热溶解于100mL的双蒸水而成；所述溶液C由5g络酸钾溶解于100mL的双蒸水而成；S3、浸泡冷冻保护液：在100Lux的光照环境下，用塑料夹取出S2中得到的浸液后的脑组织块，用吸水纸擦干工作后，将擦干后的脑组织块放入至冷冻保护剂中浸泡2天～3天，每隔24h后更换冷冻保护剂，至脑组织块沉底为止，得到浸泡冷冻保护液后的脑组织块；所述冷冻保护剂由以下用量的原料制成：20g蔗糖、15mL～20mL甘油，用双蒸水定容至100mL；S4、冰冻切片：S401、在温度为-25℃～-20℃的冰冻切片机中，在预冷的托盘上滴加OCT包埋剂形成冰底，然后将S3中得到的浸泡冷冻保护液后的脑组织块固定在托盘上，向浸泡冷冻保护液后的脑组织块上滴加OCT包埋剂后，在所述冰冻切片机中冰冻30min以上，得到冰冻后的脑组织块；S402、将S401中冰冻后的脑组织块用所述冰冻切片机切片，切片后，用镊子夹住边缘放入装有30％蔗糖溶液的孔板中展片，得到切片；所述30％蔗糖溶液由30g蔗糖用100mL双蒸水溶解配成；S403、用巴斯德移液管吸取30％蔗糖溶液于挂有明胶的载玻片上形成一块水区，用冰冻切片刀片将S402中得到的切片移动于载玻片上，展平切片，丢弃多余的蔗糖溶液，然后拨针调整切片位置或者将组织移入装有30％蔗糖溶液的皿中进行捞片使得切片贴于挂有明胶的载玻片上，得到贴好的片子；S404、将S403中得到的贴好的片子放于黑暗处，室温且通风条件下放置过夜或者37℃烘烤30min～60min，得到干燥后的片子；S5、染色：S501、将S404中得到的干燥后的片子用双蒸水洗2次，每次5min；S502、在装有氨溶液的染色缸中避光染色10min后，用双蒸水洗2次，每次5min；所述氨溶液由体积比为3:1的质量分数为25％～28％的氨水和双蒸水制成；S503、在1％硫代硫酸钠溶液中洗片，洗涤15min以上；S504、洗片后，将片子放于架子上，架子横放于双蒸水中，有组织面朝上，洗两次，每次5min；S505、将片子放于温度为60℃的烤箱中避光烘烤2h～3h；S506、水洗4次，每次5min；S6、脱水和安装：S601、脱水及透明：将S506中得到的染色后的玻片依次放于以下溶液，进行脱水透明：质量分数为50％的乙醇水溶液5min、质量分数为75％的乙醇水溶液水溶液5min、质量分数为95％的乙醇水溶液5min、无水乙醇A15min、无水乙醇A25min、二甲苯Ⅰ5min、二甲苯Ⅱ5min；S602、用中性树脂进行封片，黑暗中保存至镜检。

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权利要求：

百度查询： 贵州医科大学 一种冰冻切片在高尔基染色中的运用方法

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