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【发明公布】原代下丘脑神经干细胞体外定分化专用培养基及定向分化方法_深圳市大鹏新区南澳人民医院_202311035161.X 

申请/专利权人:深圳市大鹏新区南澳人民医院

申请日:2023-08-16

公开(公告)日:2024-01-16

公开(公告)号:CN117402825A

主分类号:C12N5/0797

分类号:C12N5/0797

优先权:

专利状态码:在审-实质审查的生效

法律状态:2024.02.02#实质审查的生效;2024.01.16#公开

摘要:本发明涉及干细胞定向分化技术领域,且公开了原代下丘脑神经干细胞体外定向分化专用培养基及定向分化方法。通过向下丘脑神经干细胞培养基I加入Matrigel基质胶构建干细胞三维分化模式促进内分泌的定向分化;定向分化专用培养基I包含化合物Notch通路抑制剂DAPT和神经生长因子NGF,定向分化专用培养基II包含NGF和脑源性神经营养因子BDNF。应用以上两种培养基两步培养诱导原代下丘脑神经干细胞定向分化为类GnRH促性腺激素释放激素神经元。本发明利用Matrigel基质胶模拟细胞基底膜结构和神经营养因子诱导实现分泌GnRH神经元的定向分化,操作便捷有效,为神经营养因子治疗GnRH神经元缺乏或功能不足提供了科学依据。

主权项:1.一种原代下丘脑神经干细胞体外定向分化专用培养基,其特征在于,包括依次使用的以下培养基:下丘脑神经干细胞培养基I,包括体积比为60~100:1:2~5:0.3~0.8:0.01~0.03:0.01~0.03的神经基础培养基Neurobasal-A、100~200×双抗、50×无维生素A的无血清添加剂B27-VA、100~200×谷氨酰胺、0.1~0.2mgmL表皮细胞生长因子EGF和0.1~0.2mgmL碱性成纤维细胞生长因子bFGF;诱导分化培养基I包括体积比为60~100:1:2~5:1~3:0.3~0.8:0.1~0.3:0.1~0.3的神经基础培养基Neurobasal-A、100~200×双抗、50×有维生素A的无血清添加剂B27、100×神经细胞培养血清添加剂N2、100~200×谷氨酰胺、10~20mM3,5-二氟苯乙酰基-L-丙胺酰基-L-2苯基甘氨酸叔丁酯DAPT和100~200μgmL神经生长因子NGF;诱导分化培养基II,包括体积比为60~100:1:2~5:1~3:0.3~0.8:0.03~0.08:0.1~0.3的神经基础培养基Neurobasal-A、100~200×双抗、50×有维生素A的无血清添加剂B27、100×神经细胞培养血清添加剂N2、100~200×谷氨酰胺、40~80μgmL脑源性神经生长因子BDNF和100~200μgmL神经生长因子NGF。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 深圳市大鹏新区南澳人民医院 原代下丘脑神经干细胞体外定分化专用培养基及定向分化方法

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