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申请/专利权人：苏州近岸蛋白质科技股份有限公司
申请日：2023-07-10
公开（公告）日：2024-02-20
公开（公告）号：CN116555166B
主分类号：C12N5/071
分类号：C12N5/071;A61L27/36
优先权：
专利状态码：有效-授权
法律状态：2024.02.20#授权;2023.08.25#实质审查的生效;2023.08.08#公开
摘要：本发明涉及医药领域，特别是涉及用于制备鼠胆管类器官的组合物及鼠胆管类器官的制备方法和用途，所述组合物包括组织消化试剂，所述组织消化试剂中包括胶原酶IV和中性蛋白酶。所述组合物还包括培养基，以培养基的总体积为基准，所述培养基包括以下成分：基础培养基、L‑谷氨酰胺或其替代品、HEPES、B27、乙酰半胱氨酸、RSPO、烟酰胺、胃泌素I肽、上皮生长因子、成纤维细胞生长因子10、肝细胞生长因子。本发明的组合物和制备方法可以提高胆管细胞消化后的细胞活力，而且不需要离心和红细胞裂解液裂解红细胞，因此方法较简单，可以实现胆管类器官的高密度培养，为成体肝脏中的胆道修复提供参考。
主权项：1.一种鼠胆管类器官的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：1）将鼠肝脏组织块与清洗液混合，上下吹打以清洗掉杂质，静置待组织块沉降后，弃上清；2）将步骤1）获得的产物与组织消化试剂混合，消化20~30min，终止消化后静置以使胆管组织沉淀，去除消化液，重悬细胞；所述组织消化试剂由胶原酶IV和中性蛋白酶组成，以组织消化试剂的总体积为基准，所述胶原酶IV的终浓度为0.05~0.2UmL，所述中性蛋白酶的终浓度为0.5~1.5UmL；3）将细胞与基质胶混合并接种至培养容器中，待基质胶凝固后，加入培养基进行培养，培养3~5天即获得鼠胆管类器官；以培养基的总体积为基准，所述培养基由以下成分组成：基础培养基，所述基础培养基选自DMEMF12或AdvancedDMEMF12L-谷氨酰胺或其替代品1.5~2.5mMHEPES8~12mMB271.5~2.5%乙酰半胱氨酸0.8~1.5mMRSPO1或RSPO3100~300ngmL烟酰胺8~12mM胃泌素I肽8~12nM上皮生长因子30~150ngmL成纤维细胞生长因子1050~200ngmL肝细胞生长因子30~150ngmL；抗生素。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 苏州近岸蛋白质科技股份有限公司 用于制备鼠胆管类器官的组合物及鼠胆管类器官的制备方法和用途
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