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唾液酸转移酶基因缺失的MDCK细胞株及构建方法和应用 

申请/专利权人:中国生物技术股份有限公司;武汉生物制品研究所有限责任公司

申请日:2022-06-28

公开(公告)日:2024-03-15

公开(公告)号:CN115772502B

主分类号:C12N5/10

分类号:C12N5/10;C12N15/113;C12N15/85;C12N15/65;C12N15/55;C12N7/00;C12R1/91

优先权:

专利状态码:有效-授权

法律状态:2024.03.15#授权;2023.03.28#实质审查的生效;2023.03.10#公开

摘要:本发明提供一种唾液酸转移酶基因缺失的MDCK细胞株及其构建方法和应用。与原始MDCK细胞以及构建的MDCK‑st3gal2KO细胞相比,本发明采用CRISPR‑Cas9基因编辑方法构建的MDCK‑st3gal1KO细胞和MDCK‑st3galKO细胞能够提升对人流感病毒的敏感性。

主权项:1.一种唾液酸转移酶基因st3gal1和st3gal2均缺失的MDCK细胞株的构建方法,其特征在于,包括如下步骤:获取唾液酸转移酶基因st3gal1缺失的MDCK细胞株,采用基于CRISPRCas9基因编辑系统来敲除MDCK细胞中的唾液酸转移酶基因st3gal1,所针对靶点序列为:GCCCGTACCAGGACTCTCGG;进一步采用CRISPRCas9基因编辑系统敲除MDCK细胞中的唾液酸转移酶基因st3gal2;其中,CRISPRCas9基因编辑系统所采用的gRNA载体质粒为带有gRNA骨架、Cas9表达序列、NLS核定位序列以及抗氨苄基因的pX330,同源臂载体质粒选择带有多个临近的常用酶切位点、Loxp片段以及嘌呤霉素抗性基因的pY75;针对性敲除基因st3gal1的gRNA序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示,5’同源臂序列如SEQIDNO.5所示,3’同源臂序列如SEQIDNO.6所示,针对性敲除基因st3gal2的gRNA序列如SEQIDNO.7和SEQIDNO.8所示;5’同源臂序列如SEQIDNO.11所示;3’同源臂序列如SEQIDNO.12所示。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 中国生物技术股份有限公司;武汉生物制品研究所有限责任公司 唾液酸转移酶基因缺失的MDCK细胞株及构建方法和应用

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