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申请/专利权人：复旦大学

摘要：本发明公开了一种基于指数扩增反应和Argonaute核酸酶的microRNA检测体系及方法。本发明提供了一种基于指数扩增反应和Argonaute核酸酶的microRNA检测体系，microRNA检测体系包括：a向导DNA，向导DNA为采用指数扩增反应体系扩增目标物microRNA所获得的扩增产物；bArgonaute核酸酶；c检测探针，检测探针带有荧光基团和淬灭基团，且检测探针包括与采用指数扩增反应体系扩增目标物microRNA所获得的扩增产物互补的区域。本发明提供的microRNA检测体系实现了单碱基特异性的、高灵敏的miRNA检测，以及多重miRNA检测和miRNA分型分析。

主权项：1.一种基于指数扩增反应和Argonaute核酸酶的microRNA检测体系，其特征在于，所述的microRNA检测体系包括：a向导DNA，所述的向导DNA为采用指数扩增反应体系扩增目标物microRNA所获得的扩增产物；bArgonaute核酸酶；c检测探针，所述的检测探针带有荧光基团和淬灭基团，且所述的检测探针包括与采用指数扩增反应体系扩增目标物microRNA所获得的扩增产物互补的区域；所述的指数扩增反应体系包括扩增模板；所述的扩增模板为根据所述的目标物microRNA的序列设计的扩增模板，所述的扩增模板包括3’端序列、5’端序列，以及所述的3’端序列和所述的5’端序列之间的切口酶识别序列，所述的3’端序列和所述的5’端序列的长度相同，均为15-18个核苷酸；所述的3’端序列和所述的5’端序列相同，均与所述的目标物microRNA互补配对；或者，所述3’端序列的3’端的第一个碱基与所述的目标物microRNA存在一个碱基错配，以使所述的指数扩增反应体系的扩增子的5’端的第一个碱基为胸腺嘧啶碱基；所述的Argonaute核酸酶为来自于嗜热栖热菌Thermusthermophilus的TtAgo核酸酶；所述的基于指数扩增反应和Argonaute核酸酶的microRNA检测体系反应温度为70-80℃；所述的指数扩增反应体系包括扩增模板、DNA聚合酶、切口酶、dNTP、RNase抑制剂和酶缓冲液；在所述的检测探针中，所述的荧光基团和所述的淬灭基团各自独立地位于所述的检测探针的5’端和3’端。

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权利要求：

百度查询： 复旦大学 基于指数扩增反应和Argonaute核酸酶的microRNA检测体系及方法