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一种高通量直观筛选酶突变子的方法 

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申请/专利权人:淮阴工学院

摘要:本发明公开了一种高通量直观筛选酶突变子的方法,所述高通量直观筛选酶突变子的方法为:1制备双层平板培养基,2制备催化反应底物混合液,3酶突变子快速筛选。该方法适用于高效筛选特定需要的酶活性和稳定性等有利突变,适用于利用原核异源表达系统,表达并便捷筛选酶的有利突变。相比于传统筛选方法,该方法适用于便捷、高通量筛选酶的有利突变,在实验过程中不需要对每个菌株单独操作,在同一块或少数几块筛选平板上实现高通量筛选,大大节省了人力和时间。

主权项:1.一种高通量直观筛选酶突变子的方法,其特征在于,包括如下步骤:1制备双层平板培养基:a、制备下层培养基:将蛋白胨、酵母粉、氯化钠、琼脂粉用去离子水混合定容后灭菌备用,使用前加入过滤除菌的抗性药物和诱导剂;b、制备上层培养基:将蛋白胨、酵母粉、氯化钠、琼脂粉用去离子水混合定容后灭菌备用,使用前加入过滤除菌的抗性药物;c、待下层培养基凝固后,再加入上层培养基,形成双层平板培养基;2制备催化反应底物混合液:将琼脂粉、缓冲液、底物、吐温-80或曲通-100混合;3酶突变子快速筛选:将含有载有酶突变基因质粒的菌体涂布在步骤1制备的双层平板培养基上,待平板培养基上出现菌落后,加入步骤2制备的催化反应底物混合液,待反应底物混合液冷却凝固,放置培养箱培养后取出检视即可。

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