申请/专利权人：温州医科大学附属第一医院

申请日：2024-03-12

公开（公告）日：2024-05-17

公开（公告）号：CN118048302A

主分类号：C12N5/0775

分类号：C12N5/0775

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.06.04#实质审查的生效;2024.05.17#公开

摘要：本发明涉及细胞工程和组织再生技术领域，提出了一种从小鼠乳鼠提取骨髓间充质干细胞的方法，提取方法包括如下步骤：步骤一：从乳鼠中分离出原代BMSCs；步骤二：原代BMSCs的体外培养和提纯；步骤三：BMSCs的体外扩增、冻存和复苏。本方法创新性地使用乳鼠作为供体提取BMSCs，针对乳鼠骨质特点发明了一整套针对乳鼠的提取方案，能够经济高效地提取出BMSCs。本发明首次建立乳鼠骨干粉碎冲洗培养法，有效提高细胞得率。本发明对获得的乳鼠BMSCs生物学特征如形态、表面标志物、多向分化潜能等方面的系统研究，同时证实不仅可以多次传代，而且在经历冻存和复苏后仍有较好生长状态，可满足实验研究的需要。解决了现有提取小鼠BMSCs产量少，操作繁琐，周期长等问题。

主权项：1.一种从小鼠乳鼠提取骨髓间充质干细胞的方法，其特征在于，提取方法包括如下步骤：步骤一：从乳鼠中分离出原代BMSCs；步骤二：原代BMSCs的体外培养和提纯；步骤三：BMSCs的体外扩增、冻存和复苏；步骤一具体包括如下步骤：1使用70％乙醇喷洒3只新生1周内乳鼠的表面，然后以截头的方式安乐死，将尸体放入一个烧杯中；2将烧瓶放入生物安全柜内，用镊子取出一只乳鼠放入含有PBS的培养皿中；使用剪刀和镊子分离出股骨和胫骨；3重复上述方法分离出3只小鼠的股骨和胫骨；将3只小鼠的骨骼放入含有DMEM高糖培养基的6孔板中；4取出培养皿的盖子，在盖子上倒入5ml的PBS；将股骨和胫骨放在盖子上，使用剪刀去除所有软组织，保持股骨和胫骨完整性；接着剪去骨头的两端，并将其放入含有DMEM高糖培养基的另一个孔中；5吸去6孔板中的DMEM高糖，并向每个孔中加入3ml预先准备好的含有10％胎牛血清和25mMHEPES的DMEM高糖培养基；使用剪刀将6孔板中的骨骼剪成细碎的小块，直至形成糊状；使用巴氏吸管反复冲洗骨片悬液，直至所有骨头变白；6取1个10cm培养皿，加入7ml含有10％胎牛血清和25mMHEPES的DMEM高糖培养基；然后，使用1ml移液器，将含有骨髓细胞的3ml培养基冲洗液从6孔板转移到每个培养皿中；充分混合后，将培养皿放入37℃，5％二氧化碳的细胞培养箱中；7在培养箱中培养48小时后，可以观察到大量的BMSCs集落形成；然后进行半换液；再培养48小时后，细胞密度达到大约80％，即可进行细胞传代。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 温州医科大学附属第一医院 一种从小鼠乳鼠提取骨髓间充质干细胞的方法

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