申请/专利权人:华南农业大学
申请日:2024-01-12
公开(公告)日:2024-05-28
公开(公告)号:CN118086354A
主分类号:C12N15/81
分类号:C12N15/81;A61K38/47;A61P1/00;A61P31/04;C12N15/65;C12N15/63;C12N9/36;C07K19/00;A23K20/189;C12R1/865
优先权:
专利状态码:在审-实质审查的生效
法律状态:2024.06.14#实质审查的生效;2024.05.28#公开
摘要:本发明属于生物技术领域,公开了一种表达人溶菌酶的布拉迪酵母系统及其构建方法与应用,本发明首次通过将融合了鸡溶菌酶信号肽的hLYZ基因转入益生菌S.bΔCUP1ΔURA3中,构建得到工程酵母S.bΔCUP1ΔURA3pCUP1‑cf‑hLYZ,该工程酵母可分泌表达具有抑菌活性的hLYZ。通过小鼠灌胃试验可见,该工程酵母能在小鼠肠道原位环境中通过Cu2+诱导表达hLYZ,且在肠道中展现出一定的功能活性。
主权项:1.一种表达人溶菌酶的布拉迪酵母系统,其特征在于,该表达系统的制备方法如下:S1、分别构建HyhMX6抗性、KanR抗性的同源臂,逐一插入替换掉布拉迪酵母染色体上CUP1的等位基因,再引入Cre-LoxP重组酶系统对HyhMX6KanR抗性进行消除,即得S.bΔCUP1;S2、分别构建HyhMX6抗性、KanR抗性的同源臂,逐一插入替换掉S.bΔCUP1染色体上URA3的等位基因,再引入Cre-LoxP重组酶系统对HyhMX6KanR抗性进行消除,即得S.bΔCUP1ΔURA3;S3、构建pCUP1Ura3cf-hLYZ质粒:扩增cf-hLYZ序列,另以pCUP1Ura3-αf-eGFP质粒为模板,扩增除αf-eGFP以外的载体骨架部分;将cf-hLYZ序列、载体骨架片段采用同源重组得到pCUP1Ura3-cf-hLYZ质粒;S4、将pCUP1Ura3-cf-hLYZ质粒转入S.bΔCUP1ΔURA3中,即得表达人溶菌酶的布拉迪酵母系统。
全文数据:
权利要求:
百度查询: 华南农业大学 一种表达人溶菌酶的布拉迪酵母系统及其构建方法和应用
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