申请/专利权人：浙江熙正霖生物科技有限公司

申请日：2022-08-04

公开（公告）日：2024-06-07

公开（公告）号：CN116064344B

主分类号：C12N1/21

分类号：C12N1/21;C12N15/53;C12N15/54;C12N15/55;C12N15/60;C12N15/61;C12N15/70;C12P7/22;C12R1/19

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.07#授权;2023.05.23#实质审查的生效;2023.05.05#公开

摘要：本发明涉及一种生物合成羟基酪醇的技术改进，具体为一种发酵生产羟基酪醇重组大肠杆菌的构建方法及应用，实现从简单碳源合成羟基酪醇的途径；将携带有质粒pRSFDuet‑HpaBC‑LAAD‑ARO10‑ADH和质粒pETDuet‑AROG‑TYRA的重组大肠杆菌BLAH和携带有质粒pRSFDuet‑1和pETDuet‑1的重组大肠杆菌BLCK于LB培养基中培养；按0.5～2％的接种量接入TB培养液中扩大培养，加入0.1～0.3mM的诱导剂进行诱导培养，以及在30℃，220rmin下继续培养进行产物的积累，每隔8小时液相色谱检测羟基酪醇产量。作为最简单的模式生物，其背景清晰，生长快速，易于规模化发酵培养且成本低廉；并且对大肠杆菌内源合成酪氨酸途径中的关键基因进行过表达，以及向积累酪氨酸的大肠杆菌宿主导入从酪氨酸合成羟基酪醇的异源基因，构建了从简单碳源合成羟基酪醇的途径。

主权项：1.一种发酵生产羟基酪醇重组大肠杆菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤，步骤一、PCR扩增获取HpaBC、LAAD基因和线性化pRSFDuet-1载体片段，通过同源重组将这些片段进行融合，得到质粒pRSFDuet-HpaBC-LAAD；PCR扩增获取ARO10、ADH基因和pRSFDuet-HpaBC-LAAD载体片段，通过同源重组将这些片段进行融合，得到质粒pRSFDuet-HpaBC-LAAD-ARO10-ADH；PCR扩增获取AROG、TYRA基因和线性化pETDuet-1载体片段，通过同源重组将这些片段进行融合，得到质粒pETDuet-AROG-TYRA；所述HpaBC基因的序列为SEQIDNO.1和SEQIDNO.2，所述LAAD基因的序列为SEQIDNO.3，所述ARO10基因的序列为SEQIDNO.4，所述ADH基因的序列为SEQIDNO.5，所述AROG基因的序列为SEQIDNO.6，所述TYRA基因的序列为SEQIDNO.7；步骤二、将质粒pRSFDuet-HpaBC-LAAD-ARO10-ADH和质粒pETDuet-AROG-TYRA共同转入大肠杆菌BL21DE3感受态细胞中，得到重组大肠杆菌BLAH。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 浙江熙正霖生物科技有限公司 一种发酵生产羟基酪醇重组大肠杆菌的构建方法及应用

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