申请/专利权人：广东省科学院生物与医学工程研究所

申请日：2023-09-22

公开（公告）日：2024-06-11

公开（公告）号：CN117269360B

主分类号：G01N30/02

分类号：G01N30/02;G01N30/72

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.11#授权;2024.01.09#实质审查的生效;2023.12.22#公开

摘要：本发明公开了一种发酵性乳制品中甘露寡糖含量的检测方法。包括以下步骤：1制备甘露寡糖的系列标准溶液并进行超高效液相色谱‑串联三重四极杆质谱检测；2将步骤1所得的系列标准溶液谱图按甘露寡糖品种拟合浓度与色谱峰面积曲线图；3发酵性乳制品样品的预处理及超高效液相色谱‑串联三重四极杆质谱检测；4根据步骤3获得的样品谱图保留时间确定甘露寡糖的聚合度，并采用步骤2中对应的曲线确定样品中各聚合度的甘露寡糖的含量；所述甘露寡糖为甘露二糖、甘露三糖、甘露四糖、甘露五糖、甘露六糖和或甘露七糖。本方法前处理简单、快速，分析时间短，选择性、灵敏度和准确度高。

主权项：1.一种发酵性乳制品中甘露寡糖含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1制备甘露寡糖的系列标准溶液并进行超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱检测；2将步骤1所得的系列标准溶液谱图按甘露寡糖品种拟合浓度与色谱峰面积曲线图；3发酵性乳制品样品的预处理及超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱检测；4根据步骤3获得的样品谱图保留时间确定甘露寡糖的聚合度，并采用步骤2中对应的曲线确定样品中各聚合度的甘露寡糖的含量；所述甘露寡糖为甘露二糖、甘露三糖、甘露四糖、甘露五糖、甘露六糖和甘露七糖；具体步骤如下：1准确称取甘露二糖、甘露三糖、甘露四糖、甘露五糖、甘露六糖和甘露七糖6种甘露寡糖标准品，用纯水溶解并定容，配成甘露寡糖混合标准储备液，然后再用纯水逐级稀释，配制成0.2mgL、0.5mgL、1.0mgL、2.0mgL、5.0mgL、10.0mgL、20.0mgL系列标准溶液，采用超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱检测，得到对应聚合度的甘露寡糖标准溶液谱图，通过特征离子对和保留时间确定甘露寡糖的品种；2将步骤1所得的系列标准溶液谱图分别根据甘露二糖、甘露三糖、甘露四糖、甘露五糖、甘露六糖、甘露七糖按最小二乘法函数关系拟合浓度与色谱峰面积关系曲线图；3称取样品2.0g，加入纯水10mL，定容，摇匀，超声波提取，转移至离心管，离心，取上清液过0.22μm滤膜，滤液供超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱检测，获得样品谱图；4根据步骤3中获得的样品谱图保留时间，与对应甘露寡糖标准溶液的保留时间作对比，确定甘露寡糖的聚合度；并采用步骤2中对应的甘露寡糖浓度与色谱峰面积关系曲线，作外标法定量，确定样品中各聚合度的甘露寡糖含量，所述色谱条件为：HypersilGOLDTMAmino色谱柱、1.7μm、100mm×2.1mm；色谱柱温为40℃；流速为0.4mLmin；进样量：5μL；流动相和洗脱时间为：流动相A为10mmolL乙酸铵水溶液，流动相B为含体积比0.04％氨水和10mmolL乙酸铵的乙腈溶液；洗脱时间0-2.0min，流动相A从20％到60％，流动相B从80％到40％；洗脱时间2.0-6.0min，流动相A从60％到40％，流动相B从40％到60％；洗脱时间6.0-8.0min，流动相A保持40％，流动相B保持60％；洗脱时间8.0-8.1min，流动相A从40％到20％，流动相B从60％到80％；洗脱时间8.1-10.0min，流动相A保持20％，流动相B保持80％；所述质谱条件为：电离模式：ESI-；仪器参数：喷雾电压：3500V；鞘气流速：40Arb；辅助气流速：10Arb；碰撞气流速：20Arb；吹扫气流速：1Arb；离子传输管温度：325℃；蒸发器温度：350℃；Q1分辨率：0.7FWHM；Q3分辨率：1.2FWHM；碰撞室气压：1.5mTorr；扫描模式：多反应监测SRM；所述样品为酸奶；所述甘露二糖的定量离子对：341.159178.917、定性离子对：341.15989.000；所述甘露三糖的定量离子对：503.162323.000、定性离子对：503.162161.000；所述甘露四糖的定量离子对：665.215605.167、定性离子对：665.215545.083；所述甘露五糖的定量离子对：827.354665.250、定性离子对：827.354707.250；所述甘露六糖的定量离子对：989.408827.333、定性离子对：989.408869.167；所述甘露七糖的定量离子对：1152.118503.112、定性离子对：1152.118665.167。

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权利要求：

百度查询： 广东省科学院生物与医学工程研究所 一种发酵性乳制品中甘露寡糖含量的检测方法

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