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申请/专利权人：中山大学附属第七医院(深圳)
摘要：本发明提供了一种基于Sanger测序检测遗传性白化病的方法，采用二代测序方法对患者进行全外显子测序，筛选出TYR基因两个可疑突变位点，采用一代测序技术在患者父母外周血DNA进行Sanger测序验证，并应用生物信息学SIFT和Polyphen‑2等功能预测软件进行蛋白功能预测，本发明的有益效果在于：本发明使用设计的引物，采用Sanger测序的方法对该病例的家系进行详细的TYR基因突变检测，确定两个突变为患者白化病的遗传因素，对两个可疑致病位点进行Sanger测序验证，患者病因最终得到确诊，并确认父母双方为TYR基因的杂合突变携带者，为家系的遗传咨询及产前诊断提供理论基础，为日后白化病的遗传咨询和产前诊断增添新的致病位点，为白化病的基因检测提供一种方法。
主权项：1.一种基于Sanger测序检测遗传性白化病的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、获取白化病患者及其无类似症状父母的外周静脉血液样本，每人样本采集量为2ml，用EDTA.K2抗凝剂抗凝；S2、患者DNA采用全外显子测序进行基因检测，针对TYR基因的两个突变位点c.440CG:p.S147*与c.1366+3AT，应用Premier3软件进行引物设计合成；S3、应用Sanger测序对患者和父母进行突变位点验证：反应体系为50μL,包括10×PCR缓冲液5μL，10mmolLdNTPs1μL，TaqDNA聚合酶0.5μL，PCR正向和反向引物100ngμL各1.25μL和2.5μL，DNA模板100ngμL，PCR反应程序：95℃变性5min，94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s，进行35次循环，最后72℃延伸7min，结束后4℃保存，PCR扩增后，取PCR反应产物5μL经1.5％琼脂糖凝胶电泳观察产物特异性，扩增产物经DNA纯化试剂盒纯化，进行Sanger测序；S4、测序结果用MutationSurveyorV3.97和Chromas软件进行分析；S5、分析获得结果为：基于Sanger测序验证患者c.1366+3AT突变源于母方，c.440CG:p.S147*突变源于父方。
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百度查询： 中山大学附属第七医院(深圳) 一种基于Sanger测序检测遗传性白化病的方法
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