申请/专利权人：天津科技大学

申请日：2023-01-04

公开（公告）日：2024-06-18

公开（公告）号：CN115820694B

主分类号：C12N15/60

分类号：C12N15/60;C12N9/88;C12N15/76;C12N1/21;C12P19/26;C12R1/465

优先权：["20221230 CN 2022117348859"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.18#授权;2023.04.07#实质审查的生效;2023.03.21#公开

摘要：本发明公开了一种新型透明质酸酶编码基因hylP，所述基因hylP来源于链霉菌菌株StreptomycesindicusCGMCC4.5727，其基因序列为SEQIDNO.1，其氨基酸序列为SEQIDNO.2。本发明新型链霉菌透明质酸酶编码基因hylP，该基因与已知的透明质酸酶基因同源性低低于50％，编码的透明质酸酶具有优异的透明质酸HA降解功能。

主权项：1.一种高产透明质酸酶的链霉菌工程菌株的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤1，蛋白酶基因clpP2突变株S.lividansclpP2KO的构建：该菌株在模式菌株S.lividansTK24中对蛋白质量控制系统clpP2基因进行了敲除而获得；步骤2，构建透明质酸酶高表达质粒：以StreptomycesindicusCGMCC4.5727基因组为模板，通过PCR反应扩增hylP基因,与gapdh启动子、xlnc信号肽的编码序列，通过goldengate连接克隆到pUC质粒载体获得中间质粒pUC57::Pgapdh-SPxlnc-hylP；最后通过限制性内切酶和T4DNA连接酶将完整的表达元件Pgapdh-SPxlnc-hylP克隆到pKC1139载体，构建成透明质酸酶表达质粒pKC1139::Pgapdh-SPxlnc-hylP；步骤3，高产透明质酸酶链霉菌工程菌株的获得：将步骤2高表达质粒pKC1139::Pgapdh-SPxlnc-hylP转入至S.lividansclpP2KO菌株，即获得高产透明质酸酶的基因工程菌；所述hylP来源于链霉菌菌株StreptomycesindicusCGMCC4.5727，其基因序列为SEQIDNO.1，其氨基酸序列为SEQIDNO.2；所述gapdh启动子来自于迟缓埃格特菌（Eggerthellalenta）甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子，其核苷酸序列为SEQIDNO.5；所述xlnc信号肽的编码序列来自于S.lividans中的木聚糖酶C，其核苷酸序列为SEQIDNO.6；所述链霉菌工程菌株进行透明质酸酶的发酵生产，过4天的摇瓶发酵，发酵液中透明质酸酶酶活达到3373Uml。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 天津科技大学 一种新型透明质酸酶编码基因及其高产工程菌、构建方法与应用

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