申请/专利权人：夏尔巴生物技术(苏州)有限公司

申请日：2020-12-02

公开（公告）日：2024-06-21

公开（公告）号：CN112899235B

主分类号：C12N5/10

分类号：C12N5/10;C07K16/46

优先权：["20191203 CN 2019112210766"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.21#授权;2024.05.24#专利申请权的转移;2022.09.30#实质审查的生效;2021.06.04#公开

摘要：本发明公开了一种细胞培养液的收获方法。所述方法包括以下步骤：1提供宿主细胞，对宿主细胞进行种子复苏、摇瓶扩增培养和流加培养，得到细胞密度不小于1.0×106个mL的细胞培养物；2向步骤1中所述细胞培养物中添加酸性溶液，调节细胞培养物的pH为4.0～5.6；3对步骤2所述的细胞培养物进行深层过滤和或添加碱性溶液，得到细胞培养液；4收获步骤3所述的细胞培养液。利用本发明提供的细胞培养液的收获方法能够显著提高细胞培养液的收获效率，同时还能显著提高深层过滤膜的包载量、降低细胞培养液的终点浊度，并提高生产的可操作性、降低生产设备和设施的成本投入。

主权项：1.一种细胞培养液的收获方法，所述方法包括以下步骤：1提供宿主细胞，对宿主细胞进行种子复苏、摇瓶扩增培养和流加培养，得到细胞密度不小于1.0×106个mL的细胞培养物；2向步骤1中所述细胞培养物中添加酸性溶液，调节细胞培养物的pH为4.0～5.6，其中所述酸性溶液含有枸橼酸、醋酸、磷酸、正辛酸及其盐中的一种及一种以上；3对步骤2所述的细胞培养物先进行深层过滤然后添加碱性溶液，得到细胞培养液，其中所述碱性溶液含有Tris、Tris-bis、组氨酸中的一种及一种以上；4收获步骤3所述的细胞培养液；在步骤1中使用基础培养基M对所述宿主细胞进行种子复苏和摇瓶扩增，使用流加试剂A和流加试剂B对所述宿主细胞进行流加培养；所述基础培养基M、流加试剂A和流加试剂B中的氨基酸组成分别为：基础培养基M由1877μmolL的天门冬氨酸、2958μmolL的谷氨酸、7030μmolL的天门冬酰胺、6743μmolL的丝氨酸、1224μmolL的组氨酸、1338μmolL的甘氨酸、5330μmolL的苏氨酸、1654μmolL的精氨酸、957μmolL的酪氨酸、250μmolL的胱氨酸、4320μmolL的缬氨酸、1486μmolL的蛋氨酸、46μmolL的正缬氨酸、1037μmolL的色氨酸、1694μmolL的苯丙氨酸、3621μmolL的异亮氨酸、5714μmolL的亮氨酸和3102μmolL的赖氨酸组成；流加试剂A由28522μmolL的天门冬氨酸、69790μmolL的谷氨酸、27269μmolL的天门冬酰胺、67615μmolL的丝氨酸、427μmolL的甘氨酸、27743μmolL的苏氨酸、24737μmolL的精氨酸、15836μmolL的丙氨酸、134μmolL的酪氨酸、515μmolL的胱氨酸、39443μmolL的缬氨酸、9194μmolL的蛋氨酸、23712μmolL的苯丙氨酸、24995μmolL的异亮氨酸、54470μmolL的亮氨酸、41555μmolL的赖氨酸和37559μmolL的脯氨酸组成；流加试剂B由681μmolL的天门冬氨酸、2666μmolL的谷氨酸、289μmolL的丝氨酸、190μmolL的谷氨酰胺、52542μmolL的组氨酸、544μmolL的甘氨酸、818μmolL的精氨酸、2140μmolL的丙氨酸、181291μmolL的酪氨酸、60141μmolL的胱氨酸、66897μmolL的色氨酸、220μmolL的赖氨酸和8305μmolL的脯氨酸组成；其中，所述基础培养基M溶解后pH为7.3～7.5，浊度为0.5～1NTU，渗透压为300～350mOsmkg，葡萄糖含量为5～6gL，其中谷氨酰胺、羟脯氨酸、丙氨酸、肌氨酸和脯氨酸的含量均小于40μmolL；所述流加试剂A溶解后pH为6.5～6.8，浊度为1.5～2.5NTU，渗透压为1500～1800mOsmkg，葡萄糖含量75.02gL，其中天门冬氨酸、谷氨酸、天门冬酰胺、丝氨酸、苏氨酸、精氨酸、丙氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸和脯氨酸的含量均大于10000μmolL；所述流加试剂B溶解后pH为11～11.5，浊度为1～1.5NTU，渗透压为1200～1500mOsmkg，其中组氨酸、酪氨酸、胱氨酸和色氨酸的含量均大于10000μmolL。

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