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申请/专利权人：四川大学华西医院
申请日：2023-10-26
公开（公告）日：2024-06-21
公开（公告）号：CN117447561B
主分类号：C07K14/025
分类号：C07K14/025;C07K1/22;C12N15/37;C12N15/70;C12N15/62;G01N33/68;G01N33/569
优先权：
专利状态码：有效-授权
法律状态：2024.06.21#授权;2024.02.13#实质审查的生效;2024.01.26#公开
摘要：本发明公开了人乳头病毒16型E7蛋白的制备及其应用，涉及生物领域。本发明联合GST标签和6×His标签作为人乳头病毒16型E7蛋白的纯化标签，提高了可溶性目的蛋白的纯化效率，通过GST纯化和镍柱纯化的方法对目的蛋白进行提纯，采用远超于正常洗脱体积的低浓度咪唑进行洗杂，避免或减少了GST标签非特异性结合镍柱较强难以去除的问题，使其目的蛋白的纯度达到90％以上，为检测血浆中的抗HPV16E7的抗体奠定了基础，节约了实验成本。
主权项：1.一种人乳头病毒16型E7蛋白的制备方法，其特征在于，其包括：对含有GST标签、人乳头病毒16型E7重组蛋白的核苷酸序列和His标签的表达载体进行诱导表达，获得表达产物；所述GST标签位于所述人乳头病毒16型E7重组蛋白的核苷酸序列的5’端，所述His标签位于所述人乳头病毒16型E7重组蛋白的核苷酸序列的3’端；对所述表达产物进行GST柱纯化、GST标签切除和镍柱纯化，以获得融合有His标签的人乳头病毒16型E7重组蛋白，His标签位于人乳头病毒16型E7重组蛋白的C端；其中，所述镍柱纯化包括：平衡、洗杂和洗脱；所述洗杂采用的洗杂液包括洗杂液1和洗杂液2，所述洗杂液1包括10mM～50mM的咪唑，所述洗杂液1的洗杂体积≥柱体积的100倍，所述洗杂液2包括30～80mM的咪唑，所述洗杂液2的洗杂体积≥柱体积的100倍；洗脱采用的洗脱液包括200～300mM的咪唑。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 四川大学华西医院 人乳头病毒16型E7蛋白的制备及其应用
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