申请/专利权人：新泰市佳禾生物科技有限公司

申请日：2021-10-30

公开（公告）日：2024-06-21

公开（公告）号：CN114134185B

主分类号：C12P13/06

分类号：C12P13/06;C12N1/21;C12N15/53;C12N15/54;C12N15/55;C12N15/60;C12N15/61;C12N15/31;C12R1/19

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.21#授权;2022.03.22#实质审查的生效;2022.03.04#公开

摘要：本发明公开了一种发酵生产L‑丝氨酸的方法，包括以下步骤：1将L‑丝氨酸生产菌的种子液接种至发酵培养基中进行发酵培养，发酵培养的温度为28‑32℃，pH为6.8‑7.2，溶氧为20‑40％，搅拌转速150‑250rpm；发酵培养至发酵液稀释100倍后的OD600值为0.40‑0.60时，降温至27‑29℃，向体系中加入IPTG进行诱导培养，诱导培养48‑52h；培养过程中监测体系的残糖含量，当体系的残糖含量≤1.0gL时开始添加补料，通过流加补料使体系中的葡萄糖浓度保持在0.5‑1.0gL；所述补料中含有葡萄糖60‑80gL、糖蜜40‑60mlL、叶酸0.3‑0.5gL；2将诱导培养后的培养物进行破菌处理，分离收集上清，即生产得到含有L‑丝氨酸的培养液。采用本发明的方法可以实现L‑丝氨酸的工业化生产，并显著提高了L‑丝氨酸的产量。

主权项：1.一种发酵生产L-丝氨酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：1将L-丝氨酸生产菌的种子液接种至发酵培养基中进行发酵培养，发酵培养的温度为28-32℃，pH为6.8-7.2，溶氧为20-40％，搅拌转速150-250rpm；发酵培养至发酵液稀释100倍后的OD600值为0.40-0.60时，降温至27-29℃，向体系中加入IPTG进行诱导培养，诱导培养48-52h；培养过程中监测体系的残糖含量，当体系的残糖含量≤1.0gL时开始添加补料，通过流加补料使体系中的葡萄糖浓度保持在0.5-1.0gL；所述补料中含有葡萄糖60-80gL、糖蜜40-60mlL、叶酸0.3-0.5gL；2将诱导培养后的培养物进行破菌处理，分离收集上清，即生产得到含有L-丝氨酸的培养液；步骤1中，所述L-丝氨酸生产菌由如下方法构建而成：将大肠杆菌中的gpmA、sdaA、mtfA、pta、glyA、sdaC、serA、sstT、tdcC、aceA和cycA基因敲除，获得大肠杆菌工程菌；将serB基因用sphⅠ和AaaI酶切处理，将serC基因用NcoⅠ和BglⅡ酶切处理，将酶切处理后的serB基因和serC基因整合到质粒PQE-N上，获得第一重组表达载体；将pGEX-kan质粒用ecoNⅠ和ZraⅠ双酶切，再将serAΔ197基因整合到双酶切处理后的质粒pGEX-kan上，获得第二重组表达载体；将获得的第一重组表达载体和第二重组表达载体导入到大肠杆菌工程菌中，即构建得到L-丝氨酸生产菌；serB基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；serC基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；质粒PQE-N的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；第一重组表达载体的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示；pGEX-kan质粒的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示；serAΔ197基因的核苷酸序列如SEQIDNO.7所示；第二重组表达载体的核苷酸序列如SEQIDNO.8所示。

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百度查询： 新泰市佳禾生物科技有限公司 一种发酵生产L-丝氨酸的方法

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