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一种基于滚环扩增检测miRNA-21和GSH的AND逻辑门生物传感器 

申请/专利权人:济南大学

申请日:2024-04-22

公开(公告)日:2024-06-25

公开(公告)号:CN118240923A

主分类号:C12Q1/6844

分类号:C12Q1/6844

优先权:

专利状态码:在审-公开

法律状态:2024.06.25#公开

摘要:本发明提供了一种基于滚环扩增的双响应检测miRNA‑21和GSH的AND逻辑门荧光生物传感器,包括RCA一锅法扩增制备的新型双靶点双链DNA纳米花探针,修饰S链、Q链、F链;所述RCA反应的Padlockprobe链、Primer链、S链、Q链、F链的核苷酸序列如SEQIDNO:1‑5所示。本发明的传感器具有良好的分析性能,并且具有灵敏度高、操作方便、响应迅速、检测限低、特异性高、按需双响应(AND逻辑门)等检测优点。可以弥补肿瘤生物标志物现有检测方法的缺陷与不足,实现对其快速、精准的同时检测。本研究所制备的荧光生物传感器对肿瘤生物标志物的检测具有方法上的通用性,在实际样品以及癌症监测中具有潜在的应用前景。

主权项:1.一种基于滚环扩增检测miRNA-21和GSH的AND逻辑门生物传感器,其特征在于,包括互补结合S链、Q链和F链的DNA纳米花探针;互补结合S链、Q链、F链的DNA纳米花探针的制备方法包括以下步骤:(1)将Padlockprobe、Primer在含Mg2+和ATP的缓冲液中热变性并冷却至室温,加入T4DNA连接酶孵育反应,灭活酶,获得反应液1;(2)在反应液1中加入ExoI、ExoIII孵育后,灭活酶,获得环状模板液;(3)将环状模板液中加入含Mg2+的缓冲液、phi29DNA聚合酶、dNTP、S链、Q链、F链孵育后,灭活酶,以ddH2O洗涤并离心,沉淀即修饰S链、Q链和F链的DNA纳米花探针;Padlockprobe、Primer、S链、Q链、F链的核苷酸序列如SEQIDNO:1-5所示;所述Padlockprobe的5’端磷酸化;所述S链5’端第8位糖基修饰二硫键,3’端修饰inverteddT;所述Q链5’端碱基修饰猝灭基团,3’端修饰inverteddT;所述F链3’端碱基修饰荧光基团。

全文数据:

权利要求:

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