申请/专利权人：华南师范大学

申请日：2023-08-18

公开（公告）日：2024-06-28

公开（公告）号：CN117288941B

主分类号：G01N33/558

分类号：G01N33/558;G01N33/543;G01N21/76;C09K11/06;C09K11/02;G01N33/531

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.28#授权;2024.01.12#实质审查的生效;2023.12.26#公开

摘要：本发明公开了一种基于L‑赖氨酸的自增强电化学发光探针在水相中快速合成方法及应用。基于L‑赖氨酸的自增强电化学发光探针在水相中快速合成方法，取Rubpy2Cl2和2,2’‑联吡啶‑4,4’‑二羧酸和NaHCO3溶于甲醇水溶液反应得到RuⅡ粉末；取RuⅡ粉末与EDC与NHS在羧基活化缓冲液环境下恒温孵育，得到RuⅡ‑NHS酯溶液，与L‑赖氨酸混合孵育，之后纯化得RuⅡ‑L‑Lys复合物；对RuⅡ‑L‑Lys复合物进行抗体标记，即得相应的探针。本发明提出了自增强电化学发光探针在水相中快速合成方法，该方法合成条件温和、对环境友好，易于大批量生产。

主权项：1.基于L-赖氨酸的自增强电化学发光探针在水相中的快速合成方法，包括以下步骤：1Rubpy2dcbpyPF62的合成二氯双2,2’-联吡啶钌，2,2’-联吡啶-4,4’-二羧酸和碳酸氢钠溶于甲醇水溶液中，在恒温磁力搅拌器中冷却回流反应，反应结束后用浓硫酸将反应后所得溶液pH值调至3.8-4.4，然后在冰浴、避光环境中冷却、沉淀、真空抽滤、收集滤液，在滤液中加入六氟磷酸钠溶液，冰浴、避光冷却、离心去上清、干燥，得Rubpy2dcbpyPF62固体粉末，即RuⅡ固体粉末；2自增强ECL复合物的制备取乙基-3-二甲基氨基丙基碳酰二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，分别溶于磷酸盐缓冲溶液中；将RuⅡ固体粉末加入乙基-3-二甲基氨基丙基碳酰二亚胺溶液中，震荡均匀后，再加入N-羟基琥珀酰亚胺溶液中；然后恒温培养振荡孵育活化羧基，得到中间产物RuⅡ-NHS酯溶液；RuⅡ-NHS酯溶液与L-赖氨酸混合后避光反应进行酰胺连接，分离纯化，获得RuⅡ-L-Lys复合物溶液；3RuⅡ-L-Lys-抗体复合物的制备所述RuⅡ-L-Lys复合物溶液中加入乙基-3-二甲基氨基丙基碳酰二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，于恒温培养振荡器中避光孵育，以活化RuⅡ-L-Lys复合物中L-赖氨酸的羧基；而后加入抗体溶液，震荡均匀，于恒温培养振荡器中，避光反应以完成酰胺连接，分离纯化，得RuⅡ-L-Lys-抗体复合物，即自增强ECL探针。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 华南师范大学 一种基于L-赖氨酸的自增强电化学发光探针在水相中快速合成方法及应用

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