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用DNA标签标记的基因过表达慢病毒质粒文库及其制备方法和应用 

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申请/专利权人:北京镁伽科技有限公司

摘要:本发明涉及质粒文库领域,具体涉及一种用DNA标签标记的慢病毒质粒文库及其制备方法和应用。本发明的慢病毒质粒文库包括多个慢病毒质粒,所述慢病毒质粒由5’端到3’端的顺序含有以下元件:筛选标记基因表达盒、一个基因ORF表达盒、通用序列和一个DNA标签序列,各个慢病毒质粒上的DNA标签序列不同;其中,所述基因ORF表达盒含有启动子和一个基因的ORF序列。本发明的慢病毒质粒文库可以通过通用PCR引物对DNA标签序列进行富集和测序检测,以指征对应的被整合的基因ORF序列,从而实现在同一管中方便且低成本的检测整合到目的细胞的目的基因,以进行后续体内或体外的各种生物学功能基因的筛选实验。

主权项:1.一种慢病毒质粒文库,其特征在于,该慢病毒质粒文库包括多个慢病毒质粒,所述慢病毒质粒由5’端到3’端的顺序含有以下元件:筛选标记基因表达盒、一个基因ORF表达盒、通用序列和一个DNA标签序列,各个慢病毒质粒上的DNA标签序列不同;其中,所述基因ORF表达盒含有启动子和一个基因的ORF序列;所述基因的ORF序列选自:NM_001122951.3、NM_001296.5、NM_020311.3、NM_178445.2、NM_001295.3、NM_016602.3、NM_001123041.3、NM_001164680.2、XM_017005685.1、NM_005508.5、NM_000579.4、NM_004367.6、NM_001838.4、NM_001301714.2、NM_005201.4、NM_031200.3、NM_001130910.2、NM_001171174.1、NM_000634.3、NM_001557.4、NM_001142797.2、XM_005262256.3、XM_005262257.3、NM_001348056.2、NM_001348059.2、NM_001008540.2、NM_001716.5、NM_006564.2、NM_005283.3、NM_001346425.2、NM_003670.3、NM_016269.5、NM_001330754.2、NM_001256765.1、NM_176786.2、NM_002228.4、NM_002198.3、NM_001363649.2、NM_138456.4、NM_000417.3、NM_001300807.2、NM_001300808.2、NM_018664.3、NM_005018.3、NM_001935.4、NM_001195470.3、NM_001706.5、NM_032782.5、NM_005060.4、NM_001024630.4、NM_003855.5、NM_006399、NM_001031804.3、NM_001079539.2、NM_001184714.2、NM_000551.4和NM_173799.4;所述通用序列为在慢病毒质粒中位于基因的ORF序列与DNA标签序列之间的共有序列,用于测序分析时的引物设计;所述DNA标签序列选自SEQIDNO:58-200所示的序列;所述慢病毒质粒由慢病毒骨架质粒构建,所述慢病毒骨架质粒的序列为SEQIDNO:206。

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