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一种化合物对胰岛素分泌刺激效应的检测方法 

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申请/专利权人:武汉科技大学

摘要:本发明提出了一种化合物对胰岛素分泌刺激效应的检测方法,属于生物检测技术领域,包括如下步骤:PBS溶液的配制;培养基的配制;0.25%胰酶的配制;四甲基偶氮唑盐溶液的配制以及细胞培养,培养基为浓度含10%胎牛血清的DMEM低糖高糖完全培养基;通过低糖DMEM培养基对细胞饥饿处理24h,加入化合物CXW预处理6h去除培养基,在通过SDS裂解液加入细胞样品中裂解10min,并进行离心,然后测定蛋白浓度,以实现化合物是否具有潜在的胰岛素分泌刺激效应;化合物CXW通过作用于体内细胞内PTP1B,致使PTP1B的活性降低,从而增强胰岛素信号通路的活性,最终增强胰岛素刺激状态下机体细胞的胰岛素生物学效应。

主权项:1.一种化合物对胰岛素分泌刺激效应的检测方法,其特征在于,包括如下步骤:S1:PBS溶液的配制,称取NaCi8.0g、KCI0.2g、Na2HPO4·H01.5g、KHPO40.2g,倒入盛有800ml蒸馏水的烧杯中,充分溶解,调整pH为7.4后准确定容至1000ml;S2:培养基的配制,将10.0gDMEM低糖高糖干粉培养基溶于1L的去离子水中,加入3.7g碳酸氢钠,充分溶解,调整pH值至7.0,再加入青霉素终浓度为100Uml和链霉素终浓度为100μgml,过滤除菌后,4℃保存备用。使用前加入胎牛血清,配成浓度为含10%胎牛血清的DMEM低糖高糖完全培养基;0.25%胰酶的配制:准确称取0.25g胰酶,充分溶于100mIPBS中,放置于4℃过夜,用过滤除菌,-20℃保存备用;S3:四甲基偶氮唑盐溶液的配制,称取250mgMTT,用PBS溶解,制成5mgml溶液,过滤除菌,4℃备用;S4:细胞培养,含10%胎牛血清、双抗100Uml青霉素与100gml链霉素的培养液,置于5%CO2,37℃培养箱内进行培养。

全文数据:

权利要求:

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