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申请/专利权人:华南农业大学
摘要:本发明属于生物技术领域,具体涉及一种具有补肾壮阳功效的瓜蒌多肽及其制备方法和应用。本发明经过瓜蒌原料预处理、瓜蒌种子液制备、瓜蒌粗肽制备、离子交换树脂层析、高效液相色谱纯化等过程制备得到具有补肾壮阳功效的瓜蒌多肽。本发明提供的瓜蒌多肽能够调节TM3细胞中睾酮分泌相关基因和蛋白的表达,增强线粒体功能,促进线粒体生物发生相关基因和蛋白的表达,可显著促进TM3细胞的睾酮分泌,具有补肾壮阳的功效,拓展了瓜蒌的应用范围。
主权项:1.一种瓜蒌多肽的制备方法,其特征在于,所述制备方法具体包括以下步骤:步骤1:取去壳粉碎后的瓜蒌种子脱脂、去除酚类物质后干燥打粉,得瓜蒌种子粉;步骤2:对所述瓜蒌种子粉进行加热水提,得到蛋白变性后的瓜蒌种子液;步骤3:对所述瓜蒌种子液进行复合酶解,酶解结束后灭酶、固液分离,收集酶解液,减压蒸馏,干燥,得到瓜蒌粗肽;所述复合酶解采用中性蛋白酶和碱性蛋白酶;步骤4:将所述瓜蒌粗肽溶于水中,配制成瓜蒌粗肽溶液,过滤,将所得滤液进行离子交换树脂层析,以双蒸水作为洗脱液,根据吸光度曲线的出峰时间收集洗脱液,随后经浓缩干燥处理得到离子交换层析酶解物;所述离子交换树脂层析采用纤维素阴离子交换层析柱;步骤5:将所述离子交换层析酶解物溶于水中,利用反相高效液相色谱分离纯化,收集能显著促进TM3细胞睾酮分泌的蛋白多肽,得瓜蒌多肽;所述反相高效液相色谱中色谱柱为C18色谱柱,流动相A为0.1%-0.2%三氟乙酸-水溶液,流动相B为0.1%-0.2%三氟乙酸-乙腈溶液,梯度洗脱;所述梯度洗脱的程序为:0-3min,流动相为95%流动相A+5%流动相B;3-10min,流动相为80%流动相A+20%流动相B;10-20min,流动相为50%流动相A+50%流动相B;20-23min,流动相为20%流动相A+80%流动相B。
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