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申请/专利权人：浙江大学
摘要：本发明公开了一种API5基因敲除的THP‑1细胞系及其构建方法与干扰载体。本发明提供的特异性靶向API5的引物序列SEQIDNo.1和SEQIDNo.2、API5干扰载体及其重组慢病毒可为多种类型的API5基因敲除细胞系构建提供基础。本发明首次公开了API5基因的新功能，它参与抗病毒天然免疫以及dsRNA介导的细胞凋亡通路的调控。此外，本发明提供的API5基因敲除的THP‑1细胞为API5基因功能的研究提供了一种强有力的细胞模型，可用于体外探究API5在调控细胞凋亡、免疫、炎症、病毒感染及癌症等的研究，可以用于药物筛选和制备，应用前景广泛。
主权项：1.一种API5基因敲除的THP-1细胞系的构建方法，其特征是：包括以下步骤：1根据人API5基因全长序列和pSIREN-RetroQ-ZsGreen1-Puro载体的信息设计并合成含有BamHI及EcoRI酶切位点的靶向API5的引物序列，正义寡核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，反义寡核苷酸序列如SEQIDNo.2所示；2API5干扰载体的构建及其重组慢病毒的制备：将1中的API5shRNA引物退火形成互补双链，退火后产物与经BamHI及EcoRI酶切后的pSIREN-U6载体进行T4连接，连接产物转化大肠杆菌感受态细胞，挑选单克隆菌送测序；将鉴定阳性克隆菌扩大培养，并提取质粒，采用脂质体将pSIREN-U6-shAPI5、pSPAX2和pMD2.G按照4:3:1比例共转染HEK293T细胞，48h后观察绿色荧光，并获取pSIREN-U6-shAPI5重组慢病毒；3API5基因敲除的THP-1细胞系构建：用制备的pSIREN-U6-shAPI5重组慢病毒感染THP-1细胞，通过嘌呤霉素筛选获得稳定敲除API5基因的THP-1细胞系。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 浙江大学 一种API5基因敲除THP-1细胞系及其构建方法与干扰载体
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