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申请/专利权人：吉林大学
申请日：2021-11-18
公开（公告）日：2022-02-11
公开（公告）号：CN114034861A
主分类号：G01N33/569(20060101)
分类号：G01N33/569(20060101);G01N21/31(20060101)
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2022.03.01#实质审查的生效;2022.02.11#公开
摘要：本发明提供一种噬菌体裂解酶结合BLI快速检测S.aureus的方法，涉及金黄色葡萄球菌检测技术领域，解决了S.aureus传统检测方法步骤多、操作繁琐、耗时长的问题。包括以下步骤：一是传感器活化，二是裂解酶的固定化，三是将AR2G传感器封闭，四是样品检测及结果判断。本发明操作简单、实时监测、无标记、结果易得；实现样品随到随检，可以在较短的时间完成样品中目标菌的识别检测，根据样品中所含金黄色葡萄球菌浓度的不同，单纯的样品检测时间可以控制在数十秒到十几分钟之内；裂解酶对目标菌可以特异的识别，保证该方法的特异性，排除非目标菌的潜在干扰；通过信号曲线有无峰的出现可以进行死活菌的区分；裂解酶易于获得，方便制备。
主权项：1.一种噬菌体裂解酶结合BLI快速检测S.aureus的方法，其特征在于：包括以下步骤：1、传感器活化：将AR2G传感器的末端浸入蒸馏水中预湿至少十分钟后，浸入40mM的1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳二亚胺盐酸盐和20mM的N-羟基琥珀酰亚胺混合活化试剂中活化150-450秒；2、裂解酶的固定化：将活化后的AR2G传感器浸入用pH4-6的醋酸-醋酸钠缓冲溶液稀释的浓度为12.5-100μgmL的突变的LysGH15中进行固定化600-900秒；3、封闭：裂解酶固定化后，将AR2G传感器依次浸入1M乙醇胺盐酸盐溶液和1％牛血清白蛋白溶液中封闭150-450秒；4、样品检测及结果判断：将已封闭的AR2G传感器浸入含有0.02％吐温-20的磷酸盐缓冲溶液中平衡150-450秒，然后将其浸入样品中进行S.aureus的检测，实时读取结合信号；对于定性分析，当结合信号值大于等于仪器的有效信号值0.0075nm即可判定样品中存在S.aureus；对于定量分析，将结合时间为3分钟、6分钟、9分钟和12分钟的结合信号值y分别代入菌浓度和结合信号间的数学公式1、2、3、4，求解所得的浓度即为样品中S.aureus的具体浓度，通过多组数据进行对比，保证最终数据的可信度。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 吉林大学 一种噬菌体裂解酶结合BLI快速检测S.aureus的方法
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