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申请/专利权人：华中科技大学同济医学院附属协和医院

摘要：本发明公开了一种超薄APCS植片的制备方法，涉及角膜内皮片领域，该制备方法包括对脱细胞猪角膜基质进行清洁并脱水，将冰冻切片机预冷至低于20℃，在样品托上涂抹OCT包埋剂并修平，将脱水后的基质放置在OCT包埋剂上并冷冻，设置冰冻切片机的切片厚度为20～60μm并进行切割，得到超薄APCS植片。本发明得到厚度为20～60μm的超薄APCS植片，有效提高植片与患者眼部的融合性，提高手术的成功率，同时，冷冻切片机的成本较低，操作方法较简单，能够有效降低植片的制备成本，降低患者的医疗成本。

主权项：1.一种超薄APCS植片的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：对脱细胞猪角膜基质进行清洁并脱水，将冰冻切片机预冷至低于20℃，在样品托上涂抹OCT包埋剂并修平，将脱水后的基质放置在OCT包埋剂上并冷冻，设置冰冻切片机的切片厚度为20～60μm并进行切割，得到超薄APCS植片；所述对脱细胞猪角膜基质进行清洁并脱水具体包括以下步骤：吸取脱细胞猪角膜基质表面的甘油，放入带有PBS或生理盐水培养皿中进行水化处理至基质完全水肿并与培养皿底的粘附松解，清洗水肿后的基质至无甘油后，放入高渗溶液中进行脱水至基质沉降到高渗溶液底部；所述在样品托上涂抹OCT包埋剂并修平具体包括以下步骤：在样品托上涂抹OCT包埋剂并预冷，所述OCT包埋剂彻底凝固后将样品托夹紧在冷冻切片机上，设置冷冻切片机的切片厚度为30～50μm，启动粗进退键，转动旋钮，将OCT包埋剂修平；所述将脱水后的基质放置在OCT包埋剂上并冷冻，设置冰冻切片机的切片厚度为20～60μm并进行切割，得到超薄APCS植片具体包括以下步骤：将脱水后的基质放置在OCT包埋剂上并在基质上涂抹OCT包埋剂至将基质包埋，将带有基质的样品托放置在冷冻架上至基质表面的OCT包埋剂完全冷冻，对基质底部边缘进行标记后，在一次在基质表面涂抹OCT包埋剂并冷冻，先设置冷冻切片机的切片厚度为30～50μm，启动粗进退键，转动旋钮至基质底部边缘的标记位于切割视野中，再设置冷冻切片机的切片厚度为20～60μm并进行切割，得到相应的超薄APCS植片；所述得到相应的超薄APCS植片之后还包括以下步骤：在超薄APCS植片种植内皮细胞至细胞融合，得到可移植的内皮细胞植片。

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