申请/专利权人：江苏省无锡环境监测中心

申请日：2022-03-16

公开（公告）日：2023-07-25

公开（公告）号：CN114480535B

主分类号：C12P21/04

分类号：C12P21/04;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16;C12N1/20;C12R1/01

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.07.25#授权;2022.05.31#实质审查的生效;2022.05.13#公开

摘要：本发明公开了一种微囊藻毒素‑LW的制备方法，涉及生物制药技术领域，解决了现有技术中制备微囊藻需要多个分离纯化步骤、制备效率和产率低、不同微囊藻毒素种类的产率并不稳定以及无法制备微囊藻毒素‑LW的问题。该方法包括在水中加入营养物质得到培养液；将铜绿微囊藻加入培养液中并放入培养器中；将培养器置于光照培养箱内，培养至成熟期，抽滤提取得到藻细胞；对藻细胞进行冷冻融化和超声提取，得到提取液；将提取液倒入萃取柱进行多次洗脱，收集洗脱液；洗脱液经制备色谱分离、旋转蒸发后，收集固体粉末；在步骤3中检测pH值，当pH值达到阈值时加入磷元素。该方法可用于制备微囊藻毒素‑LW。

主权项：1.一种微囊藻毒素-LW的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：在水中加入营养物质，营养物质的组成按质量浓度计算包括：柠檬酸5.4~6.6mgL、柠檬酸铁胺5.4~6.6mgL、NaNO3540~660mgL、MgSO4•7H2O27~33mgL、K2HPO414.0~17.2mgL、CaCl2•2H2O34.2~41.8mgL、Na2CO318~22mgL、H3BO32.57~3.15mgL、MnCl2•4H2O1.63~1.99mgL、ZnSO4•7H2O0.202~0.242mgL、Na2MnO4•2H2O0.351~0.431mgL、CuSO4•5H2O0.071~0.087mgL和Co（NO3）2•6H2O0.044~0.054mgL，加入硝酸铯，加入量为8.75~10.75mgL，得到培养液，采用高压蒸汽锅进行灭菌，灭菌温度为120℃~130℃，灭菌时间为30~40min；步骤2：将铜绿微囊藻加入培养液中，并将含有铜绿微囊藻FACHB-1752的培养液放入培养器中；步骤3：将培养器置于光照培养箱内，培养至成熟期，通过离心抽滤提取得到藻细胞；步骤4：对藻细胞进行冷冻融化，再加入甲醇水溶液进行超声提取，得到提取液；步骤5：将提取液倒入活化的C18固相萃取柱，采用甲醇洗脱液进行多次洗脱直至色素去除，收集洗脱液；步骤6：洗脱液经制备色谱分离，旋转蒸发后，收集固体粉末即为微囊藻毒素-LW；在步骤3过程中，检测pH值，当pH值达到6~7时，加入磷元素，所述磷元素的原料为黄磷，所述黄磷的加入量为10~15mgL；所述步骤2中，所述铜绿微囊藻与培养液体积比为1：49~59；所述步骤4中，冷冻融化包括如下步骤：步骤41：将藻细胞放入-25℃~-30℃冰箱中进行冷冻；步骤42：对冷冻后的藻细胞进行融化；步骤43：重复步骤41至步骤42至少2~3次；所述步骤4中，甲醇水溶液需要盖没藻细胞，使得藻细胞浸泡于甲醇水溶液中；所述步骤4中，甲醇水溶液中甲醇和水的体积比为1：4~4.5；所述步骤5中，甲醇洗脱液的加入量为每1ml提取液中加入8~10mL洗脱液。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 江苏省无锡环境监测中心 一种微囊藻毒素-LW的制备方法

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