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申请/专利权人：南京工业大学;南京师范大学

摘要：本申请公开了一种高表达gstA基因质粒、其构建方法、含高表达gstA基因质粒的曲霉工程菌株及其构建方法与应用，属于生物工程领域。本申请高表达gstA基因质粒的构建方法包括：从曲霉菌株的基因组扩增gstA基因片段，并利用引物heigpd‑FL‑Zero‑R扩增合成载体pEASY‑Cre‑LoxP‑gpd获得线性化质粒载体；将gstA基因片段与线性化质粒载体连接，并将连接产物转化至DH5α感受态细胞培养，挑取单克隆并经菌落PCR验证及测序。本申请高表达gstA基因质粒能够通过PgpdA控制gstA高表达，从而可以使含有高表达gstA基因质粒的曲霉工程菌株能够在发酵培养中大幅增加糖耗速率，显著缩短发酵周期。

主权项：1.一种高表达gstA基因质粒的构建方法，其特征在于，所述方法包括：利用引物Zero-GstA-FGpd-GstA-R从原始曲霉菌株的基因组中PCR扩增获得gstA基因片段，其中，所述gstA基因的基因ID为ASPNIDRAFT2_1141004；所述Zero-GstA-F的核苷酸序列为SEQIDNO.2所示；所述Gpd-GstA-R的核苷酸序列为SEQIDNO.3所示；利用引物heigpd-FL-Zero-R对合成载体pEASY-Cre-LoxP-gpd进行PCR扩增获得线性化质粒载体，其中，所述合成载体pEASY-Cre-LoxP-gpd含有hph基因片段和启动子PgpdA；所述heigpd-F的核苷酸序列为SEQIDNO.9所示；利用克隆试剂盒将所述gstA基因片段与所述线性化质粒载体进行连接，并将所得产物转化至DH5α感受态细胞之后，接种于含有氨苄青霉素的LB培养基中培养，挑取单克隆并利用引物Zero-GstA-FHeigpd-seq-F进行菌落PCR验证以及引物Hgpd-seq-F对菌落PCR验证正确的质粒进行测序，得到高表达gstA基因质粒，其中，所述Heigpd-seq-F的核苷酸序列为SEQIDNO.10所示；所述Hgpd-seq-F的核苷酸序列为SEQIDNO.11所示。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 南京工业大学 南京师范大学 高表达gstA基因质粒、其构建方法、含高表达gstA基因质粒的曲霉工程菌株及其构建方法与应用