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申请/专利权人：宁波希诺赛生物科技有限公司
申请日：2022-08-18
公开（公告）日：2024-05-14
公开（公告）号：CN115322964B
主分类号：C12N5/0775
分类号：C12N5/0775;C40B50/06
优先权：
专利状态码：有效-授权
法律状态：2024.05.14#授权;2022.11.29#实质审查的生效;2022.11.11#公开
摘要：本发明属于干细胞培养技术领域，具体涉及一种3D培养羊膜间充质干细胞种子库构建方法。本发明的一种3D培养羊膜间充质干细胞种子库构建方法包括下述步骤：1先后采用第一消化液和第二消化液对羊膜组织进行消化，分离得到羊膜间充质干细胞；2对经步骤1处理得到的羊膜间充质干细胞进行培养，得到P0代羊膜间充质干细胞；3对P0代羊膜间充质干细胞进行3D生物反应器培养，得到P1代羊膜间充质干细胞；4对P1代细胞进行冻存，即得种子库。本发明的3D培养羊膜间充质干细胞种子库构建方法可在较短的体外培养时间下，得到传代次数少P1代细胞的种子库细胞，可保持较好的干性和归巢性，有助于发挥其临床效果。
主权项：1.一种3D培养羊膜间充质干细胞种子库构建方法，其特征在于，包括下述步骤：（1）先后采用第一消化液和第二消化液对羊膜组织进行消化，消化结束后除去所述第二消化液，分离得到原代羊膜间充质干细胞；（2）对经步骤（1）处理得到的所述原代羊膜间充质干细胞进行培养，待细胞融合度达到80%-90%时，采用胰酶替代物消化，得到P0代羊膜间充质干细胞；（3）对所述P0代羊膜间充质干细胞进行3D生物反应器培养，得到P1代羊膜间充质干细胞；（4）对所述P1代羊膜间充质干细胞进行冻存，即得所述种子库；所述第一消化液包括胰酶替代物和分散酶；所述胰酶替代物为TrypleSelect，浓度为1X；所述分散酶的浓度为1-3mgmL；所述第二消化液包括胶原酶A和脱氧核糖核酸酶I，所述第二消化液中，胶原酶A的浓度为1-3mgmL，脱氧核糖核酸酶I的浓度为50-200UmL；步骤（1）中，所述第一消化液消化的时间为1-2h，所述第二消化液消化的时间为1.5-2h。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 宁波希诺赛生物科技有限公司 一种3D培养羊膜间充质干细胞种子库构建方法
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