申请/专利权人：沈阳化工大学

申请日：2024-01-09

公开（公告）日：2024-05-24

公开（公告）号：CN118063634A

主分类号：C08B37/00

分类号：C08B37/00;A61P39/06;A61P25/00;A61K31/715

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.06.11#实质审查的生效;2024.05.24#公开

摘要：具有抗氧化和神经细胞保护活性的北柴胡根多糖制备方法，涉及一种植物多糖制备方法，该方法首先采用石油醚、乙醇和蒸馏水冷凝回流提取法从北柴胡根中得到浸膏，去蛋白，脱色后，利用DEAE‑52纤维素柱层析分离，用去离子水和0.1molL～0.5molL的NaCl溶液洗脱，并用SephadexG‑200凝胶进一步纯化，最终收集得到1个北柴胡根多糖BCPR。BCPR的分子量为21.20KDa，由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖组成。BCPR主要结构片段为α‑L‑Araf‑1→4‑β‑L‑Rhap‑1→4‑α‑D‑GalpA6Me‑1→3‑α‑L‑Araf‑1→2‑α‑D‑Galp‑1→4‑β‑D‑Xylp‑1→。体外DPPH和ABTS自由基清除活性表明，该多糖具有抗氧化活性。同时，可以提高损伤神经细胞中的T‑AOC、SOD、GSH‑Px活力，降低MDA含量，有效缓解神经细胞的氧化损伤。

主权项：1.具有抗氧化和神经细胞保护活性的北柴胡根多糖制备方法，其特征在于，所述方法包括以下制备过程：将北柴胡根部饮片用10倍体积石油醚（1:10,wv）回流提取3次，每次2h脱脂；晾干后，继续用10倍体积的70%乙醇（1:10，wv）回流提取3次，每次2h，去除黄酮、皂苷小分子成分；最后使用蒸馏水冷凝回流提取法，按照料液比1:50（gmL）用蒸馏水提取2h，重复3次；收集上清液，60℃下减压浓缩，得到粗多糖提取液；酶解法联合Sevage法去蛋白，将多糖粗提取液配制成0.08gL的溶液，加入2.5%（多糖质量）的中性蛋白酶，在50℃条件下恒温搅拌反应1h，后升温至90℃反应10min，室温放置冷却后在4000rpm的转速下，离心5min，收集上清液并加入14体积的Sevage试剂（二氯甲烷：正丁醇=4:1），搅拌30min后以上述同样条件进行离心操作，下层沉淀为变性蛋白胶质，收集上层水层干燥后得到脱蛋白的粗多糖；称取1mg脱蛋白粗多糖测定蛋白含量；重复该操作，直至测定的蛋白含量稳定后即可停止操作；AB-8型大孔树脂去除多糖中的色素，树脂用95%乙醇浸泡，使其充分溶胀；随后洗至树脂没有醇味后装入色谱柱，使用少量蒸馏水溶解已脱蛋白的粗多糖，均匀上样到色谱柱表层；用蒸馏水反复冲洗至洗脱液变为无色后进行下一次上样，收集洗脱液，减压浓缩后用透析袋（3500kDa）在蒸馏水中透析48h，真空干燥后得到脱色素的北柴胡根多糖；用DEAE-52纤维素柱对粗多糖进行分离与纯化，将处理好的DEAE-52纤维素缓慢装入到放有筛板和棉花的色谱柱中（D6.0×60.0cm），打开出液口，DEAE-52纤维素沉降，用蒸馏水平衡5-6个柱体积，压实柱床，沉淀过夜后即可上样；称取1.5g粗多糖用蒸馏水溶解后上样，挂柱6h；以蒸馏水和0.1molL～0.5molL的NaCl作为流动相进行梯度洗脱，使用自动接样器以1mLmin的洗脱速度收集洗脱液；采用苯酚-硫酸法，使用紫外可见分光光度计监测多糖含量，每隔一管测定一次吸光度，所得数据绘制吸光度-管数洗脱曲线；合并峰型对称的试管中的洗脱液进行减压浓缩，经透析、干燥后得到不同组分的多糖；SephadexG-200柱对所得的组分进行纯化，称取50～100mg经DEAE柱处理过的的粗多糖，将去离子水溶解好的多糖样品均匀平铺在SephadexG-200表面，挂柱6h；挂样结束后，向层析柱中缓慢加入去离子水，用自动接样器收集洗脱下来的样品，直至洗脱液无明显颜色；用苯酚硫酸法对试管中收集的样品进行多糖含量的测定，并绘制洗脱曲线；根据绘制的洗脱曲线收集对称峰，合并滤液后减压浓缩，使用3500kDa透析袋透析48h得到1个北柴胡根多糖（BCPR）；上述得到的北柴胡根多糖，其分子量为21.20KDa，且由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖组成，质量百分比分别为：21.88%、15.18%、10.76%、15.78%、6.27%、21.63%。

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