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申请/专利权人：常州鸿蒙生物科技有限公司
申请日：2022-12-02
公开（公告）日：2024-06-04
公开（公告）号：CN118126976A
主分类号：C12N9/08
分类号：C12N9/08;C12N15/53;C12N15/62;C07K19/00;C12N15/85;G01N33/535
优先权：
专利状态码：在审-公开
法律状态：2024.06.04#公开
摘要：本发明涉及一种大规模定向标记HRP的方法，先通过重组构建和哺乳动物表达系统分别得到融合HRP的特异性结合蛋白、融合抗体的多肽序列，并对其分别进行纯化，纯化后在融合HRP的特异性结合蛋白和融合抗体的多肽序列混合液中加入缓冲溶液Ⅰ，接着在混匀器中于22‑26℃温度下反应30‑120min，本发明将多肽序列、特异性结合蛋白和真核表达系统完美的结合，将融合HRP的特异性结合蛋白和融合抗体的多肽序列定向偶联，这种偶联是定向的，偶联方法简单、快速，条件温和，对操作人员的要求低，且这种偶联方式不会破坏HRP的结构，解决了现有标记HRP方法不适用于大规模工业化制备的问题，最重要的是本发明的标记效率≥90%，标记效率远高于传统的过碘酸钠法标记法。
主权项：1.一种大规模定向标记HRP的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：融合HRP的特异性结合蛋白制备和纯化：通过重组构建和哺乳动物表达系统得到融合HRP的特异性结合蛋白，接着通过高耐受的Ni填料进行亲和纯化；S2：融合抗体的多肽序列制备和纯化：重组构建并通过哺乳动物表达系统得到融合抗体的多肽序列，并通过rProteinAt填料进行纯化；S3：定向偶联HRP：将融合HRP的特异性结合蛋白和融合抗体的多肽序列中加入缓冲溶液Ⅰ，接着在混匀器中于22-26℃温度下反应30-120min；其中，HRP、特异性结合蛋白、多肽序列的基因序列分别由SEQIDNO.1、SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所定义。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 常州鸿蒙生物科技有限公司 一种大规模定向标记HRP的方法
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