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申请/专利权人：中国海洋大学
申请日：2022-05-12
公开（公告）日：2024-06-18
公开（公告）号：CN114807331B
主分类号：C12Q1/6869
分类号：C12Q1/6869
优先权：
专利状态码：有效-授权
法律状态：2024.06.18#授权;2022.08.16#实质审查的生效;2022.07.29#公开
摘要：本发明涉及DNA测序技术领域。针对短链DNA难以进行纳米孔测序的问题，本发明提供一种短链DNA的纳米孔测序方法：待测的短链DNA，待测区T的两侧分别为B区和C区，B区和C区为互不包含的DNA片段；以短链DNA为模板设计引物对；以短链DNA为模板，以设计的引物对进行PCR扩增，得到重复含待测区T的DNA长双链；将扩增的DNA长双链进行纳米孔测序、分析结果，确定具体序列。本发明仅需选取少量的测序结果进行比对即可实现对待测序列的准确测定，只需分析一个足够长的Read即可完成对短链DNA的测序，在一次纳米孔测序操作中，可用于同时测多个序列组成的基因组。
主权项：1.一种短链DNA的纳米孔测序方法，其特征在于，所述短链DNA包含待测区T，待测区T位于该短链的中间，待测区T的两侧分别为B区和C区，B区和C区为互不包含的DNA片段；步骤一，以所述短链DNA为模板设计引物对，一条引物包含3′端序列和5′端序列，另一条引物包含3′端序列和5′端序列或者只包含3′端序列，至少有一条引物的5′端序列长度在20nt以上；上游引物的3′端序列同所设计的DNA的B区序列相同，5′端序列同C区序列完全相同；下游引物的3′端序列同C序列区互补，5′端序列同B区序列完全互补；步骤二，以所述短链DNA为模板，采用常规的PCR条件，以步骤一设计的引物对进行PCR扩增，得到重复含待测区T的DNA长双链，待测区T的重复数至少为20次；步骤三，将步骤二扩增的DNA长双链进行纳米孔测序；步骤四，对步骤三的纳米孔原始测序数据进行分析，得出最终测序结果；步骤五，根据步骤四的测序分析结果，比对分析，从而确定具体序列。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中国海洋大学 一种短链DNA的纳米孔测序方法
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