申请/专利权人：浙江大学

申请日：2024-04-30

公开（公告）日：2024-06-21

公开（公告）号：CN118222686A

主分类号：C12Q1/6869

分类号：C12Q1/6869;C12Q1/686

优先权：

专利状态码：在审-公开

法律状态：2024.06.21#公开

摘要：本发明公开了一种转录组和基因组可及性双模态测序试剂盒和方法，能同时分析一个细胞中的染色体开放区域基因组信息和转录组信息，属于单细胞测序技术领域。所述试剂盒包括带有细胞标签1的转座酶和反转录引物、带有细胞标签2的第一杂交引物、带有细胞标签3的第二杂交引物和第三杂交引物及多种酶试剂；所述方法包括酶切、逆转录、末端转移酶加尾、连接、修复及扩增文库等步骤。本发明基于带有不同细胞标记序列的转座酶，带有不同细胞标签的随机引物、连接引物和杂交引物，实现上亿种分子标记来标记单个细胞，并对其进行超高通量的转录组和基因组可及性测序，具有重要的应用推广价值。

主权项：1.一种转录组和基因组可及性双模态测序试剂盒，其特征在于，包括：连接有特殊定制序列的转座酶，用于在切割基因组的同时将所述特殊定制序列连接在基因片段上，所述特殊定制序列为双链序列，分别为第一链序列和第二链序列，其中第一链序列5'-3'依次包括连接序列1、细胞标签1序列A和包埋序列，其中第二链序列为所述包埋序列的互补序列；反转录引物，5'-3'依次包括连接序列1、细胞标签1序列R和随机序列，所述随机序列用于与RNA杂交并延伸得到cDNA序列，所述细胞标签1序列R与所述细胞标签1序列A各不相同且一一对应；第一杂交引物，5'-3'依次包括测序接头1序列、细胞标签2序列和连接序列2，桥连引物，5'-3'依次包括至少一部分所述连接序列1的互补序列和至少一部分所述连接序列2的互补序列，用于使所述连接序列1和所述连接序列2连接；第二杂交引物，5'-3'依次包括所述包埋序列的互补序列、细胞标签3序列A、至少一部分所述连接序列1的互补序列和测序接头2序列；第三杂交引物，5'-3'依次包括连接序列3、细胞标签3序列R和多聚T序列；第一PCR扩增引物组合，包括两段第一PCR扩增上游引物和一段第一PCR扩增下游引物，其中一段第一PCR扩增上游引物为测序接头2序列，用于预扩增开放的基因组片段；另一段第一PCR扩增上游引物5'-3'依次包括为至少一部分测序接头2序列和至少一部分连接序列3，用于预扩增cDNA；所述第一PCR扩增下游引物5'-3'为至少一部分测序接头1序列的反向互补序列；第二PCR扩增引物组合，包括基因组第二PCR扩增上游引物、转录组第二PCR扩增上游引物和第二PCR扩增下游引物，所述基因组第二PCR扩增上游引物5'-3'依次为测序接头2序列和增加扩增特异性的碱基序列，所述转录组第二PCR扩增上游引物5'-3'依次为测序接头2序列和至少一部分连接序列3，所述第二PCR扩增下游引物为包括index序列的测序接头序列。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 浙江大学 一种转录组和基因组可及性双模态测序试剂盒和方法

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