申请/专利权人：北京昭衍新药研究中心股份有限公司

申请日：2024-04-08

公开（公告）日：2024-06-21

公开（公告）号：CN118225940A

主分类号：G01N30/02

分类号：G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86;G01N30/04

优先权：

专利状态码：在审-公开

法律状态：2024.06.21#公开

摘要：本发明提供了一种生物基质中寡核苷酸含量的测定方法，涉及生物检测技术领域。本发明提供的生物基质中寡核苷酸含量的测定方法，通过流动相中加入离子对试剂及EDTA提高待测物的离子化效率且改善仪器中Na、K离子与待测物结合的问题；进一步地，本发明通过使用寡核苷酸类化合物专用色谱柱改善色谱峰的峰形及残留问题，通过采用液液萃取及液液萃取+固相萃取的方法提高提取回收率，改善基质效应。

主权项：1.一种生物基质中寡核苷酸含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：提供待测寡核苷酸的标准溶液、内标溶液和预处理后的待测生物基质样品，利用高效液相色谱-串联质谱仪对待测寡核苷酸的标准溶液和预处理后的待测生物基质样品分别进行检测，通过绘制标准曲线，得到生物基质中寡核苷酸的含量；将待测生物基质样品与内标溶液混合后进行核酸提取，取核酸提取液得到所述预处理后的待测生物基质样品；所述高效液相色谱的流动相为：A相为水、六氟异丙醇、N,N二异丙基乙胺和EDTA的混合液，其中水、六氟异丙醇、N,N二异丙基乙胺和EDTA的体积比为100:0.4-0.6:0.17-0.18:0.0015-0.0025；B相为乙腈或甲醇中的一种、六氟异丙醇、N,N二异丙基乙胺和EDTA的混合液，其中乙腈或甲醇中的一种、六氟异丙醇、N,N二异丙基乙胺和EDTA的体积比为100:0.4-0.6:0.17-0.18:0.0015-0.0025；所述高效液相色谱的流动相为：A相为水、六氟异丙醇、N,N二异丙基乙胺和EDTA的混合液，其中水、六氟异丙醇、N,N二异丙基乙胺和EDTA的体积比为100:0.5:0.174:0.002；B相为乙腈腈或甲醇中的一种、六氟异丙醇、N,N二异丙基乙胺和EDTA的混合液，其中乙腈腈或甲醇中的一种、六氟异丙醇、N,N二异丙基乙胺和EDTA的体积比为100:0.5:0.174:0.002；采用空白生物基质样品将待测寡核苷酸稀释获得一系列不同浓度的待测寡核苷酸的标准溶液，经核酸提取后取核酸提取液进行液相色谱-串联质谱仪检测，并分别记录每个浓度的待测寡核苷酸对应的峰面积，根据待测寡核苷酸峰面积与浓度的关系，绘制所述标准曲线。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 北京昭衍新药研究中心股份有限公司 生物基质中寡核苷酸含量的测定方法

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