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申请/专利权人：国家纳米科学中心
申请日：2021-06-24
公开（公告）日：2024-06-21
公开（公告）号：CN113604419B
主分类号：C12N5/071
分类号：C12N5/071
优先权：
专利状态码：有效-授权
法律状态：2024.06.21#授权;2021.11.23#实质审查的生效;2021.11.05#公开
摘要：本发明涉及一种小鼠原代肝脏枯否细胞的提取方法。本发明提供的提取方法包括：采用一次性输液装置进行缓冲液灌注，结合胶原酶灌注进行肝脏消化处理；小鼠肝脏静脉灌流消化后，撕碎肝包膜进行肝脏组织过滤；过滤后多次离心处理获得高纯度的肝脏组织细胞。本发明提供的方法能够在保证细胞纯度的基础上，使得细胞保持较好活性。采用本发明所提供的提取方法分离出小鼠肝脏枯否细胞的效率更高，小鼠肝脏枯否细胞提取量维持在5×106‑8×106个。本发明提供的方法使用设备简单易得，为不具备蠕动泵的实验室提供了极大的便利，所用一次性输液装置成本低，并可更好的满足细胞提取过程的无菌操作要求。
主权项：1.一种小鼠原代肝脏枯否细胞的提取方法，其特征在于，针对已死亡的小鼠，使用HBSS缓冲液从小鼠门静脉处原位灌注，从下腔静脉末端排出，肝脏颜色由暗红变为黄色后；使用胶原酶替换缓冲液进行灌注，胶原酶灌注时间维持6-10min；使用胶原酶逆向灌注时，从下腔静脉处灌注，从门静脉处排出；灌注前，将HBSS缓冲液和胶原酶液置于35-38℃水浴中预热4-7分钟；使用Percoll分离液对消化后获得的肝脏组织进行梯度离心；所述Percoll分离液为30%Percoll和70%Percoll；所述梯度离心包括：（1）对消化处理后的肝脏组织，离心35-70g，3-5分钟；（2）收集上清，继续离心650g，5-7分钟；（3）弃上清，用HBSS重悬沉淀，使用Percoll分离液分离细胞，离心1800g，15-20分钟，无制动；（4）取两个不同浓度Percoll分离液的中间层细胞，用HBSS重悬，离心650g，5-7分钟；离心温度为0-4℃；在步骤（1）、步骤（2）或步骤（4）中，离心机选择最大制动；离心得到的细胞接种培养12-16分钟后，弃去未贴壁细胞，得到小鼠原代肝脏枯否细胞；所述胶原酶为质量体积比为0.04%的胶原酶IV。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 国家纳米科学中心 一种小鼠原代肝脏枯否细胞的提取方法
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