申请/专利权人：滨州医学院

申请日：2021-10-28

公开（公告）日：2024-06-25

公开（公告）号：CN113980122B

主分类号：C07K14/78

分类号：C07K14/78;C07K1/107;C07K1/34;C07K1/14;C12P21/06;A23L33/165;A23L33/18;A61K38/39;A61K33/26;A61P7/06;A61P1/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.25#授权;2022.02.18#实质审查的生效;2022.01.28#公开

摘要：本发明公开了猪皮胶原肽‑亚铁螯合物的制备方法及用途。该方法包括如下步骤：将猪皮胶原肽冻干粉溶解，得浓度为0.05～0.5gmL的猪皮胶原肽溶液；向猪皮胶原肽溶液中加入抗坏血酸，调pH值为4～6，再加入FeCl2·4H2O，在20～50℃下螯合10～60min，加入无水乙醇进行醇沉；其中，抗坏血酸与FeCl2·4H2O的质量比为0.1～0.5:1，猪皮胶原肽与FeCl2·4H2O中Fe2+的摩尔比为1～3.5:1。本发明的制备方法制备的猪皮胶原肽‑亚铁螯合物的得率和螯合率均较高，且该猪皮胶原肽‑亚铁螯合物治疗缺铁性贫血效果和促进肠道菌群恢复效果均优于硫酸亚铁。

主权项：1.一种猪皮胶原肽-亚铁螯合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1）脱脂预处理：取鲜猪皮，去掉筋膜、削尽皮下脂肪层，切成1×1cm的猪皮丁，加入碱液浸泡8h，再用去离子水洗至中性，烘箱90～100℃烘干，粉碎，加入2倍重量的石油醚超声脱脂，脱脂后挥干石油醚，得脱脂猪皮；其中，所述碱液为0.3wt%的NaOH溶液，碱液的用量为猪皮丁重量的5倍；超声脱脂为在40℃条件下，50Hz脱脂3次，每次30min；2）蛋白酶酶解：取500g脱脂猪皮，加8倍重量的去离子水煮沸15min，再降温至55℃，保温，得猪皮液；向猪皮液中加碱性蛋白酶，酶解1h，再加入菠萝蛋白酶，酶解3h，煮沸15min灭酶，得猪皮粗酶解液；猪皮粗酶解液经抽滤除渣，冷藏12h后，5000rmin离心3次，每次10min，得猪皮酶解液；将猪皮酶解液减压浓缩后，5Pa、-80℃冷冻干燥，得初猪皮胶原肽冻干粉；其中，碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶的用量分别为干猪皮重量的1%；干猪皮为将鲜猪皮于105℃烘干至恒重所得；3）超滤分段：将初猪皮胶原肽冻干粉配制成初猪皮胶原肽溶液，采用截留分子量为3kDa和1kDa的超滤膜对初猪皮胶原肽溶液进行超滤分段，收集分子量为1～3kDa的猪皮胶原肽溶液，冷冻干燥，得分子量为1～3kDa的猪皮胶原肽冻干粉；4）螯合反应：将分子量为1～3kDa的猪皮胶原肽冻干粉用去离子水溶解，得浓度为0.15gmL的猪皮胶原肽溶液；加入抗坏血酸，用10wt%盐酸调pH值为5，再加入FeCl2·4H2O，在40℃下螯合40min，用6倍体积的无水乙醇醇沉，慢加快搅，冷藏静置24h后收集沉淀，无水乙醇洗涤，50℃烘干，得猪皮胶原肽-亚铁螯合物；其中，抗坏血酸与FeCl2·4H2O的质量比为0.3:1，猪皮胶原肽与FeCl2·4H2O中Fe2+的摩尔比为3:1。

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