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申请/专利权人：深圳博雅感知药业有限公司;齐鲁理工学院
申请日：2022-02-25
公开（公告）日：2024-06-25
公开（公告）号：CN114774363B
主分类号：C12N5/095
分类号：C12N5/095;C12N5/09;C12N5/079;G01N33/569;G01N33/574
优先权：
专利状态码：有效-授权
法律状态：2024.06.25#授权;2022.09.13#实质审查的生效;2022.07.22#公开
摘要：本发明提供了一种肿瘤干细胞获取方法，该方法将胶质瘤细胞系进行干性培养，干性培养过程中对细胞进行低温刺激等手段，以激活并扩增起始肿瘤干种子细胞，然后利用干性相关标志物进行分选，分选后培养过程中去除贴壁的无干性特征的胶质瘤细胞，剩余悬浮细胞可进行重复多次的肿瘤球培养即肿瘤干细胞。本发明所述的肿瘤干细胞获取方法可以快速扩增干性较强的细胞，为后期的分选、培养提供大量的肿瘤干种子细胞，本方法适用于大规模肿瘤干细胞库建库使用，以满足常规肿瘤生物医学基础研究、临床研究以及抗肿瘤药物开发等工作需求。
主权项：1.一种肿瘤干细胞获取方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：1胶质瘤细胞系U118MG干性培养：将U-118MG细胞接种在肿瘤干细胞培养基中培养3-5天，肿瘤干细胞培养基为包含1-40ngml的bFGF、1-20ngml的EGF、0.5-4％的B27-50x、0.1-0.4％青链霉素-100x的DMEMF12无血清完全培养基；并在培养过程中进行低温刺激，低温刺激的方法为：在4℃-10℃的环境下培养1-5次，每次10-30分钟；2免疫磁珠分选；2.1对步骤1得到的细胞结构进行消化处理并重悬，对细胞悬液离心，收集细胞沉淀，并再次重悬；2.2向细胞悬液中加入FcR阻断试剂、CD133磁珠，充分混匀后在冰箱中孵育；2.3对孵育后的细胞清洗、离心、重悬，之后加入分离柱中洗去未标注CD133的细胞，使阳性细胞CD133+留在分离柱内；3分选后差速贴壁纯化；将磁珠分选后的细胞以1×105个细胞mL接种在肿瘤干细胞培养基中，成球培养的第一代细胞贴壁的较多，收集成球生长的细胞，进行胰酶消化，反复收集成球细胞去除贴壁细胞有利于纯化肿瘤干细胞，经过反复多次传代后获得完全悬浮成球生长的干性细胞；4肿瘤干细胞快速扩增。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 深圳博雅感知药业有限公司;齐鲁理工学院 一种肿瘤干细胞获取方法
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