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申请/专利权人：青岛科技大学

摘要：本发明属于酶活力测定技术领域。针对羟丙基纤维素溶液制备困难以及现有的MBTH法在测定纤维素酶活力时，准确性、重复性和稳定性不足的问题，本发明提供一种羟丙基纤维素溶液制备方法，将羟丙基纤维素分散到碱性溶液中，然后将分散液冻结，再解冻，不需要高浓度碱就可以制得羟丙基纤维素溶液。本发明还提供纤维素酶活力的测定方法：配制底物溶液和纤维素酶溶液；绘制葡萄糖吸光度值与葡萄糖浓度的标准对应关系曲线；纤维素酶的酶解反应；测定酶解空白；纤维素酶活力计算。本发明的MBTH法与现有技术的MBTH法相比，标准曲线截距更趋近于零，显色产物更稳定，所测酶活力更能够体现纤维素酶对底物的酶解效率。

主权项：1.一种纤维素酶活力的测定方法，其特征在于，具体包括以下步骤：1配制底物溶液和纤维素酶溶液：制备羟丙基纤维素溶液，待羟丙基纤维素溶解后调pH值至待测pH值，再用待测pH值的缓冲溶液定容，得到底物溶液；用同一所述缓冲溶液配制纤维素酶溶液；所述羟丙基纤维素溶液的制备方法是将羟丙基纤维素分散到NaOH溶液中，然后将该分散液冻结，再解冻，即得羟丙基纤维素溶液，所述羟丙基纤维素的摩尔取代度为0.2-1.5，所述NaOH溶液的OH-浓度为0.05-0.4molL；2绘制葡萄糖吸光度值与葡萄糖浓度的标准对应关系曲线：a.用步骤1配制的底物溶液，配制一系列浓度梯度的葡萄糖标准溶液，所述一系列浓度梯度的葡萄糖标准溶液中的底物的浓度相同，并且葡萄糖浓度范围为0-0.3mmolL；b.向所述一系列浓度梯度的葡萄糖标准溶液中加入碱性试剂得到碱性葡萄糖标准溶液，所有葡萄糖标准溶液中碱性试剂的浓度相同，然后加入新鲜配制的MBTH试剂，体系中OH-浓度为0.01-0.2molL，MBTH的初始浓度范围为0.3-4.5mmolL，DTT的初始浓度范围为0-1.6mmolL，在50-100℃条件下反应5-180min，再加入酸性铁试剂，体系中H+浓度范围为0.02-0.3molL，Fe3+的初始浓度范围为1-6mmolL，发生显色反应，显色稳定后在580-680nm波长下测定吸光度值，根据每组葡萄糖浓度与测得的吸光度值之间的关系绘制标准对应关系曲线；所述的MBTH试剂是由MBTH和DTT配制而成的水溶液，或者是只由MBTH配制而成的水溶液；所述酸性铁试剂是由可溶性Fe3+盐和强酸配制而成的水溶液；3纤维素酶的酶解反应：向纤维素酶溶液中加入步骤1配制的底物溶液，保证所得溶液中底物的浓度与步骤2葡萄糖标准溶液中底物的浓度相同，然后进行酶解反应，再加入碱性试剂，终止酶解反应，得到碱性酶解液，所述碱性酶解液中碱性试剂的浓度与步骤2碱性葡萄糖标准溶液中碱性试剂的浓度相同；4制备碱性酶解空白溶液；5测定碱性酶解液和碱性酶解空白溶液：根据步骤2的方法进行MBTH反应，测定碱性酶解液和碱性酶解空白溶液，从而获得酶解产生的还原端基的浓度，进而得到纤维素酶活力。

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