申请/专利权人：杭州百裕生物科技有限公司

申请日：2023-10-20

公开（公告）日：2024-02-06

公开（公告）号：CN117088987B

主分类号：C07K19/00

分类号：C07K19/00;C12N15/85;C12N5/10;G01N21/64

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.02.06#授权;2023.12.08#实质审查的生效;2023.11.21#公开

摘要：本发明公开了一种FMDV蛋白酶抑制剂的筛选方法和抑制效果评价方法，在GFP中插入FMDV的3C蛋白酶相关裂解位点的序列，形成改造后的荧光蛋白报告蛋白，在该荧光蛋白报告蛋白质粒上，克隆表达FMDV3C蛋白酶，可用于筛选蛋白酶抑制剂以及对蛋白酶抑制剂活性的评价，最终形成FMDV蛋白酶抑制剂筛选及药效评价平台。本发明能够避免使用FMDV活病毒引发的安全性顾虑，对生物安全等级要求低，BSL‑1级实验室即可满足实验要求，高效、准确、稳定、高通量、可重复的用于FMDV蛋白酶抑制剂筛选及药效评价。

主权项：1.一种FMDV蛋白酶抑制剂的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）构建共表达改造的GFP和FMDV3C蛋白酶的质粒，所述改造的GFP为在野生型GFP上插入FMDV3C蛋白酶切割序列而成；（2）筛选：将待转染细胞铺于多孔板中，然后加入共表达改造的GFP和FMDV3C蛋白酶的质粒进行转染，对转染后的细胞进行培养，同时向多孔板中添加不同组的待筛选抑制剂，以不添加待筛选抑制剂的为对照，观察细胞状态及荧光拍照，并检测荧光强度；若与对照相比荧光强度增加，则表示待筛选抑制剂具有抑制效果，荧光强度增加越多则代表待筛选抑制剂的抑制效果越强；FMDV3C蛋白酶切割序列在野生型GFP氨基酸序列上的插入位点包括位点A、位点C和位点D；位点A为野生型GFP氨基酸序列第158~159位氨基酸；位点C为野生型GFP氨基酸序列第159~160位氨基酸；位点D为野生型GFP氨基酸序列第170~171位氨基酸；所述野生型GFP氨基酸序列见SEQIDNo.1所示；FMDV3C蛋白酶切割序列包括cut1、cut2、cut3、cut4，cut1氨基酸序列为AEKQLKAR，cut2氨基酸序列为PHHEGLVV，cut3氨基酸序列为KIIAPAKQLLNFDLLK，cut4氨基酸序列为DLERAEKQLKARDIND；位点A上插入的FMDV3C蛋白酶切割序列为cut4；位点C上插入的FMDV3C蛋白酶切割序列为cut1；位点D上插入的FMDV3C蛋白酶切割序列为cut3。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 杭州百裕生物科技有限公司 FMDV蛋白酶抑制剂的筛选方法和抑制效果评价方法

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