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申请/专利权人：迪辅乐生物(上海)有限公司
申请日：2024-01-29
公开（公告）日：2024-04-26
公开（公告）号：CN117925771A
主分类号：C12Q1/04
分类号：C12Q1/04;C12N1/20;C12R1/01
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.05.14#实质审查的生效;2024.04.26#公开
摘要：本发明公开了一种HMO高利用率菌株的筛选方法和得到的高HMO利用率的菌株，该方法简单快捷，筛选一目了然，可以用于HMO为唯一碳源的利用率筛选，也可以用于其他碳源作为唯一碳源的利用率筛选；该方法避免了厌氧菌在生长曲线测定过程中反复取放引起氧气后对菌株生长造成的影响，为严格厌氧菌的生长曲线测定提供了一种可行的实验方案。本发明筛选的长双歧杆菌婴儿亚种DiproF能够高效利用HMO，相比市场所售的婴幼儿可食用名单菌株具有更优的HMO利用效率，经过全基因组测序确定了HMO利用机制，菌株经实验验证不存在安全隐患。
主权项：1.一种HMO高利用率菌株的筛选方法，其特征在于，所述筛选方法包括如下步骤：1分别将待测多株双歧杆菌活化得到种子液，然后将种子液离心后PBS洗涤重悬后得到细菌悬液，然后将细菌悬液以1％-10％的体积百分比加入到含有溴酚甲紫的无碳源MRS+培养基中培养，以2’-FL和LNnT分别作为唯一碳源进行添加，然后以葡萄糖为阳性对照，以水为阴性对照，观察培养基颜色，菌株生长，则培养基颜色变黄，反之培养基颜色维持紫色，将获得的培养基颜色变黄对应的菌株初步判断为能够同时利用2’-FL和LNnT的菌株；2使用步骤1的方法将步骤1得到的菌株分别制备细菌悬液，将细菌悬液接种到含有无碳源MRS+培养基中，以2’-FL和LNnT分别作为唯一碳源进行添加，然后以葡萄糖为阳性对照，以水为阴性对照，根据取样时间次数，配置多个平行培养的菌，每隔几个小时测定OD600，绘制生长曲线，根据生长曲线计算曲线下面积AUC，根据AUC判断测试的不同菌株对不同碳源的利用率；所述AUC的公式如下： 其中，t为时间，0＜i＜48h，OD代表OD600值，当测试的菌株的AUC值大于标准菌株M16V的10倍以上，即为HMO高利用率菌株。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 迪辅乐生物(上海)有限公司 一种HMO高利用率菌株的筛选方法以及高HMO利用率菌株
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