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申请/专利权人：中国林业科学研究院林业研究所;浙江农林大学
申请日：2023-11-22
公开（公告）日：2024-05-03
公开（公告）号：CN117965615A
主分类号：C12N15/84
分类号：C12N15/84;C12N15/65;A01H5/06;A01H6/00
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.05.21#实质审查的生效;2024.05.03#公开
摘要：本发明公开了一种基于根系侵染的黑杨遗传转化方法，属于植物生物工程技术领域；包括：1采用携带抗除草剂草铵膦筛选标记的表达载体的农杆菌，侵染44号抗虫黑杨带有1‑2cm茎节的无菌幼苗根系，根系剪切成只保留根茎连接处0.2‑0.5cm的根长的结构；2将侵染后完成共培养的根系放置到含有草铵膦筛选的生根培养基上进行培养；3将在草铵膦筛选生根培养基上生根的新生根剪切成小段，放置到含有0.8mgL草铵膦浓度的分化培养基，分化出芽；4将所述不定芽接种到含有草铵膦筛选的生根培养基上进行培养；5对所述生根幼苗进行GUS染色鉴定。本发明通过对具有抗性的转基因植株进行再次草铵膦抗性表达载体的农杆菌介导转化，克服了已转基因植株再次转化难以获得阳性苗的约束性，同时缩短了黑杨转化周期至3个月，提高黑杨进行转化的效率至29.03％。本发明将为黑杨分子设计育种提供技术保障。
主权项：1.一种基于根系侵染的黑杨遗传转化方法，其步骤如下：1侵染工作液的制备取携带表达载体pCambia3300的农杆菌，加入液体LB培养基，制备侵染工作液；2侵染受体材料准备：取44号黑杨无菌组培苗，选取根系生长符合要求的组培苗，去除根系上的培养基，将根系剪切成只保留根茎连接处0.2-0.5cm的根长的结构；3根系侵染：将步骤2剪切好的根系直接浸泡在1的侵染工作液中，根系在侵染工作液中侵染10-15min；4根系诱导生根：将侵染后的根系用滤纸吸干菌液，并将根系放入共培养基上培养，共培养结束后，直接插入生根培养基中；5根系分化培养：将在生根培养基上生长的根系剪切成小段，然后将剪切好的小段放置到分化培养基上；6幼苗生根：待分化培养阶段产生的不定芽生长到1-2cm后，切下不定芽，放到生根培养基培养，得到生根的幼苗。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中国林业科学研究院林业研究所;浙江农林大学 一种基于根系侵染的黑杨遗传转化方法
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