申请/专利权人：沈阳农业大学

申请日：2022-02-22

公开（公告）日：2024-05-28

公开（公告）号：CN114854786B

主分类号：C12N15/84

分类号：C12N15/84;C12N15/29;C12N15/65;A01H1/02;A01H5/00;A01H6/46

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.05.28#授权;2022.08.23#实质审查的生效;2022.08.05#公开

摘要：本发明公开了一种通过基因工程改造CENH3蛋白提高玉米单倍体诱导系诱导率的方法，具体涉及基因工程领域。所述方法包括将玉米CENH3基因中N末端的序列替换为玉米H3基因的N末端序列，得初步改造基因1，再将基因1克隆到以UbiquitinUBI为启动子，且含有大分子红色荧光蛋白RFP标签的植物过表达载体pCAMBIA3301‑RFP中，构建形成过表达着丝粒特异融合蛋白的载体UBI:M‑tailswap‑RFP，将该过表达载体转化到玉米受体中，得阳性转化株系LH244M‑tailswap‑RFP；将阳性株系LH244M‑tailswap‑RFP与受体亲本CAU5进行杂交1代，随后继续以CAU5为轮回亲本回交2代，再自交至少4代，即得。本发明的培育方法可以显著提高玉米单倍体诱导系的诱导率，并且利用含有荧光标记的玉米单倍体诱导系进行单倍体诱导，能够提高田间鉴别单倍体的效率并简化鉴别过程。

主权项：1.一种通过基因工程改造CENH3蛋白提高玉米单倍体诱导系诱导率的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：步骤一，将玉米CENH3基因中N末端的序列替换为玉米H3基因的N末端序列，得初步改造基因1，所述改造基因1序列如SEQIDNO.5所示，再将基因1克隆到以Ubiquitin为启动子，且含有大分子量标签的植物过表达载体pCAMBIA3301-RFP中，构建形成过表达着丝粒特异融合蛋白的载体UBI:M-tailswap-RFP，将该过表达载体转化到玉米受体中，得阳性转化株系LH244M-tailswap-RFP；步骤二，将所述阳性转化株系与玉米受体亲本CAU5进行杂交，得到杂交1代，随后继续以CAU5为轮回亲本回交2代，接着再自交至少4代，最后形成具有高诱导率的新型诱导系；所述步骤一中，着丝粒特异融合蛋白具体为将玉米着丝粒特异组蛋白CENH3的N端氨基酸序列替换为玉米核小体组蛋白H3的N端氨基酸序列，并在CENH3蛋白的C端连接上大分子量荧光标签RFP的融合表达蛋白；转化采用的是农杆菌浸胚法；玉米受体株系采用的是LH244株系；所述步骤二中，受体亲本玉米为Stock6来源的玉米单倍体诱导系CAU5。

全文数据：

权利要求：

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