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申请/专利权人：江南大学

摘要：本发明公开了一种改造酿酒酵母菌以葡萄糖为底物合成活性VD3的方法，属于生物技术领域。本发明通过导入DHCR24，强化ERG1，ERG11，tHMG1，ERG7，ERG2，敲除ERG6基因，并通过导入不同的羟化酶确定最合适的维生素D3羟化酶，发现在酵母中VDH无需提供额外的电子传递链便可以发挥作用，将合成的VD3转化为25‑OH‑VD3，并且合成25‑OH‑VD3的量是suaC的5倍。在以葡萄糖为底物的发酵生产中，最终合成5.02mgL的活性体25‑OH‑VD3，解决了现有技术中仅能以VD3作为底物转化活性体25‑OH‑VD3的问题。

主权项：1.一种以葡萄糖为底物从头合成25-OH-VD3的酿酒酵母，其特征在于：所述酿酒酵母异源表达了delta24-甾醇还原酶DHCR24和氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的维生素D3羟化酶VDH，并过表达了鲨烯环氧酶ERG1、甾醇14α-去甲基化酶ERG11、截短的3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶tHMG1、羊毛甾醇合酶ERG7和甾醇C-8异构酶ERG2，同时敲除了甾醇C-24甲基转移酶ERG6；所述酿酒酵母分别引入一个拷贝的delta24-甾醇还原酶DHCR24、维生素D3羟化酶VDH、鲨烯环氧酶ERG1、甾醇14α-去甲基化酶ERG11、截短的3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶tHMG1、羊毛甾醇合酶ERG7和甾醇C-8异构酶ERG2，所述维生素D3羟化酶VDH编码基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示，所述delta24-甾醇还原酶DHCR24编码基因的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示，所述鲨烯环氧酶ERG1编码基因的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示，所述甾醇14α-去甲基化酶ERG11编码基因的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示，所述截短的3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶tHMG1编码基因的核苷酸序列如SEQIDNO.6所示，所述羊毛甾醇合酶ERG7编码基因的核苷酸序列如SEQIDNO.7所示，所述甾醇C-8异构酶ERG2编码基因的核苷酸序列如SEQIDNO.8所示，所述甾醇C-24甲基转移酶ERG6编码基因的核苷酸序列如SEQIDNO.9所示，所述delta24-甾醇还原酶DHCR24、鲨烯环氧酶ERG1、甾醇14α-去甲基化酶ERG11、截短的3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶tHMG1、羊毛甾醇合酶ERG7、甾醇C-8异构酶ERG2由GPD启动子和TEF1连接而成的串联启动子调控表达，所述串联启动子的核苷酸序列如SEQIDNO.11所示，所述维生素D3羟化酶VDH由启动子TEF1调控表达。

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百度查询： 江南大学 一种改造酿酒酵母菌以葡萄糖为底物合成活性VD3的方法