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申请/专利权人：宁夏大学
申请日：2024-03-06
公开（公告）日：2024-06-14
公开（公告）号：CN118185986A
主分类号：C12N15/82
分类号：C12N15/82;C12N15/29;A01H5/06;A01H6/82
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.07.02#实质审查的生效;2024.06.14#公开
摘要：本发明公开了一种发根农杆菌介导的宁夏枸杞转LbbHLH36基因方法，涉及植物基因工程技术领域。本发明公开的发根农杆菌介导的宁夏枸杞转LbbHLH36基因方法，将宁夏枸杞幼苗下胚轴处用无菌刀片划伤，将切口处接种于活化后的携带目的基因重组质粒35S::eGFP或pRI101‑LbbHLH36‑eGFP的发根农杆菌K599菌液中，培养得到宁夏枸杞转基因植株。诱导获得的宁夏枸杞转基因荧光毛状根中rolB、NeoR、eGFP、LbbHLH36基因均能扩增出条带，表明以上均为发根农杆菌诱导的转基因毛状根，用该体系将目的基因转入宁夏枸杞根系中是快速可行的。
主权项：1.一种发根农杆菌介导的宁夏枸杞转LbbHLH36基因方法，其特征在于，包括：1将宁夏枸杞种子消毒后培养至萌发获得幼苗，将幼苗下胚轴处用无菌刀片进行划伤；2通过冻融法将携带目的基因的重组质粒转入发根农杆菌中，制备菌液；3将发根农杆菌甘油菌进行划平板培养，挑取单菌落进行PCR验证，将PCR验证阳性的单菌落用无菌枪头点到新的含50mgL硫酸卡那霉素和25mgL硫酸链霉素的LB固体培养基上于28℃生长24～36h备用；4将宁夏枸杞幼苗下胚轴处用无菌刀片进行划伤，将切口处接种于活化后的发根农杆菌中进行侵染；5将侵染后的宁夏枸杞幼苗在16h8h光周期下培养3周，培养温度23～25℃；6用手持式荧光观测仪进行观测，提取诱导出的有荧光的毛状根基因组DNA并进行目的基因的扩增。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 宁夏大学 一种发根农杆菌介导的宁夏枸杞转LbbHLH36基因方法
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