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申请/专利权人：国科大杭州高等研究院
申请日：2024-03-25
公开（公告）日：2024-06-14
公开（公告）号：CN118191181A
主分类号：G01N30/06
分类号：G01N30/06;G01N30/88
优先权：
专利状态码：在审-公开
法律状态：2024.06.14#公开
摘要：本发明公开了一种同时检测肝脏中多种蛋白的方法及试剂盒，属于医学检测技术领域，本发明方法的目标蛋白包括谷氨酸氨基转移酶1蛋白、谷草转氨酶1蛋白、甲硫氨酸腺苷转移酶1A蛋白、谷胱甘肽过氧化物酶1蛋白、细胞角蛋白18和载脂蛋白E，首先对待测肝脏组织进行酶解、脱盐等前处理，得到待测样品溶液，再采用纳升液相色谱‑串联质谱法检测待测样品溶液中目标蛋白对应的六种特征肽段，通过特征肽段的含量计算出对应的目标蛋白的含量。本发明方法便于操作、选择性好、准确度高、灵敏度高，检测限达到pgmL水平，能够实现蛋白质的绝对定量，在抗肝损伤药物研发和药效评价方面具有广泛的应用前景。
主权项：1.一种非疾病诊断和或治疗目的的同时检测肝脏中多种蛋白的方法，其特征在于，目标蛋白包括谷氨酸氨基转移酶1蛋白、谷草转氨酶1蛋白、甲硫氨酸腺苷转移酶1A蛋白、谷胱甘肽过氧化物酶1蛋白、细胞角蛋白18和载脂蛋白E；方法包括以下步骤：1取待测肝脏组织，加入第一缓冲液，匀浆后离心取上清液，得到肝匀浆上清液；将肝匀浆上清液在36～38℃孵育30～50min后，离心，弃去上清液，沉淀物洗涤后，置于第二缓冲液中，再加入胰蛋白酶进行酶解，36～38℃孵育16～22h后，离心，收集滤液并在滤液中加入三氟乙酸终止酶解反应；2活化C18小柱，将步骤1制得的滤液加入至活化后的C18小柱上进行脱盐处理，先用三氟乙酸溶液淋洗，弃去淋洗液，再用含有三氟乙酸的乙腈溶液洗脱，收集洗脱液，对洗脱液进行干燥后，复溶于甲酸水溶液中，得到待测样品溶液；3采用纳升液相色谱-串联质谱法检测待测样品溶液中目标蛋白对应的六种特征肽段，得到待测样品溶液中每一个特征肽段的峰面积，分别代入到相应的标准曲线中，得到待测样品溶液中每一个特征肽段的含量，进一步据此计算出其对应的目标蛋白的含量。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 国科大杭州高等研究院 一种同时检测肝脏中多种蛋白的方法及试剂盒
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