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申请/专利权人：昆明理工大学
申请日：2024-04-16
公开（公告）日：2024-06-21
公开（公告）号：CN118222616A
主分类号：C12N15/83
分类号：C12N15/83;C12N15/53;A01H6/10;A01H5/02
优先权：
专利状态码：在审-公开
法律状态：2024.06.21#公开
摘要：本发明公开了一种彩色马蹄莲VIGS沉默体系的构建方法及其应用，涉及植物基因工程技术领域，本发明通过将可沉默彩色马蹄莲目的基因的特异性核苷酸片段连接至pTRV2的载体上，获得重组载体；将重组载体转入彩色马蹄莲的佛焰苞中并完全浸泡于侵染液中，进行真空处理；经培养后即构建得到彩色马蹄莲的目的基因VIGS沉默体系。本发明构建的沉默载体，能够诱导彩色马蹄莲佛焰苞内源ZhPDS基因发生沉默，有效降低彩色马蹄莲佛焰苞ZhPDS基因表达水平，导致彩色马蹄莲佛焰苞颜色变浅，表明成功构建了适合彩色马蹄莲的VIGS体系，在彩色马蹄莲佛焰苞呈色相关功能基因的研究中具有应用价值。
主权项：1.一种彩色马蹄莲VIGS沉默体系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1将可沉默彩色马蹄莲目的基因的特异性核苷酸片段连接至pTRV2载体的多克隆位点上，获得pTRV2-目的基因特异性片段重组质粒，将重组质粒转化至农杆菌，获得pTRV2-目的基因特异性片段农杆菌，培养收集菌体，获得含有目的基因片段的重组载体的菌液，备用；2用缓冲液分别将pTRV1农杆菌、pTRV2-目的基因特异性片段农杆菌的菌体重悬分散制成农杆菌菌液，再将pTRV1农杆菌与pTRV2-目的基因特异性片段农杆菌菌液按比例混合为侵染液；3选取盛开程度一样的彩色马蹄莲佛焰苞洗净，吸干表面水分，用注射器将含有目的基因片段重组载体的菌液向彩色马蹄莲佛焰苞背部注射进其表皮，待注射完毕后将彩色马蹄莲佛焰苞完全浸泡于侵染液中，进行真空处理；4用无菌水清洗彩色马蹄莲佛焰苞上多余的侵染液，再将其置于15℃下黑暗培养24h，20℃避光条件下培养24h，随后正常培养，即构建得到彩色马蹄莲的目的基因VIGS沉默体系。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 昆明理工大学 一种彩色马蹄莲VIGS沉默体系的构建方法及其应用
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