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申请/专利权人：云南农业大学
申请日：2023-05-12
公开（公告）日：2024-06-14
公开（公告）号：CN116410989B
主分类号：C12N15/29
分类号：C12N15/29;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/00;C12Q1/6895
优先权：
专利状态码：有效-授权
法律状态：2024.06.14#授权;2023.07.28#实质审查的生效;2023.07.11#公开
摘要：本发明涉及一种病毒诱导的三七PDS基因沉默体系及应用，本发明所述的三七PnPDS基因具有如SEQIDNO.1所示的序列，沉默体系携带如SEQIDNO.2所示的序列。通过构建含有PnPDS特异片段的pTRV2病毒沉默载体，利用农杆菌介导法比较了不同浸染方式对三七不同时期幼苗浸染后的效果，发现真空渗透处理三七子叶期幼苗能有效诱导三七PnPDS基因沉默，显著降低了三七叶片中PnPDS基因的表达水平，导致三七叶片呈现漂白化表型。本发明首次成功构建了三七PnPDS基因的VIGS体系，该体系的建立为研究三七基因功能提供了有效的技术手段。
主权项：1.一种三七PnPDS基因VIGS沉默体系的应用：所述应用包括如下步骤：1）设计沉默三七PnPDS基因的特异性核苷酸片段的特异性引物，并在上下游引物两端分别加上线性化pTRV2载体两个末端的同源序列和酶切位点；所述特异性核苷酸片段的序列如SEQIDNO.2所示；2）利用步骤1）中设计引物进行高保真PCR扩增目的基因；3）将步骤2）中所获PCR产物与酶切后的pTRV2载体质粒进行同源重组，获得三七PnPDS基因的VIGS沉默体系的pTRV2-PnPDS；4）通过冻融法将pTRV2-PnPDS转化到农杆菌GV3101感受态细胞中，培养后进行PCR鉴定阳性；5）将含有pTRV1与pTRV2空载、pTRV1与pTRV2-PnPDS重组质粒的农杆菌菌液分别按1：1体积混合，制备浸染液；6）采用真空渗透法对子叶期三七幼苗进行浸染；7）浸染后植株置于暗培养72h后转换为20℃18℃，18h6h光暗周期下培养；8）观察基因沉默植株的表型变化、白化面积和通过荧光定量PCR检测被沉默目标基因的表达量。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 云南农业大学 一种病毒诱导的三七PDS基因沉默体系及应用
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