申请/专利权人：铭道创新(北京)医疗技术有限公司

申请日：2018-12-01

公开（公告）日：2024-06-21

公开（公告）号：CN111527406B

主分类号：G01N33/53

分类号：G01N33/53;G01N33/50

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.21#授权;2020.09.04#实质审查的生效;2020.08.11#公开

摘要：本发明涉及医药领域，提供一种流式细胞仪的淋巴细胞样品的制备方法，其包括:取抗凝血液样品离心，得血细胞沉淀，用PBS溶液稀释，然后加入到含有淋巴细胞分离液的离心管中离心，弃掉血浆，得白膜层细胞；然后加入到离心管中，添加PBS溶液，离心弃上清液，再加入PBS溶液调节细胞浓度，将细胞溶液加入流式管内；然后加入抗体充分混均，避光孵育；离心并弃掉上清液，加入预冷的PBS‑EDTA溶液重悬细胞，即得。本发明方法得到的样品富集纯化了淋巴细胞，充分保存了淋巴细胞的活性，尽可能去除粒细胞、红细胞、血小板等其它血液成分，使需要检测的亚群分群明显纯化，分析检测更加准确，节省了分析抗体和试剂成本。

主权项：1.一种供流式细胞仪分析的人离体免疫细胞中的淋巴细胞样品的制备方法，其特征在于，所述方法包括：1取离体抗凝血液样品离心，分离血浆和血液细胞沉淀，得血液细胞沉淀；2将血液细胞沉淀与PBS溶液进行混合，得血液细胞稀释液；3将血液细胞稀释液加入到含等体积量的淋巴细胞分离液的离心管中离心，去除血浆，得白膜层细胞；4将白膜层细胞加入到离心管中，然后添加PBS溶液混匀，离心，弃上清液，然后加入PBS溶液调整细胞浓度为1.5×106个ml～5×106个ml；5取淋巴细胞悬液加入流式管内；并加入用于标记淋巴细胞亚群的流式抗体，混匀，静置并在2～8℃下避光孵育；其中，所述抗体为抗CD3抗体、lin1、抗CD123的抗体、抗CD11的抗体、CD3FITC、CD8PerCP、CD4PerCP；6加入PBS溶液，混匀，离心并去除未结合抗体；7样本的完成①如果立即上机检测，弃去上清，用2～8℃的PBS-EDTA溶液，混匀，用于流式检测；或②如不能立即检测，加入福尔马林溶液，混匀，静置于2～8℃避光保存；检测前各管加入PBS溶液离心弃掉上清液；用2～8℃的PBS-EDTA溶液，混匀，用于流式检测；所述PBS-EDTA溶液为pH7.2～7.4的含有0.005-0.05MPBS和终浓度为2-3mMEDTA的混合溶液；所述PBS溶液为pH7.2～7.4的0.005-0.05MPBS溶液。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 铭道创新(北京)医疗技术有限公司 一种用于流式细胞仪分析的淋巴细胞样品的制备方法

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